第三章消毒與滅菌

1、第三章第三章 消毒、滅菌與微生物實(shí)驗(yàn)室消毒、滅菌與微生物實(shí)驗(yàn)室 的生物安全的生物安全 1.滅菌（滅菌（sterilization） 指殺滅物體中所有病原微生物和非病原指殺滅物體中所有病原微生物和非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。 2.消毒（消毒（disinfection） 指殺滅物體中的病原微生物的方法。消指殺滅物體中的病原微生物的方法。消毒只要求達(dá)到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及其芽胞、孢子毒只要求達(dá)到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及其芽胞、孢子并不嚴(yán)格要求全部殺死。并不嚴(yán)格要求全部殺死。 3.防腐（防腐（antisepsis） 指阻止或抑制微生

2、物生長繁殖的方法。指阻止或抑制微生物生長繁殖的方法。 4.無菌（無菌（asepsis）指沒有活的微生物的狀態(tài)。采取防止或杜絕任指沒有活的微生物的狀態(tài)。采取防止或杜絕任何微生物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體或其它物體的方法，稱為無菌法。以無菌法進(jìn)何微生物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體或其它物體的方法，稱為無菌法。以無菌法進(jìn)行的操作稱為無菌操作。行的操作稱為無菌操作。 第一節(jié)第一節(jié) 物理因素對微生物的影響物理因素對微生物的影響 物理因素物理因素溫溫 度度輻射輻射干干 燥燥超聲波超聲波微微 波波濾過除菌濾過除菌(一)低溫低溫 大多數(shù)微生物對低溫具有很強(qiáng)的抵抗力大多數(shù)微生物對低溫具有很強(qiáng)的抵抗力 。低溫下，代謝。低溫下，代謝活動(dòng)降低到最

3、低水平，生長繁殖停止，但仍可長時(shí)間保持活活動(dòng)降低到最低水平，生長繁殖停止，但仍可長時(shí)間保持活力。力。 意義：意義：保存菌種、毒種、疫苗等保存菌種、毒種、疫苗等 一一.溫溫 度度 熱力滅菌法：熱力滅菌法：干熱滅菌干熱滅菌 和濕熱滅菌兩種方法。和濕熱滅菌兩種方法。 二者比較：二者比較：在同一溫度下，后者效力比前者為大。在同一溫度下，后者效力比前者為大。 原因：原因：（1 1）濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固；）濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固； （2 2）濕熱的穿透力比干熱大；）濕熱的穿透力比干熱大； （3 3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。）濕熱的蒸汽有潛熱存在。 (二二)高溫：高溫：高溫對微生物具有明顯的致死作用

4、高溫對微生物具有明顯的致死作用. (1)火焰滅菌法火焰滅菌法 :火焰直接燒灼，如接種環(huán)火焰直接燒灼，如接種環(huán) 。 (2)熱空氣滅菌法熱空氣滅菌法 : 干熱滅菌器適用于高溫下干熱滅菌器適用于高溫下 不損壞、不變質(zhì)的物品不損壞、不變質(zhì)的物品,如如 玻璃器皿、瓷器等的滅菌。玻璃器皿、瓷器等的滅菌。 滅菌溫度需滅菌溫度需160維持維持2 h 。 1.干熱滅菌法干熱滅菌法 (1)煮沸滅菌煮沸滅菌 : 煮沸煮沸1020 min可殺死所有細(xì)菌的繁殖可殺死所有細(xì)菌的繁殖 體，芽胞常體，芽胞常需煮沸需煮沸12 h才被殺死才被殺死 。用于飲水、一般器械。用于飲水、一般器械 如刀剪的消毒。如刀剪的消毒。 (2)巴氏

