入職培訓(xùn)技巧之免疫學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)篇

1、入職培訓(xùn)之基礎(chǔ)知識(shí)篇免疫學(xué)基礎(chǔ)免疫學(xué)技術(shù)類型免疫平臺(tái)方法學(xué)定義：研究機(jī)體自我識(shí)別和對(duì)抗原性異物排斥反應(yīng)對(duì)抗原性異物排斥反應(yīng)的一門科學(xué)。 現(xiàn)代免疫的概念已不再局限于抵抗微生物感染這個(gè)范圍，它是指動(dòng)物(人)機(jī)體對(duì)自身和非自身的識(shí)別，并清除非自身的大分子物質(zhì)，從而保持機(jī)體內(nèi)、外環(huán)境平衡的一種生理學(xué)反應(yīng)。免疫學(xué) （immunology） 執(zhí)行這種功能的是動(dòng)物(人)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，它是機(jī)體在長期進(jìn)化過程中形成的與自身內(nèi)(腫瘤)，外(微生物)敵人作斗爭(zhēng)的防御系統(tǒng)，從而使機(jī)體獲得特異性的免疫力，同時(shí)又能對(duì)內(nèi)部的腫瘤產(chǎn)生免疫反應(yīng)而加以清除，從而維持自身穩(wěn)定。 免疫學(xué)是研究抗原性物質(zhì)、機(jī)體的免疫系統(tǒng)和免疫應(yīng)答的

2、規(guī)律和調(diào)節(jié)以及免疫應(yīng)答的各種產(chǎn)物和各種免疫現(xiàn)象的一門生物科學(xué)，它是和醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)微生物學(xué)同時(shí)誕生的。隨著生物化學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，免疫學(xué)的研究亦已進(jìn)入分子水平時(shí)代，而且向其它很多學(xué)科滲透，已成為生命學(xué)科研究所不可缺少的一門學(xué)科。免疫系統(tǒng)（ immune system）： 是機(jī)體免疫功能的生理結(jié)構(gòu) ，它由免疫器官 、和免疫分子等組成.免疫器官:胸腺、淋巴結(jié)、脾免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核/ 巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。免疫分子：免疫球蛋白（B 淋巴細(xì)胞在 抗原刺激下變?yōu)闈{細(xì)胞所產(chǎn)生的免疫分子抗體）、細(xì)胞因子、補(bǔ)體和HLA分子免疫系統(tǒng)（ immune system）定義：是機(jī)體免疫

3、系統(tǒng)對(duì)抗原刺激所產(chǎn)生的以排除抗原為目的的生理過程。這個(gè)過程是免疫系統(tǒng)各部分生理功能的綜合體現(xiàn)，包括了抗體遞呈、淋巴細(xì)胞活化、免疫分子形成及免疫效應(yīng)發(fā)生等一系列的生理反應(yīng)。目的是通過有效的免疫應(yīng)答，機(jī)體得以維護(hù)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。適應(yīng)性免疫應(yīng)答可分為三個(gè)階段：1.識(shí)別階段：T細(xì)胞和B細(xì)胞分別通過TCR和BCR精確識(shí)別抗原，其中T細(xì)胞識(shí)別的抗原必須由抗原提呈細(xì)胞來提呈；2.活化增殖階段：識(shí)別抗原后的淋巴細(xì)胞在協(xié)同刺激分子的參與下，發(fā)生細(xì)胞的活化、增殖、分化，產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞（如殺傷性T細(xì)胞）、效應(yīng)分子（如抗體、細(xì)胞因子）和記憶細(xì)胞；3.效應(yīng)階段：由效應(yīng)細(xì)胞和效應(yīng)分子清除抗原。免疫應(yīng)答初次及再次免疫應(yīng)答抗體產(chǎn)

4、生的一般規(guī)律初次及再次免疫應(yīng)答抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律定義：能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并且能夠與免疫應(yīng)答產(chǎn)物(抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞)特異性結(jié)合的物質(zhì)。 抗原的兩種基本特性：1）免疫原性：指抗原分子能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性質(zhì)。 2）免疫反應(yīng)性：指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生特異性結(jié)合的性質(zhì)。 抗原 （Antigen)1）根據(jù)抗原性質(zhì)分類：完全抗原具有免疫原性和免疫反應(yīng)性的物質(zhì)； 半抗原無免疫原性，只有免疫反應(yīng)性。2）根據(jù)抗原刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體是否需要Th細(xì)胞輔助分類：胸腺依賴性抗原 & 胸腺非依賴性抗原3）根據(jù)抗原的來源分類：天然抗原 & 人工抗原4）根據(jù)與免疫動(dòng)物的親緣關(guān)系分類： 異種抗原 & 同種

