廣西甜茶二萜類成分的研究

1、廣西甜茶二萜類成分的研究【摘要】 目的 研究廣西甜茶Rubus suavissimus S.Lee葉中的活性成分。方法利用反復(fù)硅膠柱層析對廣西甜茶水提物進(jìn)行分離和純化，通過IR，MS，NMR等光譜技術(shù)和化學(xué)方法鑒定出其結(jié)構(gòu)。結(jié)果從廣西甜茶葉中分離得到4個(gè)對映-貝殼杉型二萜類化合物，分別鑒定為ent-16,17-dihydroxy-kauran -3-one ()，ent-16，17-dihydroxy-kauran-19-oic acid（)，ent-kauran-16，17-diol-3-one-17-O-D-glucoside()，rubusoside()。結(jié)論化合物，均為首次從該植物中分

2、得。 【關(guān)鍵詞】 廣西甜茶；對映-貝殼杉；二萜Abstract:ObjectiveTo study the bioactive constituents from leaves of Rubus suavissimus S.Lee. Methods Column chromatography with silic gel was employed to isolate and purify the ingredients. Their structures were elucidated by means of IR,MS,NMR and chemical methods respective

3、ly. ResultsFour compounds were isolate and elucidated as ent-16,17- dihydroxy-kauran -3-one (),ent-16,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid（)，ent-kauran-16,17-diol-3-one-17-O-D-glucoside() and rubusoside(),respectively. ConclusionCompounds I and were separated from Rubus suavissimus S.Lee for the first ti

4、me.Key words:Rubus suavissimus S.Lee; Ent-kauran; Diterpenoids 薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬植物（Rubus L.），現(xiàn)知約有七百余種，分布于全世界，主產(chǎn)地位于北半球溫帶，我國有194種。本屬植物含有維生素、揮發(fā)油、有機(jī)酸、黃酮、萜類及甾體類1。 廣西甜茶Rubus suavissimus S.Lee是薔薇科懸鉤子屬植物一個(gè)新種，主產(chǎn)于廣西桂林、金秀、桂平等縣。甜茶葉民間應(yīng)用悠久,長期以來除當(dāng)茶葉飲用之外,還可藥用。其葉具有清熱潤肺、祛痰止咳等功效，并用于糖尿病和高血壓等癥的輔助2。國外報(bào)道,臨床上每天服用甜茶提取物可預(yù)防或改

5、善炎癥、喉痛、花粉過敏等。我們對廣西甜茶的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從其水提液中分離得到4個(gè)化合物：為對映-16,17-二羥基-貝殼杉-3-酮(ent-16,17 -dihydroxy-kauran-3-one)，為對映-16,17-二羥基-貝殼杉-19-羧酸(ent-16,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid)，為對映-貝殼杉-16,17-二醇-3-酮-17-O-D-葡萄糖苷（ent-kauran-16,17-diol-3-one -17 -O-D- glucoside）,為懸鉤子苷（rubusoside）。其中化合物，均為首次從該植物中分得。1 儀器與材料 熔點(diǎn)儀用Kaf

6、ler顯微熔點(diǎn)測定儀測定（溫度計(jì)未校正）；紅外光譜用EQUINOX55型紅外光譜儀測定。質(zhì)譜用ZAB-HS型雙聚焦磁質(zhì)譜儀；核磁共振用Varian-INOVA500MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀；柱層析和薄層層析硅膠均由青島海洋化工廠生產(chǎn)。顯色劑為碘蒸氣和5%磷鉬酸乙醇溶液。所用試劑均為分析純。藥材于200407采于廣西金秀縣，由廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院劉基柱老師鑒定為Rubus suavissimus S.Lee。2 提取與分離 取干燥的廣西甜茶葉10 kg粉碎，粗粉用熱水煎煮3次 ，合并煎煮液，濃縮干燥得到2 kg浸膏，粉碎，用70%乙醇沉淀出不溶物，過濾，濾液加23倍量水，水浴蒸至無醇味。濾液依次用

