貓松果腺提取物(MSTQW)對免疫缺陷

1、貓松果腺提取物（MSTQW）對免疫缺陷小鼠免疫功能的影響張世華 陳春林（重慶市養(yǎng)豬科學(xué)研究院 重慶·榮昌 402460）摘 要：連續(xù)注射貓松果腺提取物（MSTQW），觀察其對免疫缺陷小鼠免疫功能的影響。結(jié)果表明，MSTQW對免疫器官肝、脾、胸腺的增重作用明顯（P<0.01），能增強小鼠抗疲勞能力（P<0.01）；淋巴細胞比例升高（P<0.01），噬酸性白細胞、噬中性白細胞比例降低（P<0.01），巨噬細胞吞噬功能顯著增強（P<0.01），淋巴細胞形成率、半數(shù)溶血素值上升（P<0.01）。提示出MSTQW對免疫缺陷小鼠的整體免疫功能具有顯著的恢復(fù)作用

2、。關(guān)鍵詞：松果腺 免疫缺陷小鼠 免疫功能 影響松果腺（Pineal gland，PND）是一個多功能器官，又稱為神經(jīng)內(nèi)分泌傳感器。褪黑素（Melatonin，MT、MLT）是松果腺分泌的一種重要激素，參與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)的調(diào)控，除了參與性腺、晝夜節(jié)律、腎上腺、誘導(dǎo)睡眠等功能調(diào)節(jié)外，還具有免疫調(diào)節(jié)，抗氧化、抗衰老及抗腫瘤等功能；能從不同層次對免疫應(yīng)答發(fā)揮上調(diào)作用1、2、3。對PND、MT免疫調(diào)節(jié)作用的深入探討，有助于對免疫過程的認識和臨床應(yīng)用價值的了解，為此，我們采用貓的松果腺提取物，研究其對免疫缺陷型小鼠免疫功能的影響?，F(xiàn)將實驗結(jié)果報道如下：1 材料與方法1.1 試驗動物 昆明系小白鼠，兼用

3、，體重18.022.0g，由四川瀘州醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供；健康家貓，4070日齡，市購。1.2 藥品與試劑 氫化可的松注射液（HC），西南藥業(yè)股份有限公司；滅菌Alsever's溶液，無鈣鎂Hank's溶液，淋巴細胞分層液，1%新鮮雞紅細胞懸液，1%兔紅細胞懸液，10%豚鼠新鮮血清，0.5%淀粉生理鹽水；犢牛血清，成都生物藥械廠。1.3 試驗方法1.3.1 貓松果腺提取物（MSTQW）的制備 取健康家貓，避光4h后宰殺，無菌取下松果腺，冷凍3h，加滅菌生理鹽水、甲醇（2:1）液充分溶解，氯仿脫脂，靜置，吸上層液，離心10min，得粗品，40ºC避光蒸餾，配成含量為0

4、.01g/ml的溶液，置4ºC冰箱，備用。1.3.2 動物分組與給藥方法 試驗設(shè)正常對照模型組和免疫缺陷模型組。1.3.2.1 正常對照模型組的建立6、7 I組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射生理鹽水，次1d，連續(xù)10d；II組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射生理鹽水6d后，腹腔注射0.5%淀粉生理鹽水4d，次1d；III組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射生理鹽水6d后，腹腔注射1%兔紅細胞（HRBC）4d，次1d。1.3.2.2 免疫缺陷模型組的建立6、7 IV組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射HC，3d后，生理鹽水7d，次1d；V組：按0.4ml/只劑量，

5、小白鼠皮下注射HC 3d、生理鹽水3d，腹腔注射0.5%淀粉生理鹽水4d，次1d；VI組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射HC 3d、生理鹽水3d，腹腔注射1%兔紅細胞（HRBC）4d，次1d；VII組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射HC 3d后，MSTQW 7d，次1d；VIII組：按0.4ml/只劑量，小白鼠皮下注射HC 3d、MSTQW 7d后，腹腔注射0.5%淀粉生理鹽水4d，次1d；XI組：小白鼠皮下注射HC 3d、MSTQW 7d后，腹腔注射1%兔紅細胞（HRBC）4d，次1d。1.3.3 觀察指標及方法1.3.3.1 肝、脾、胸腺指數(shù)測定 各組取小鼠10只，稱重（P），

