河北師大微生物實驗五課件

1、LOGO一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?. 掌握配制培養(yǎng)基的原則和方法。2. 掌握微生物分離和純化的原理和 方法。二、實驗原理二、實驗原理1. 微生物的分離與純化：微生物的分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程。方法主要有：簡易單細(xì)胞挑取法和平板分離法。2. 土壤是微生物生活的大本營，是發(fā)掘微生物資土壤是微生物生活的大本營，是發(fā)掘微生物資源的重要基地！源的重要基地！放線菌是重要的抗生素產(chǎn)生菌，主要分布在土壤中（主要是鏈霉菌），其數(shù)量僅次于細(xì)菌。3. 放線菌放線菌是一類主要呈菌絲狀生長和以孢子繁殖的革蘭氏陽性細(xì)菌。4. 涂布平板法：涂布平板法：將含有各種微生物的土壤懸液稀

2、釋不同倍數(shù)后，涂布接種到平板培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)，從中選取放線菌，接種到斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。三、實驗材料三、實驗材料1. 培養(yǎng)基：高氏I號培養(yǎng)基。2. 樣品：花園2 cm深土壤。3. 儀器及其他用品：酒精燈、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、滴管、試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶、槍頭、涂布器等。四、實驗步驟四、實驗步驟1. 高氏I號培養(yǎng)基的配制及分裝2. 物品準(zhǔn)備3. 滅菌4. 鋪試管斜面，倒平板5. 分離6. 放線菌純化7. 形態(tài)觀察1. 高氏高氏I號培養(yǎng)基的配制及分裝號培養(yǎng)基的配制及分裝(五組五組) 高氏一號合成培養(yǎng)基高氏一號合成培養(yǎng)基是培養(yǎng)放線菌的培養(yǎng)基。（1）配方配方： 可溶性淀粉可溶性淀粉 40

3、 g， NaCl 1 g， KNO3 1 g， K2HPO4 1 g， MgSO4 1 g， FeSO4 2 mL， 瓊脂瓊脂 40 g， H2O 2000 mL， pH 7.27.4（2）在鍋內(nèi)加入一定體積水后加入可溶性淀粉，加熱溶解后，加入無機鹽，待水沸騰后，減小火力，加入瓊脂粉，溶融后，定容至所需體積。調(diào) pH值。（注意：加入瓊脂粉后，注意攪拌，勿煮（注意：加入瓊脂粉后，注意攪拌，勿煮糊。）糊。）配配1.7 L培養(yǎng)基培養(yǎng)基。 分裝分裝：將上述所制溶液分裝入將上述所制溶液分裝入500 mL錐形瓶錐形瓶中，中，250 mL/瓶，共瓶，共5瓶；共瓶；共1250 mL。 10 mL左右左右/試管

4、，共試管，共42管，共管，共420 mL，7個試個試管一捆（管一捆（6捆）捆）。1. 高氏高氏I號培養(yǎng)基的配制及分裝號培養(yǎng)基的配制及分裝(五組五組)2. 物品準(zhǔn)備（分組進(jìn)行）物品準(zhǔn)備（分組進(jìn)行） 盛有盛有9 mL水的試管，水的試管，6支（試管用棉塞塞?。┲Вㄔ嚬苡妹奕。?在容積為在容積為250 mL的三角瓶內(nèi)加入玻璃珠，以蓋住的三角瓶內(nèi)加入玻璃珠，以蓋住瓶底為宜（作用：打散土壤結(jié)塊），再加入瓶底為宜（作用：打散土壤結(jié)塊），再加入90 mL蒸餾水，蒸餾水，1瓶瓶 試管斜面試管斜面 8支（每組準(zhǔn)備好試管和棉塞，第五組支（每組準(zhǔn)備好試管和棉塞，第五組準(zhǔn)備培養(yǎng)基）準(zhǔn)備培養(yǎng)基） 平板平板9個個 （5

5、個個/包，共包，共9包）包） 1 mL槍頭盒，槍頭盒，1盒盒 涂布器涂布器8支支3. 滅菌滅菌 將上述培養(yǎng)基和準(zhǔn)備的物品于將上述培養(yǎng)基和準(zhǔn)備的物品于121oC，2030 min高壓蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌。4. 鋪試管斜面，倒平板鋪試管斜面，倒平板1. 將將42根裝有培養(yǎng)基的試管斜放，制成斜面培養(yǎng)基。根裝有培養(yǎng)基的試管斜放，制成斜面培養(yǎng)基。2. 倒平板，每個梯度要有一個平行，要有空白對照。倒平板，每個梯度要有一個平行，要有空白對照。5. 分離分離：以下各分離步驟均在：以下各分離步驟均在無菌條件無菌條件下進(jìn)行（下進(jìn)行（無菌操作無菌操作）。）。（1）稱取土壤樣品）稱取土壤樣品10 g，倒入含有，倒入