7、石油醚（6090）、氯仿、醋酸乙酯進(jìn)行反復(fù)萃取，得到石油醚部位、氯仿部位和醋酸乙酯部位。 將氯仿萃取物46.2 g 經(jīng)硅膠（200目）柱層析，用石油醚-醋酸乙酯梯度洗脫，得到化合物，。將醋酸乙酯萃取物70.0g經(jīng)硅膠（200目）柱層析，用氯仿-甲醇梯度洗脫進(jìn)行粗分，粗分后石油醚-醋酸乙酯反復(fù)柱層析，得到化合物、。3 結(jié)構(gòu)鑒定 化合物：白色針狀結(jié)晶，mp192193,易溶于氯仿，甲醇。FAB-MS 給出分子離子峰m/z 321M+1+，同時(shí)給出303M-H2O+H+ ,285M-2H2O+H+，分子式為C20H32O3，IR(KBr)cm-1:3 542,3 273(-OH),2 940，1 6

8、92(C=O),1 446，1 068，提示分子結(jié)構(gòu)中可能存在羥基和羰基。1H-NMR （CDCl3)ppm譜1.03（3H,s）,1.08(3H,s)，1.10（3H,s）證實(shí)有3個(gè)甲基存在,3.71(1H,d,J=11.0),3.78(1H,d,J=11.0)是-CH2OH基團(tuán)上的兩個(gè)不對稱氫。 13 C-NMR（CDCl3）ppm譜218.1吸收峰證實(shí)羰基存在，分子的不飽和度為5，去除一個(gè)羰基，分子其余骨架不飽和度為4，且其碳譜信號均在高場，說明其骨架具有4個(gè)環(huán)，可能是一個(gè)四環(huán)二萜類化合物。有2個(gè)碳的吸收峰在60.085.0 ppm之間，說明這2個(gè)碳原子連有羥基，其中66.2是C-17的

9、吸收峰，81.7是C-16的吸收峰，且16-C處于位。查閱相關(guān)3，4發(fā)現(xiàn),其結(jié)構(gòu)應(yīng)為對映-16,17-二羥基-貝殼杉-3-酮(ent-16,17 -dihydroxy -kauran-3-one)，碳譜數(shù)據(jù)見表1，該化合物首次從該植物中分得。1 化合物：白色塊狀結(jié)晶（甲醇），mp 266268。FAB-MS 給出分子離子峰m/z 337M+1+，分子式為C20H32O4,IR(KBr)cm-1:3 436，3 257（-OH），1 697（C=O)，1 466，1 229，1 167。13C-NMR（CD3OD）和DEPT可以觀察到20個(gè)碳原子，其中存在2個(gè)CH3，10個(gè)CH2,3個(gè)CH和5個(gè)

10、季碳。1H-NMR（CD3OD）ppm譜1.02（3H,s），1.09(3H,s)證實(shí)有2個(gè)甲基，3.67(1H,d,J=11.0), 3.78 (1H,d,J=11.0) 是-CH2OH基團(tuán)上的兩個(gè)不對稱氫，4.41（1H，t）是C17的-OH的氫信號。13 C-NMR（CD3OD）ppm譜181.7吸收峰證實(shí)羧基的存在，低場只有這一個(gè)吸收峰，其余均在高場且都是飽和碳，在60.085.0 ppm之間有2個(gè)碳的吸收峰，說明2個(gè)碳原子連有羥基，其中66.9是C-17的吸收峰，82.9是C-16的吸收峰，且16-C處于位。綜上所述，化合物為貝殼杉型四環(huán)二萜化合物，且數(shù)據(jù)與5報(bào)道的對映-16,17-

11、二羥基-貝殼杉-19-羧酸（ent-16,17- dihydroxy- kauran-19-oic acid）一致，碳譜數(shù)據(jù)見表1，該化合物首次從該植物中分得。 化合物：無色針狀結(jié)晶，mp 202203。分子式C26H42O8，IR(KBr)cm-1: 3 411(-OH),2 932，1 704(C=O),1 424，1 254，1 026,提示存在羥基、羰基。13C-NMR和DEPT譜可觀察到26個(gè)碳原子，其中存在3個(gè)CH3，10個(gè)CH2 ，8個(gè) CH，5個(gè)季碳。13C-NMR (DMSO)ppm譜216.5吸收峰證實(shí)羰基的存在,79.4為季碳，提示該碳連有羥基。104.4，73.7，76