5、異型抗原 & 自身抗原抗原的類型：n 1） 異物性n 2）分子量的大小n 3）化學(xué)組成、分子結(jié)構(gòu)與立體構(gòu)象的復(fù)雜性 n 4）物理狀態(tài) 決定抗原性的條件 一、 定義：抗原決定簇又稱表位是指抗原性物質(zhì)表面決定該抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答和免疫反應(yīng)具有特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 由于抗原決定簇通常位于抗原分子表面，因而又稱為表位。 二、大 小 ：抗原決定簇的大小是相當(dāng)恒定的，如肌紅蛋白的決定簇由67個(gè)氨基酸殘基組成，伸長約為1.92.3nm，多糖抗原決定簇由6個(gè)單糖殘基組成，大小為3.5nm;核酸的決定簇只有5個(gè)核苷酸組成，大小為2.0nm。 三、決定簇的數(shù)量： 抗原分子的抗原決定簇的數(shù)目稱為抗原

6、的抗原價(jià)。 抗原決定簇1.單價(jià)抗原只有一個(gè)決定簇的抗原 。如簡(jiǎn)單半抗原即為單價(jià)抗原。 2.多價(jià)抗原含有多個(gè)抗原決定簇的抗原稱為多價(jià)抗原。 3.單特異性決定簇抗原分子只含有一種特異性決定簇稱為單特異性決定簇。4.多特異性決定簇含有兩種以上不同特異性的決定簇稱為多特異性決定簇。 5.功能價(jià)位于抗原分子表面能與抗體反應(yīng)的抗原決定簇稱為功能價(jià)。 6.非功能價(jià)隱蔽于分子內(nèi)部的抗原決定簇稱為非功能價(jià)，經(jīng)酶消化后才暴露出來。 一、不同物種間存在共同的抗原組成 二、不同抗原分子存在共同的抗原決定簇 三、不同決定簇之間有部分結(jié)構(gòu)相同 蛋白質(zhì)抗原的決定簇取決于多肽末端的氨基酸組成，尤其是末端氨基酸的羧基對(duì)特異性影

7、響最大，如果末端氨基酸相似，即可出現(xiàn)交叉反應(yīng)，而且交叉反應(yīng)的強(qiáng)度與相似性成正比抗原的交叉性異種抗原：與免疫機(jī)體不同種屬的抗原，譬如各種疫苗，異種動(dòng)物紅細(xì)胞，異種蛋白等。同種抗原：與免疫機(jī)體同種屬的抗原，能刺激同種而基因型不同的個(gè)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。譬如血型抗原、同種移植物抗原等。 自身抗原：能引起自身免疫應(yīng)答的自身組織成分。如在胚胎期從未與自身淋巴細(xì)胞接觸過的隔絕成分（晶狀體蛋白、腦組織等）或非隔絕成分，但在感染、藥物、燒傷、電離輻射等因素影響下構(gòu)象發(fā)生改變的自身成分。 異嗜性抗原：這類抗原與種族特異性無關(guān)，存在于人、動(dòng)物、植物及微生物之間性質(zhì)相同的抗原。該現(xiàn)象首先由瑞典病理學(xué)家Forssman

8、發(fā)現(xiàn)的，故又稱為Forssman抗原。1、免疫球蛋白簡(jiǎn)稱 Ig：指具有抗體活性的動(dòng)物蛋白，存在于人和動(dòng)物血液、組織液及其它外分泌液中的一類具有相似結(jié)構(gòu)的球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于血液、組織液及外分泌液中。 2、抗體：動(dòng)物機(jī)體受到抗原物質(zhì)的刺激后，由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白，這類免疫球蛋白稱為抗體(簡(jiǎn)稱Ab)?？贵w（Antibody) (一)重鏈(H鏈) :重鏈大約是由420-440個(gè)氨基酸組成，分子量大約為50000-77000，兩條重鏈之間由1對(duì)或1對(duì)以上的二硫鍵(ss)互相連接。重鏈由可變區(qū)和恒定區(qū)組成；根據(jù)抗體恒定區(qū)抗原性差異，將免疫球蛋