6、眼球無菌采血，肝素抗凝，備用；撲殺各小鼠，分別取肝、脾、胸腺，稱重（Q），臟器指數(shù)=Q/P。1.3.3.2 抗疲勞能力的測定 隨機各取小鼠5只，分別放于玻璃缸中（盛水約2/3），分別計時，以其掙扎時間長短來衡量其抗疲勞能力。1.3.3.3 白細胞分類記數(shù)：參照文獻7外周血白細胞分離、淋巴細胞計數(shù)方法。1.3.3.4 巨噬細胞吞噬率及吞噬指數(shù)測定 、V、組小鼠在采血前0.5h腹腔注射1%雞紅細胞懸液0.4ml。頸椎脫臼處死小鼠，無菌取腹液涂片，瑞氏染色，鏡檢。每片計數(shù)200個巨噬細胞（macraphage，M）。吞噬率=（吞噬雞紅細胞的M/M總數(shù)）×100%吞噬指數(shù)=（被吞噬的雞紅細胞

7、數(shù)/M總數(shù)）×100%。1.3.3.5 E-玫瑰花環(huán)形成率測定 、組小鼠，連續(xù)觀察7日后，眼眶采血，肝素抗凝，用淋巴細胞分層液分離淋巴細胞，Hank's液洗滌23次，測定EA%。1.3.3.6 外周血溶血素測定 、組小白鼠腹腔注射1%雞紅細胞懸液0.2ml進行免疫，免疫后第7d，小白鼠眼眶采血，分離血清，測定溶血素含量。1.3.4 數(shù)據(jù)處理 以上各組數(shù)據(jù)均采用t檢驗。2、結(jié)果2.1 對肝、脾、胸腺的影響：HC對小鼠肝、脾、胸腺均具有極顯著的損傷作用（P<0.01），致使臟器腫大明顯；MSTQW使肝、脾的臟體比顯著增大（P<0.01），但與正常對照組相比，差異不顯著

8、性（P0.05）。（結(jié)果見表1）表1 肝、脾、胸腺的臟體比值（n=10，X±S ）組別 藥物 劑量（ml） 臟/體（10-2） 肝 脾 胸腺 生理鹽水 0.4 4.36±0.70 0.39±0.09 0.62±0.06 HC+生理鹽水 0.4 5.21±0.231 0.56±0.081 0.75±0.071 HC+MSTQW 0.4 5.85±0.272 0.65±0.082 0.60±0.023注：與正常組對照比較1P<0.01，與模型對照比較及正常對照比較2P<0.01， 與模型

9、對照比較3P<0.01，2.2 對小鼠抗疲勞能力的影響 HC使小鼠抗疲勞能力大大降低（P<0.01），但在給予MSTQW后，其抗疲勞能力得到明顯的恢復(fù)（P<0.01）。（結(jié)果見表2）表2 MSTQW對小白鼠抗疲勞的作用。（n=5 X±S）組別 藥物 劑量（ml/只） 抗疲勞時間值(hr) 生理鹽水 0.4 8.11±0.48 HC+生理鹽水 0.4 5.44±0.681 HC+MSTQW 0.4 12.58±0.842注：與正常對照比較1P<0.01，與模型及正常對照比較2p<0.012.3 對外周血白細胞的影響 HC使淋巴

10、細胞下降明顯(P<0.05)。MSTQW使淋巴細胞比例增高（P<0.01）；嗜中性白細胞降低低于模型對照組（P<0.01）；嗜酸性白細胞下降（P<0.01）；嗜堿性白細胞呈下降趨勢。表3：MSTQW對外周血白細胞的作用（n=10 X±S）組別 藥物 劑量(ml/只) 淋巴細胞（%） 嗜中性白細胞（%） 嗜酸性白細胞（%） 嗜堿性白細胞（%） 生理鹽水 0.4 65.8±4.1 28.3±4.8 3.8±0.4 0.51±0.07 HC+生理鹽水0.4 60.7±6.84 34.4±2.81 5.4&#