5、消毒法巴氏消毒法 :以較低溫度殺滅液態(tài)食品中的病原菌或特定微生物，以較低溫度殺滅液態(tài)食品中的病原菌或特定微生物，而又不致嚴(yán)重?fù)p害其營養(yǎng)成分和風(fēng)味的消毒方法而又不致嚴(yán)重?fù)p害其營養(yǎng)成分和風(fēng)味的消毒方法 . 1.低溫維持巴氏消毒法低溫維持巴氏消毒法 636530min 2.高溫瞬時(shí)巴氏消毒法高溫瞬時(shí)巴氏消毒法 717215s 3.超高溫巴氏消毒法超高溫巴氏消毒法 13212s 2.濕熱滅菌法濕熱滅菌法 （3）流通蒸汽滅菌法流通蒸汽滅菌法 ：是一種常壓蒸汽消毒法，細(xì)是一種常壓蒸汽消毒法，細(xì)菌繁殖體菌繁殖體15-30分鐘可殺滅，但芽孢不全部被殺滅。分鐘可殺滅，但芽孢不全部被殺滅。 (4) 間歇滅菌法間歇

6、滅菌法 （反復(fù)多次流通蒸汽）（反復(fù)多次流通蒸汽） 100維持維持30min 溫箱過夜溫箱過夜 100維持維持30min 溫溫箱過夜箱過夜 100維持維持30min 溫箱過夜溫箱過夜 100維持維持30min。 此法常用于一些不耐高溫的培養(yǎng)基，如雞蛋培養(yǎng)基、此法常用于一些不耐高溫的培養(yǎng)基，如雞蛋培養(yǎng)基、血清培養(yǎng)基、糖培養(yǎng)基的滅菌血清培養(yǎng)基、糖培養(yǎng)基的滅菌 。 （5）高壓蒸汽滅菌法）高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌器：高壓蒸汽滅菌器：15磅磅/平方平方英寸，英寸，121.3溫度下維持溫度下維持1520min 。 應(yīng)用此法滅菌，一定要充分應(yīng)用此法滅菌，一定要充分排除滅菌器內(nèi)原有的冷空氣。排除滅菌器內(nèi)原有

7、的冷空氣。用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、耐熱藥品、手術(shù)敷料等。耐熱藥品、手術(shù)敷料等。 手提式高壓蒸汽滅菌器手提式高壓蒸汽滅菌器輻射：輻射：能量通過空間傳遞的一種物理現(xiàn)象。按輻能量通過空間傳遞的一種物理現(xiàn)象。按輻 射對微生物的滅活作用分：射對微生物的滅活作用分：1.非電離輻射非電離輻射: 可見光、日光、紫外線可見光、日光、紫外線2.電離輻射電離輻射: 、 、射線以及高能質(zhì)子、射線以及高能質(zhì)子、 中子等中子等 二二. 輻輻 射射 (一一)非電離輻射非電離輻射 1.可見光可見光: 指在紅外線和紫外線之間的肉眼可見的光線，指在紅外線和紫外線之間的肉眼可見的光線，其波長其波長400

8、800nm?？梢姽饩€對微生物一般無多大影。可見光線對微生物一般無多大影響，但長時(shí)間作用也能妨礙微生物的新陳代謝與繁殖，故響，但長時(shí)間作用也能妨礙微生物的新陳代謝與繁殖，故培養(yǎng)細(xì)菌和保存菌種，均應(yīng)置于陰暗之處。培養(yǎng)細(xì)菌和保存菌種，均應(yīng)置于陰暗之處。 光感作用光感作用 :指可見光具有微弱的殺菌作用，若將某些染料指可見光具有微弱的殺菌作用，若將某些染料如結(jié)晶紫、美藍(lán)、汞溴紅、伊紅、沙黃等加到培養(yǎng)基或涂如結(jié)晶紫、美藍(lán)、汞溴紅、伊紅、沙黃等加到培養(yǎng)基或涂在外傷表面，能增強(qiáng)可見光的殺菌作用在外傷表面，能增強(qiáng)可見光的殺菌作用 。2.陽光陽光: 直射日光有強(qiáng)烈的殺菌作用，是天然的殺菌因直射日光有強(qiáng)烈的殺菌作用