9、白的重鏈分為5種類型、，由此決定了免疫球蛋白的類型，即 IgG、IgM、 IgA、IgE、IgD。 (二)輕鏈(L鏈) :輕鏈?zhǔn)怯?13-214個(gè)氨基酸組成，分子量約為22500。兩條相同的輕鏈其羧基端(C端)靠二硫鍵分別與兩條重鏈連接。 (三）免疫球蛋白的功能區(qū) :免疫球蛋白的多肽鏈分子可折疊成幾個(gè)由鏈內(nèi)二流鍵連接成的環(huán)狀球形結(jié)構(gòu)，稱為功能區(qū)。免疫球蛋白的單體分子結(jié)構(gòu) 根據(jù)抗體恒定區(qū)抗原性差異，將免疫球蛋白的重鏈分為5種類型、，由此決定了免疫球蛋白的類型，即 IgG、IgM、 IgA、IgE、IgD。五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的

10、結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。除兩者分子構(gòu)型高度互補(bǔ)外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。 抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應(yīng)；第二階段為可見反應(yīng)階段，這一階段抗原抗體復(fù)合物在適當(dāng)溫度、pH、電解質(zhì)和補(bǔ)體影響下，出現(xiàn)沉淀、凝集、細(xì)胞溶解、補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的肉眼可見的反應(yīng)，此階段反應(yīng)慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。在血清學(xué)反應(yīng)中，以上兩階段往往不能嚴(yán)格分開，往往受反應(yīng)條件（如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等）的影響。 特異性 即專

11、性，是抗原抗體反應(yīng)最主要的特性，是由抗原決定簇與抗體分子高變區(qū)之間在空間結(jié)構(gòu)上存在的互補(bǔ)性所決定的。這種結(jié)合的特異性，使得抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)廣泛用于對(duì)微生物感染的檢測(cè)與鑒別診斷、分子鑒定等各個(gè)領(lǐng)域?？乖贵w反應(yīng)的主要特點(diǎn)特異性可逆性比例性可逆性由于抗原抗體反應(yīng)是非共價(jià)結(jié)合，因此其反應(yīng)是可逆的，形成的抗原抗體復(fù)合物與游離的抗原及抗體之間處于一種動(dòng)態(tài)的平衡狀態(tài)；如改變?nèi)芤旱睦砘瘲l件(如鹽離子濃度、酸堿度等)，可使抗原抗體復(fù)合物完全解離?？乖贵w反應(yīng)的可逆性特點(diǎn)可用于對(duì)抗原或抗體的分離或純化。當(dāng)抗原抗體比例達(dá)到一個(gè)合適范圍時(shí)，其反應(yīng)可形成肉眼可見的沉淀或凝集現(xiàn)象：而當(dāng)抗體或抗原過剩時(shí)，由于均不能形成大

12、分子的免疫復(fù)合物，故沉淀物的形成相應(yīng)較少，甚至無沉淀物形成。因此，在進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)時(shí)，須通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定二者合適的濃度比例?？乖贵w反應(yīng)的主要特點(diǎn)比例比例性性抗原抗體反應(yīng)的主要特點(diǎn)免疫學(xué)基礎(chǔ)免疫學(xué)技術(shù)類型免疫平臺(tái)方法學(xué)1. 雙抗體夾心法2. 間接法3. 競(jìng)爭(zhēng)法4. 捕獲法免疫檢測(cè)的技術(shù)類型原理： 用已知抗體檢測(cè)雙價(jià)或雙價(jià)以上大分子抗原。以特異性抗體包被載體表面，然后加入可能含有相應(yīng)抗原的待測(cè)樣本，孵育后洗滌 ，再加酶標(biāo)記的特異性抗體一起孵育。 包被抗體 、待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗體形成夾心式復(fù)合物。雙抗體夾心法用已知抗原檢測(cè)抗體用已知抗原包被固相載體， 加入待測(cè)樣本，再與酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行反應(yīng) ，加

13、底物顯色。是檢測(cè)抗體最常用的方法。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。間接法原理小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn) ，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定 ，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式 。其原理是標(biāo)本中的抗原 （或抗體）和一定量的酶標(biāo)抗原 （或抗體 ）競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體（ 或抗原 ）結(jié)合 。標(biāo)本中抗原量含量愈多 ，最后的顯色也愈淺。競(jìng)爭(zhēng)法原理用抗人IgM 抗體包被固相， 以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM 抗體和非特異性的IgM）。此法常用于病毒性感染的早期診斷。捕獲法原理-用已知抗體檢測(cè)抗體，主要用于IgM檢測(cè)固相載體固相載體的要求理