11、177;0.81 0.42±0.03 HC+MSTQW 0.4 72.2±5.42 26.4±5.53 3.2±0.52 0.41±0.091注：與正常對照比較1P<0.01，與模型及正常對照比較2P<0.01，與模型對照比較3P<0.01，與正常對照比較4P<0.052.4 對腹腔巨噬細胞功能的影響 HC使巨噬細胞吞噬率及吞噬指數(shù)降低（P<0.01）；MSTQW則顯著升高(P<0.01)，且明顯高于正常對照組的吞噬功能(P<0.01)。表4 MSTQW對巨噬細胞的吞噬功能的影響（ X±S）組

12、別 鼠數(shù)（N） 藥物 劑量(ml/只) 吞噬率（%） 吞噬指數(shù) 10 生理鹽水+淀粉 0.4 75.35±0.90 2.03±0.12 8 HC+生理鹽水+淀粉 0.4 68.47±1.001 1.90±0.081 9 HC+MSTQW+淀粉 0.4 87.48±1.882 2.45±0.142注：與正常對照比較1P<0.01，與模型及正常對照比較2P<0.12.5 對T淋巴細胞形成率的影響 HC可致T淋巴細胞形成率降低（P<0.01）；MSTQW能明顯拮抗HC的免疫損害作用（P<0.01），結(jié)果見表5。表5

13、MSTQW對Erosettes形成的關(guān)系（X±S）組 別 鼠數(shù)（N） 藥物 劑量(ml/只) 形成率（%） 9 生理鹽水 0.4 34.18±4.72 8 HC+生理鹽水 0.4 20.28±7.821 9 HC+MSTQW 0.4 33.46±3.782注：相對于正常對照1P<0.01，相對于模型對照2P<0.012.6 對體液免疫功能的影響 HC組小鼠的半數(shù)溶血素數(shù)值水平顯著下降，P0.01；MSTQW組小鼠的半數(shù)溶血素數(shù)值水平顯著升高，P0.01。（結(jié)果見表6）表6： MSTQW對溶血素值的影響（ X±S）組別 鼠數(shù)（N） 藥

14、物 劑量(ml/只) 半數(shù)溶血素數(shù)值(HC50) 10 生理鹽水+HRBC 0.4 59.82±7.31 8 HC+生理鹽水+HRBC 0.4 43.44±8.651 10 HC+MSTQW+HRBC 0.4 62.50±5.012注：相對于正常對照1P0.01，相對于模型對照2P0.013 討論3.1 在動物模型建成以后，免疫缺陷組小鼠肝、脾和胸腺明顯萎縮，臟體比減?。≒0.01，這種由糖皮質(zhì)激素引起的肝、脾、胸腺萎縮現(xiàn)象與文獻6、18的報道一致；但是7d后，免疫缺陷組小鼠臟體比增大（P0.01，可能是由于組織變性（如脂肪變性等），或因萎縮而致的一種代償性增生反

15、應(yīng)引起的。朱建軍等（1998）1報道，MT可增加免疫器官的重量，試驗組的肝臟/體重值增大（P0.01，與許建明等11報道，0.110mg/·d的MT可使血漿轉(zhuǎn)氨酶及肝勻漿丙二醛含量明顯下降的結(jié)果一致，通過抗脂質(zhì)過氧化環(huán)節(jié)而保護肝臟，促肝細胞更新增殖。徐峰等12報道，敘利亞倉鼠皮下注射MT（25ug），持續(xù)10周，實驗鼠脾的相對或絕對重量均增加，這一結(jié)果在本實驗中得到進一步證實。胸腺的臟/體值變化不大（P0.05），可能與MT主要作用于胸腺髓質(zhì)，而對皮質(zhì)影響不大13有關(guān)。3.2 李俊，徐叔云等17給小鼠連續(xù)注射MT1、3、5、7d，均能明顯增加淋巴細胞的數(shù)量；Mmaestroni20報

16、道，MT能誘導(dǎo)T淋巴細胞的增殖，并增強其活性；Carcieo MC等（1992）15每天給予MT（10mg/），持續(xù)4d，體外測得T淋巴細胞的活力能大大增強。MSTQW使淋巴細胞比例增高（P<0.01），Erosettes形成率顯著高于模型對照組（P0.01），表明MSTQW具有促進T淋巴細胞的增殖，能恢復(fù)免疫缺陷小鼠T淋巴細胞的活力。3.3 M是MT的靶細胞之一，且MT能促進M的抗原遞呈，進而增強M活性和吞噬功能19。據(jù)徐峰等（1996）14報道，MT能拮抗異常光照對小鼠吞噬細胞功能的影響，能顯著提高其吞噬能力。HC使巨噬細胞吞噬率及吞噬指數(shù)降低（P<0.01）；MSTQW則顯著