12、.3，70.0，76.9，61.0一組數(shù)據(jù)表明該化合物連有一分子葡萄糖。1H-NMR（DMSO)ppm譜0.93(3H,s)，0.99（3H，s）和1.00（3H，s）證明存在3個(gè)CH3，5.06(1H,d)是糖的端基碳上的質(zhì)子，2.96-3.17（6H,m）是糖上的6個(gè)氫。查閱有關(guān)文獻(xiàn)6發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)類型屬于貝殼杉型化合物,且光譜數(shù)據(jù)與對映-貝殼杉-16,17-二醇 -3-酮-17-O-D-葡萄糖苷（ent-kauran-16,17- diol-3-one -17-O-D-glucoside）一致，碳譜數(shù)據(jù)見表1。 化合物：白色針狀結(jié)晶，mp177178。分子式C32H50O13，IR(KBr)

13、cm-1： 3 390(-OH),2 928,1 723(C=O),1 454,1 073，提示存在羥基、羰基。13C-NMR和DEPT譜可觀察到32個(gè)碳原子，其中存在2個(gè)CH3，12個(gè)CH2 ，12個(gè) CH，6個(gè)季碳。13C-NMR (DMSO)ppm譜175.5吸收峰證實(shí)羧基的存在，153.0和104.1說明結(jié)構(gòu)中存在C=CH2片斷,85.3為季碳，提示該碳可能連有氧原子。97.8，73.6，76.4，70.4，76.9，61.2是與 13-C相連的葡萄糖的碳信號，94.0，72.5， 77.0，69.5，77.6，60.5則是與19-C相連的葡萄糖的碳信號，兩個(gè)甲基信號分別是15.2和2

14、8.1。1H-NMR13（DMSO）ppm譜0.87（3H,s），1.13(3H,s)證實(shí)有2個(gè)甲基，2.92-3.66（12H,m）是兩分子葡萄糖上所連的12個(gè)氫，4.29（1H,d），4.45（1H,d）是C=CH2片段上的二氫，5.13(1H,d),5.27(1H,d)分別是兩個(gè)葡萄糖端基碳上的質(zhì)子。查閱相關(guān)文獻(xiàn)7，發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)屬于貝殼杉型四環(huán)二萜類化合物，且在13-C和19-C上分別連有一分子葡萄糖，光譜數(shù)據(jù)與懸鉤子苷（rubusoside）一致，碳譜數(shù)據(jù)見表1。表1 化合物的13C-NMR譜數(shù)據(jù)（略） 致謝 紅外、核磁共振、質(zhì)譜均由中山大學(xué)分析測試中心測定，謹(jǐn)致謝意！【文獻(xiàn)】 1劉明生

15、,李 銑,朱廷儒. 懸鉤子屬植物化學(xué)成分的研究概況J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1994,11（1）：68.2黃漢強(qiáng). 甜茶應(yīng)用研究J.時(shí)珍國藥研究，1996,7（2）:117.3Wang H,Zhang X F,Luo X D. An ent-kaurane diterpene from Euphorbia wallichiiJ.Nat Prod Res Dev. 2006,18：53.4Tanaka N,Murakami T,Saiki Y. et al. Chemical chemotaxnomiical studies of Filices.L.Chemical studies on the

16、constituents of Dipteris conjugate ReinwJ.Chem.Pharm. Bull.1985,33：152.5Yamasaki K, Kohda H, Kobayashi T, et al. Application of nuclear magnetic resonance spectroscopy to chemistry of glycoside;structures of paniculosides-,-,-,-,and-,diterpene glucosides of Stevia paniculata LagJ. Chem.Pharm.Bull.1977,25(11)：2895.6Hirono S,Chou W H,Kas