14、想的固相載體應(yīng)與抗體（抗原）有較高的結(jié)合容量，且結(jié)合穩(wěn)定極少脫落；它可結(jié)合抗原或抗體免疫反應(yīng)物，以及如親和素或鏈霉親和素等大分子蛋白質(zhì)；生物大分子固相化后仍應(yīng)保持活性，而且為有利于與反映充分進(jìn)行，最好其活性基團(tuán)朝向反應(yīng)溶液；固相化方法應(yīng)簡(jiǎn)便易行，快速經(jīng)濟(jì)。免疫分析中常見術(shù)語固相載體的種類和選擇1.塑料制品 抗體或蛋白質(zhì)抗原可通過非共價(jià)或物理吸附機(jī)制結(jié)合到固相載體表面。因材料經(jīng)濟(jì)、方法簡(jiǎn)便、操作及測(cè)定易于自動(dòng)化，迄今用聚苯乙烯制成的小試管、小珠和微量反應(yīng)板仍是異相沒免疫測(cè)定方法最常用的固相載體2.微顆粒 此類固相載體系由高分子單體聚合成的微球或顆粒，其直徑多為微米（um），由于帶有能與蛋白質(zhì)結(jié)合

15、功能團(tuán)（如-NH2、-COOH、-OH、-CHO或-NH-NH2等），易與抗體（抗原）形成化學(xué)偶聯(lián)，且結(jié)合容量大。3.膜載體 包括硝酸纖維膜（nitrocellulose，NC）玻璃纖維素膜及尼龍膜等微孔濾膜。免疫分析中常見術(shù)語免疫吸附劑免疫吸附劑是指與固相載體結(jié)合后的抗原或抗體，而將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。包被的方法依所用固相載體種類而有不同，可以是非共價(jià)健吸附，也可是共價(jià)鍵化學(xué)偶聯(lián)。目前普遍使用的聚苯乙烯固相載體（如Elisa板）即多采用吸附方式包被抗原或抗體。除固相載體的理化性質(zhì)外。用抗原或抗體包被后，固相載體表面常會(huì)余少量未吸附位點(diǎn)，可非特異地吸附測(cè)定時(shí)加入的

16、標(biāo)本和酶標(biāo)記物中的蛋白質(zhì)，導(dǎo)致本地偏高。因此需用1%-5%的牛血清白蛋白（BSA）或5%-20%的小牛血清等包被一次，消除上述干擾，此過程稱為封閉（blocking）。包被好的固相載體，加防腐緩沖液咋低溫可放置一段時(shí)間而不喪失免疫活性。免疫分析中常見術(shù)語常見標(biāo)記物 1. 常用酶 辣根過氧化物酶 （HRP） 堿性磷酸酶（AP）2. 金顆粒3. 其他標(biāo)記物 熒光素 吖啶酯 放射性元素等免疫分析中常見術(shù)語堿性磷酸酶（alkaline phospharase,AP） 可從大腸桿菌或小牛腸粘膜中提取，敏感性高，空白值低。不溶性底物： 硝基藍(lán)四氮唑（NBT）和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸（BCIP）混

17、合液，是AP最敏感的底物，呈紫色； 堅(jiān)牢紅和萘酚ASMX混合液，呈紅色AP可溶性底物 ： 一般采用對(duì)硝基苯磷酸酯（P-nitrophenyl phosphate,P-NPP），產(chǎn)物呈黃色，測(cè)定波長為405nm。免疫分析中常見術(shù)語免疫分析中常見術(shù)語底物液1. 魯米諾、異魯米諾及其衍 生物類 （HRP底物）2. 金鋼烷（1,2-二氧乙烷及其衍生物 ） AMPPD 目前市場(chǎng)常用底物液免疫學(xué)基礎(chǔ)免疫學(xué)技術(shù)類型體外診斷方法學(xué)及原理體外診斷試劑在生物領(lǐng)域的分屬（由醫(yī)療器械管理辦法）根據(jù)檢測(cè)原理或者檢測(cè)方法，體外診斷試劑可以分為：生化診斷試劑、免疫診斷試劑、分子診斷試劑、微生物診斷試劑、尿液診斷試劑、凝血類

18、診斷試劑、血液學(xué)和流式細(xì)胞診斷試劑等。生化、免疫和分子診斷試劑為我國診斷試劑主要的三大類品種。體外診斷試劑按檢測(cè)原理或者檢測(cè)方法分類42%33%9%6%4%6%免疫臨床化學(xué)分子血液學(xué)微生物學(xué)其他體外診斷試劑三大主流領(lǐng)域?qū)Ρ?生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是把化學(xué)分析技術(shù)和生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)原理的方法應(yīng)用于疾病的診斷、治療、監(jiān)控的實(shí)驗(yàn)分支。實(shí)驗(yàn)反應(yīng)原理及分析方法理論依據(jù)目前利用酶具有催化活性這一特性，在臨床上已普遍應(yīng)用測(cè)定酶蛋白，同時(shí)還可以測(cè)定三大代謝的產(chǎn)物，如糖、脂類、蛋白質(zhì)、這樣也就建立起利用酶促反應(yīng)的一級(jí)反應(yīng)測(cè)定代謝物的方法。一級(jí)反應(yīng)反應(yīng)速度與底物濃度成正比，因此只有當(dāng)酶反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)時(shí)，才能準(zhǔn)確測(cè)定底物含量