9、，是天然的殺菌因素。許多微生物在直射日光的照射下，半小時(shí)到數(shù)小素。許多微生物在直射日光的照射下，半小時(shí)到數(shù)小時(shí)即可死亡。芽胞對日光照射的抵抗力比繁殖體大得時(shí)即可死亡。芽胞對日光照射的抵抗力比繁殖體大得多，往往需經(jīng)多，往往需經(jīng)20h才死亡。日光的殺菌效力因地、因才死亡。日光的殺菌效力因地、因時(shí)及微生物所處環(huán)境不同而異時(shí)及微生物所處環(huán)境不同而異 。 3.紫外線紫外線 波長波長200-300nm部分有殺菌作用。實(shí)驗(yàn)室常使用的紫外部分有殺菌作用。實(shí)驗(yàn)室常使用的紫外線殺菌燈紫外線波長為線殺菌燈紫外線波長為253.7nm。常用于微生物實(shí)驗(yàn)室、。常用于微生物實(shí)驗(yàn)室、無菌室、手術(shù)室等的空氣消毒，或用于不能用高

10、溫或化學(xué)藥無菌室、手術(shù)室等的空氣消毒，或用于不能用高溫或化學(xué)藥品消毒的物品的表面消毒。還可用于誘變育種。品消毒的物品的表面消毒。還可用于誘變育種。殺菌機(jī)理：殺菌機(jī)理：（1）損害）損害DNA構(gòu)型，影響構(gòu)型，影響DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄復(fù)制和轉(zhuǎn)錄（2） O2 O3 O 殺菌殺菌 (1) 射線射線: 電離輻射強(qiáng)電離輻射強(qiáng) ， 穿透力差（穿透力差（ 缺乏穿透力，不實(shí)用）缺乏穿透力，不實(shí)用） (2) 射線射線: 電離輻射強(qiáng)電離輻射強(qiáng) ， 穿透力強(qiáng)穿透力強(qiáng) (3) 射線射線: 電離輻射弱，電離輻射弱， 穿透力強(qiáng)穿透力強(qiáng) (4) X射線射線: 殺菌力不如紫外線，穿透力強(qiáng)殺菌力不如紫外線，穿透力強(qiáng) 用途：忌熱物品的滅

11、菌消毒、食品保藏和育種等方面用途：忌熱物品的滅菌消毒、食品保藏和育種等方面 殺菌機(jī)制：殺菌機(jī)制：射線使水電離為射線使水電離為H和和OH，這些游離基是強(qiáng)烈的，這些游離基是強(qiáng)烈的還原劑和氧化劑，可直接作用于細(xì)菌本身還原劑和氧化劑，可直接作用于細(xì)菌本身 。( (二）電離輻射二）電離輻射 微生物在干燥的環(huán)境中失去大量水分，新陳代謝便會微生物在干燥的環(huán)境中失去大量水分，新陳代謝便會發(fā)生障礙，甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的發(fā)生障礙，甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的增高而逐漸導(dǎo)致死亡。不同種類的微生物對干燥的抵抗增高而逐漸導(dǎo)致死亡。不同種類的微生物對干燥的抵抗力差異很大。主要用于菌種和食品的保

12、藏。力差異很大。主要用于菌種和食品的保藏。 三三.干干 燥燥頻率在頻率在20 000200 000 Hz的聲波的聲波稱為超聲波稱為超聲波 。主要用于裂解細(xì)胞，提。主要用于裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞組分。取細(xì)胞組分。四四.超聲波超聲波 五五.微微 波波 從幾百兆赫至幾十萬兆赫頻率的無線電波稱為微從幾百兆赫至幾十萬兆赫頻率的無線電波稱為微波。所需時(shí)間短、加熱均勻。主要用于陶瓷、耐波。所需時(shí)間短、加熱均勻。主要用于陶瓷、耐熱玻璃容器和塑料器皿，金屬器皿忌用。熱玻璃容器和塑料器皿，金屬器皿忌用。 濾過除菌濾過除菌 :通過機(jī)械阻留作用將液體或空氣中的細(xì)菌等微通過機(jī)械阻留作用將液體或空氣中的細(xì)菌等微生物除去的方法