17、升高(P<0.01)，與文獻14、19、21的結(jié)果是一致。3.4 T淋巴細胞是MT作用的靶細胞之一，受MT的誘導(dǎo)15，產(chǎn)生免疫因子IL1、IL4和IFN；MT能直接促使淋巴細胞釋放出內(nèi)源性阿片肽，增強體液免疫的機能20；李俊、徐叔云等17發(fā)現(xiàn)MT（1g×3d，ih）對小鼠腹腔M IL1有明顯的促進作用；魏偉等（1992）19發(fā)現(xiàn)松果腺能間接誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生IL1；Maestroni等20研究表明，IL1還參與抗原或絲裂原對T淋巴細胞的激活、IL2的產(chǎn)生及IL2受體的表達，均能增強B淋巴細胞產(chǎn)生抗體。HC組小鼠的半數(shù)溶血素值水平顯著下降（P0.01）；MSTQW組小鼠的半數(shù)溶血素值水

18、平顯著升高（P0.01），表明，MSTQW可使免疫缺陷小鼠的體液免疫狀況得到有效的改善。3.5 據(jù)魏偉，徐叔云報道3，低劑量（10ug，10d）MT可使T淋巴細胞功能低下者得以恢復(fù)，使過高的IL1降低；朱金華等15認為，松果腺分泌的MT可從不同層次對免疫應(yīng)答發(fā)揮主調(diào)作用，且MT能拮抗很多免疫損傷效應(yīng)，使其免疫功能得以恢復(fù)。本試驗采用貓松果腺提取物替代MT，持續(xù)用0.4ml（0.4個劑量單位）MSTQW連續(xù)投藥，對免疫功能缺陷型小鼠的整體免疫功能有極顯著的增強作用。Extralt Of Pineal Gland Of Cat Effect Of Immune Defect Mouse Zhang

19、 Shihua Chen Chunlin(Chongqing Swine Science Academy Rongchang 402460)Abstrat: Injecting extralt of pineal gland of cat continuously in 0.4ml(0.4 dose unit) , to study the effect of immune on mouse。 The rsult showed,that weight of liver,spleen or thymus indexnuber increased significantly (P<0.01)

20、；the lymphocyte prortion most heighten significantly(P<0.01)，but acidlity leucocyte proportion decreased；the faction of phagoyte vitality of lymphocyte and half value of serum hemolysin increase significantly(P<0.01) 。 Key Word: Pineal Gland Immune Defect Mouse Immune Faction Effect注：原文發(fā)表于貴州畜牧

21、獸醫(yī)2002年第3期（總99期）參考文獻：1.朱建軍。褪黑素的合成及其生理和藥理活性，國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊1998;25(5):2662702.沈玉先、矜德意、魏偉等。松果腺及褪黑素與衰老J.中國藥理學(xué)通報.1999;15(5):3873403.魏偉.褪黑素的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫作用及其應(yīng)用前景.中國藥理學(xué)通報.1997;13(3):1962004.徐叔云、卞如濂、陳修主編.藥理實驗方法學(xué)M.人民衛(wèi)生出版社.1982:9389895.王世若、王興龍、韓文瑜主編.現(xiàn)代動物免疫學(xué)M.吉林科學(xué)技術(shù)出版社.3954046.郭培京?！皬姸堋睕_劑用于細胞免疫缺陷小鼠的試驗.免疫學(xué)雜志.1996;(10):37397.朱立平、陳學(xué)清主編.免疫學(xué)常用實驗方法.人民軍醫(yī)出版社.175186。8杜念興,主編.獸醫(yī)免疫學(xué)M.中國農(nóng)業(yè)出版社.1998:1962219.張淼濤.中草藥對小白鼠巨噬細胞吞噬力的影響J.黑龍江畜牧獸醫(yī).2000;(12):2610.中國生化藥物雜志.1998;19(3):12112311.許建明.