19、，（如測(cè)定血糖、總甘油三脂、總膽固醇等）。從此在臨床試劑盒的方法中出現(xiàn)了以酶為試劑測(cè)定各種代謝產(chǎn)物。臨床生化試劑1. 比色法生化項(xiàng)目常用的技術(shù)類型2.免疫比濁法 免疫比濁法是抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定方法?；驹恚寒?dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時(shí)，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時(shí)，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過測(cè)定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出檢樣中抗原的含量。生化項(xiàng)目常用的技術(shù)類型具體見以下鏈接http:/ DH2

20、+H2O2 D+2H2O 配方顯色反應(yīng)原理 HRP化學(xué)發(fā)光 (ChemiLuminescence ，簡(jiǎn)稱為 CL) 分析法是分子發(fā)光光譜分析法中的一類，它主要是依據(jù)化學(xué)檢測(cè)體系中待測(cè)物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器對(duì)體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè)，而確定待測(cè)物含量的一種痕量分析方法。（分為直接發(fā)光、間接發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光）二、化學(xué)發(fā)光直接發(fā)光-吖啶酯標(biāo)記間接發(fā)光-酶標(biāo)記（HRP對(duì)應(yīng)的 魯米諾系統(tǒng) ALP對(duì)應(yīng)的MPPD系統(tǒng)）電化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光常用體系吖啶酯發(fā)光雅培（）間接化學(xué)發(fā)光（化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫技術(shù)）辣根過氧化物酶-魯米諾系統(tǒng)（HRP-Luminol）堿性磷酸酶-AM

21、PPD系統(tǒng)（ALP-AMPPD）電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光羅氏（roche）板式發(fā)光 -包被抗體包被在包被板上磁微粒發(fā)光-包被抗體包被在磁珠上根據(jù)包被固相載體可分為板式發(fā)光和磁微粒發(fā)光板式發(fā)光磁微粒發(fā)光試劑盒常用在免疫層析的平臺(tái)三、免疫層析平臺(tái)膠體金免疫層析技術(shù)新型免疫層析技術(shù)熒光膠乳標(biāo)記免疫層析上轉(zhuǎn)磷光標(biāo)記免疫層析時(shí)間分辨標(biāo)記免疫層析量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析納米磁珠標(biāo)記免疫層析標(biāo)記物穩(wěn)定性差，結(jié)果靠肉眼觀測(cè)，檢測(cè)靈敏度低，只能用于定性或半定量檢測(cè) 膠體金是指金微小粒子（0-100nm）分散在另一種物質(zhì)中所形成的體系，通常指金以微小粒子分散在溶液中所形成的金溶膠，用此金溶膠標(biāo)記蛋白質(zhì)（抗原、抗體或SPA、

22、SPG），膠體金顆粒具有高電子密度的特性，故在金標(biāo)蛋白的抗原抗體結(jié)合處，顯微鏡下可見黑褐色顆粒；當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的標(biāo)記處大量聚集時(shí)，可在載體膜上呈現(xiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，從而用于抗原或抗體物質(zhì)的半定量或定性。膠體金與ELISA不同之處便是反應(yīng)時(shí)間大大縮短，僅需要數(shù)分鐘就完成了ELISA需數(shù)小時(shí)才能顯示的結(jié)果。因?yàn)樵诎唿c(diǎn)免疫滲濾分析DIFA和斑點(diǎn)免疫層析分析DICA中，高濃度的抗體集中固定在纖維素的微孔中，待測(cè)抗原在滲濾或?qū)游鰰r(shí)，流經(jīng)微孔與固定的高濃度抗體緊密接觸，很快完成免疫結(jié)合反應(yīng)。這就是以膜為基礎(chǔ)的膠體金快速免疫結(jié)合分析中的免疫濃縮作用。在ELISA中，待測(cè)抗原要在液相中經(jīng)過擴(kuò)散作用，逐漸與吸附在固相表面的抗體結(jié)合。同時(shí)，標(biāo)記抗體也需要同樣的擴(kuò)散結(jié)合過程形成抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，故需時(shí)間較長。故此技術(shù)做到了名副其實(shí)的POCT。膠體金特點(diǎn)膠體金原理間接法為了消除待測(cè)血清標(biāo)本中大量的非特異性IgG與特異性IgG競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)記抗人I