13、。但濾過除菌常不能除去病毒、霉形體以及生物除去的方法。但濾過除菌常不能除去病毒、霉形體以及細(xì)菌細(xì)菌L型等小顆粒。主要用于不耐高溫的營養(yǎng)液、血清、抗型等小顆粒。主要用于不耐高溫的營養(yǎng)液、血清、抗菌素、空氣等除菌。菌素、空氣等除菌。六六.濾濾 過過第二節(jié)第二節(jié) 化學(xué)因素對微生物的影響（略）化學(xué)因素對微生物的影響（略） 1.消毒劑消毒劑 :用于殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。用于殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。 2.防腐劑防腐劑 :用于抑制微生物生長繁殖的化學(xué)藥物。用于抑制微生物生長繁殖的化學(xué)藥物。 消毒劑在低濃度時(shí)只能抑菌消毒劑在低濃度時(shí)只能抑菌,而防腐劑在高濃度時(shí)也能而防腐劑在高濃度時(shí)也能 殺菌，統(tǒng)稱為防腐

14、消毒劑，如酚類、重金屬鹽類、氧化劑殺菌，統(tǒng)稱為防腐消毒劑，如酚類、重金屬鹽類、氧化劑等。等。 3.化學(xué)治療劑化學(xué)治療劑 :用于消除宿主體內(nèi)病原微生物或用于消除宿主體內(nèi)病原微生物或其它寄生蟲的化學(xué)藥物，如磺胺類藥物。其它寄生蟲的化學(xué)藥物，如磺胺類藥物。第三節(jié)第三節(jié) 生物因素對微生物的影響生物因素對微生物的影響 一一. 抗生素、植物殺菌素和細(xì)菌素抗生素、植物殺菌素和細(xì)菌素 （一）抗生素：（一）抗生素：某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類 能抑制或殺死另一些微生物的物質(zhì)能抑制或殺死另一些微生物的物質(zhì) 。 作用原理作用原理 ：（：（1）干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，如青霉素；干擾細(xì)

15、菌細(xì)胞壁的合成，如青霉素； （2）損傷胞漿膜而影響其通透性，如多粘菌素；）損傷胞漿膜而影響其通透性，如多粘菌素； （3）影響菌體蛋白質(zhì)的合成，如紅霉素等；）影響菌體蛋白質(zhì)的合成，如紅霉素等； （4）影響核酸的合成，如新生霉素）影響核酸的合成，如新生霉素 。（二）植物殺菌素（二）植物殺菌素 ：某些植物中存在的殺菌物質(zhì)。某些植物中存在的殺菌物質(zhì)。 如黃連、大蒜、板藍(lán)根等。如黃連、大蒜、板藍(lán)根等。（三）細(xì)菌素（三）細(xì)菌素 ：某種細(xì)菌產(chǎn)生的一種具有殺菌作用的某種細(xì)菌產(chǎn)生的一種具有殺菌作用的 蛋白質(zhì)，只能作用于與它同種不同菌株的細(xì)菌蛋白質(zhì)，只能作用于與它同種不同菌株的細(xì)菌 以及與它親緣關(guān)系相近的細(xì)菌，如