6、含有90 mL水和玻璃珠的三水和玻璃珠的三角瓶中振蕩角瓶中振蕩5 min，使土樣充分打散。（，使土樣充分打散。（注意注意：等水：等水冷卻冷卻了了再倒入土樣。）再倒入土樣。）（2）無菌條件下，將土壤懸液稀釋成）無菌條件下，將土壤懸液稀釋成10-210-7系列濃度。系列濃度。具體稀釋過程：用無菌吸管無菌操作取具體稀釋過程：用無菌吸管無菌操作取10-1濃度的土壤懸液濃度的土壤懸液1 mL并加入編號并加入編號10-2的無菌試管中，震蕩混合均勻。即為的無菌試管中，震蕩混合均勻。即為10-2濃濃度的土壤稀釋液。依此類推，直到稀釋至度的土壤稀釋液。依此類推，直到稀釋至10-7的試管中（每的試管中（每個稀釋度

7、換個稀釋度換1支槍頭）。支槍頭）。（3）分別用移液器精確地吸?。┓謩e用移液器精確地吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌液的稀釋菌液0.2 0.3 mL，對號放入編好號的無菌培養(yǎng)皿中，每一濃度對，對號放入編好號的無菌培養(yǎng)皿中，每一濃度對應(yīng)兩個平板。用無菌涂布棒（從濃度小的梯度開始）將加應(yīng)兩個平板。用無菌涂布棒（從濃度小的梯度開始）將加入平板培養(yǎng)基上的土壤稀釋液在整個平板表面涂勻，涂完入平板培養(yǎng)基上的土壤稀釋液在整個平板表面涂勻，涂完一個平板用酒精燈滅菌。一個平板用酒精燈滅菌。（4）將上述所涂平板置于）將上述所涂平板置于2830 溫度下，倒置培養(yǎng)溫度下，倒置培養(yǎng)一周。一周。6. 放線菌純化放線

8、菌純化(1)(1)肉眼觀察確認(rèn)放線菌的菌落。怎么確認(rèn)？肉眼觀察確認(rèn)放線菌的菌落。怎么確認(rèn)？(2)(2)在無菌條件下，挑取單菌落的孢子在無菌條件下，挑取單菌落的孢子“之之”字劃線于試管的斜面上。字劃線于試管的斜面上。(3)(3)將試管置于將試管置于2830oC的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周。的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周。7. 形態(tài)觀察形態(tài)觀察 （1）直接觀察（同霉菌）：在培養(yǎng)基中，整體觀察放線菌的菌落特征及其顏色。 （2）印片觀察：取一小塊帶培養(yǎng)基的菌落正放于載玻片上，然后用另一載玻片加熱后按壓，注意不要滑動玻片。取上面的印片，有印跡的一面朝上，在40 x物鏡下觀察。如需染色，先將有印跡的載玻片通過火焰23次固定，再

9、用美藍(lán)染色觀察（染色1 min，水洗，干燥后觀察）。 干燥、不透明、表面呈致密的絲絨狀，上有一薄層彩色的“干粉” 菌落和培養(yǎng)基的連接緊密，難以挑取 菌落正反面顏色常不一致，菌落邊緣的瓊脂平面有變形的現(xiàn)象 放線菌放線菌上圖：上圖：A：諾爾斯氏鏈霉菌；：諾爾斯氏鏈霉菌；B：皮疽諾卡：皮疽諾卡氏菌；氏菌；C：酒紅脂孢囊菌；：酒紅脂孢囊菌；D：游動放線菌；：游動放線菌；E：小單胞菌；：小單胞菌；F：皺雙孢馬杜拉放線菌：皺雙孢馬杜拉放線菌下圖：下圖：A：卡特利鏈霉菌；：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈：卡那霉素鏈霉菌；霉菌；E：除蟲鏈霉菌；：除蟲鏈霉菌；F：生磺酸鏈霉菌：生磺酸鏈霉菌玫瑰花鏈霉菌螺旋形孢子鏈放線菌放線菌五、實驗結(jié)果五、實驗結(jié)果1.評價分離純化