16、大腸菌素以及與它親緣關(guān)系相近的細(xì)菌，如大腸菌素 。 （一）概念：（一）概念：寄生于細(xì)菌、霉形體、螺旋體、寄生于細(xì)菌、霉形體、螺旋體、放線菌以及藍(lán)細(xì)菌等體內(nèi)的一類病毒放線菌以及藍(lán)細(xì)菌等體內(nèi)的一類病毒 。二二.噬菌體噬菌體（二）特點(diǎn)（二）特點(diǎn)1.個(gè)體微小個(gè)體微小2.無細(xì)胞結(jié)構(gòu)無細(xì)胞結(jié)構(gòu)3.專性細(xì)胞內(nèi)寄生物專性細(xì)胞內(nèi)寄生物4.分布廣分布廣5.嚴(yán)格的宿主特異性嚴(yán)格的宿主特異性 （三）形態(tài)和結(jié)構(gòu)（三）形態(tài)和結(jié)構(gòu)蝌蚪形噬菌體的結(jié)構(gòu)蝌蚪形噬菌體的結(jié)構(gòu) 噬菌體對理化因素的抵抗力較強(qiáng)，一般經(jīng)噬菌體對理化因素的抵抗力較強(qiáng)，一般經(jīng)70 30min仍不失活，利用仍不失活，利用5660加熱加熱30min的方法，的方法，

17、可從含菌材料中分離噬菌體。噬菌體能耐受低溫和冰凍，可從含菌材料中分離噬菌體。噬菌體能耐受低溫和冰凍，但對紫外線和但對紫外線和X射線敏感，一般經(jīng)紫外線照射射線敏感，一般經(jīng)紫外線照射1015 min即失活。即失活。 （四）抵抗力（四）抵抗力 溶菌反應(yīng)和溶原化兩種類型溶菌反應(yīng)和溶原化兩種類型 1.毒性噬菌體毒性噬菌體 :能使寄主細(xì)胞迅速裂解引起溶菌反應(yīng)的能使寄主細(xì)胞迅速裂解引起溶菌反應(yīng)的 噬菌體。噬菌體。 2.溫和噬菌體溫和噬菌體 :有些噬菌體侵入寄主細(xì)胞后，將其基因有些噬菌體侵入寄主細(xì)胞后，將其基因整合于細(xì)菌的基因組中，與細(xì)菌整合于細(xì)菌的基因組中，與細(xì)菌DNA一道復(fù)制，并隨細(xì)菌的一道復(fù)制，并隨細(xì)菌

18、的分裂而傳給后代，不形成病毒粒子，不裂解細(xì)菌。帶有溫和分裂而傳給后代，不形成病毒粒子，不裂解細(xì)菌。帶有溫和性性 噬菌體基因組的細(xì)菌即噬菌體基因組的細(xì)菌即溶源性細(xì)菌溶源性細(xì)菌。 （五）與寄主細(xì)菌的關(guān)系（五）與寄主細(xì)菌的關(guān)系 （六）檢查方法（六）檢查方法 利用溶菌現(xiàn)象（只能在敏感宿主菌體增殖）利用溶菌現(xiàn)象（只能在敏感宿主菌體增殖） 噬斑噬斑熒光假熒光假單胞菌單胞菌空斑形成單位（空斑形成單位（plaque forming units，PFU）數(shù)：）數(shù)： 將噬菌體按一定倍數(shù)稀釋，通過噬菌斑計(jì)數(shù)，可測得每毫升容積內(nèi)的將噬菌體按一定倍數(shù)稀釋，通過噬菌斑計(jì)數(shù)，可測得每毫升容積內(nèi)的 空斑形成單位數(shù)?？瞻咝纬蓡挝粩?shù)。第三節(jié)第三節(jié) 獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求：要求：1 病原微生物傳入實(shí)驗(yàn)室病原微生物傳入實(shí)驗(yàn)室 2 病原微生物傳出實(shí)驗(yàn)室病原微生物傳出實(shí)驗(yàn)室 3 實(shí)驗(yàn)室人員的自身安全。實(shí)驗(yàn)室人員的自身安全。生物安全分類：生物安全分類：4類，P1-P4最新農(nóng)業(yè)部頒布動(dòng)物病原微生物分類名錄最新