抗體芯片在風(fēng)濕免疫研究中的應(yīng)用

1、RayBiotech抗體芯片在風(fēng)濕免疫研究中的應(yīng)用系統(tǒng)性紅斑狼瘡尿液標(biāo)志物篩查雜志名稱: Molecular & Cellular Proteomics 分子與細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)(IF7.254)文獻(xiàn)題目：Urinary Angiostatin - A Novel Putative Marker of Renal Pathology Chronicity in Lupus Nephritis作者：Tianfu Wu, Yong Du, Jie Han, Sandeep Singh, Chun Xie, Yuyuan Guo,Xin J. Zhou, Chul Ahn, Ramesh Sax

2、ena, and Chandra Mohan.本實(shí)驗(yàn)所用產(chǎn)品：RayBiotech人AAH-CYT-G4000抗體芯片 （274個(gè)生長、趨化、血管、炎癥等細(xì)胞因子抗體芯片）實(shí)驗(yàn)樣品：尿液研究背景: 尋找系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）生物標(biāo)志物非常的迫切，因?yàn)镾LE具有較高的腎功能衰竭發(fā)病率。用RayBiotech抗體芯片篩選狼瘡性腎炎患者尿液中的細(xì)胞因子表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)SLE病人血管抑素表達(dá)水平明顯升高。血管抑素是纖溶酶原活性片段，對血管生成和炎癥有調(diào)節(jié)作用。后續(xù)ELISA驗(yàn)證和ROC分析證明血管抑素可以有效區(qū)分活動期和穩(wěn)定期SLE。免疫組化結(jié)果表明血管抑素在患者腎小管上皮細(xì)胞上表達(dá)。進(jìn)一步研究證明尿

3、血管抑素水平與腎臟病理慢性指數(shù)密切相關(guān)，與活性指數(shù)無關(guān)。研究思路 1 實(shí)驗(yàn)方法1.1 芯片樣品準(zhǔn)備 l 尿液收集；l 樣品分組：SLE病人組（5例），正常對照組（3例）；1.2 RayBiotech細(xì)胞因子抗體芯片檢測尿液樣品中274個(gè)細(xì)胞因子的表達(dá)及其差異；1.3 ELISA驗(yàn)證血清和尿液樣品中血管抑制素的表達(dá)；1.4 免疫組化驗(yàn)證腎組織血管抑制素的表達(dá)；1.5 WB探討尿液血管抑制素的表達(dá)分子機(jī)制；2 結(jié)果2.1 RayBiotech芯片篩查SLE病人與正常對照尿液蛋白表達(dá)變化采用Ray Biotech AAH-CYT-G4000細(xì)胞因子抗體芯片篩查SLE病人（n=5）與正常對照（n=3）

4、尿液蛋白表達(dá)變化差異，篩選到Angiostatin在SLE病人尿液中顯著上調(diào)(P=0.0011), 熒光信號均值Fold change大于100倍。后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)芯片的篩選結(jié)果將重點(diǎn)研究Angiostatin。2.2 ELISA大樣品驗(yàn)證血管抑制素作為潛在的SLE生物標(biāo)志物收集SLE 病人 (n=100), CKD（慢性腎臟?。┘膊φ战M(n =24), 正常對照組 (n= 21) 的尿液樣品和血清樣品檢測Angiostatin的差異，結(jié)果顯示SLE病人組尿液Angiostatin表達(dá)極顯著高于正常對照組(p<0.0001)，且顯著高于CKD組（p<0.05）; ROC分析結(jié)果顯示A

5、ngiostatin 能很好的分辨正常和SLE、活動期SLE和穩(wěn)定期SLE; 而分辨CKD與SLE的效果一般。而血清樣品Angiostatin在幾組中的差異不顯著。2.3 Angiostatin表達(dá)與疾病不同分期的相關(guān)性分析2.4 免疫組化檢測腎組織Angiostatin表達(dá) 尿液Angiostatin的表達(dá)在不同分期的SLE都有顯著差異，而血清與尿液中的Angiostatin表達(dá)沒有相關(guān)性, 免疫組化結(jié)果顯示SLE IV期病人腎組織Angiostatin高表達(dá), 我們推測尿液中的Angiostatin高表達(dá)并非來源于血清，而有可能是來源于腎，尤其是腎小管細(xì)胞。2.5 WB初步探討尿液血管抑制

6、素的表達(dá)分子機(jī)制 3 結(jié)論 尿血管抑素是一種新的無創(chuàng)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎臟疾病標(biāo)志物，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。RayBiotech抗體芯片在該研究中起到非常重要的指引作用。本文使用RayBiotech AAH-CYT-G4000 細(xì)胞因子抗體芯片0-4.html4-1BB(TNFRSF9/CD137)ACE-2Adiponectin(ACRP30)Activin AAdipsin(Complement Factor D)AgRPALCAM(CD166)Alpha-fetoproteinAmphiregulinAngiogeninAngiopoietin-1Angiopoietin-2ANGPTL4A

7、xlCD80(B7-1)Beta-2 MicroglobulinBCAMBCMA(TNFRSF17)BDNFbeta IG-H3bFGFBLC(CXCL13)BMP-4BMP-5BMP-6BMP-7beta-NGFBetacellulin(BTC)CA125CA15-3CA19-9CA9Cardiotrophin-1(CT-1)Cathepsin SHCC-1(CCL14)6Ckine(CCL21)CCL28(MEC)CD14CD23CD30(TNFRSF8)CD40(TNFRSF5)CD40 Ligand(TNFSF5)CEACEACAM-1CK beta 8-1(CCL23)CNTFCri

8、pto-1CRP(C-Reactive Protein)CTACK(CCL27)CXCL16DANDecorinDKK-1Dkk-3Dkk-4CD26(DPPIV)DR6(TNFRSF21)DtkE-CadherinEDA-A2EGFEGFREG-VEGF(PK1)ENA-78(CXCL5)Endoglin(CD105)Eotaxin-1(CCL11)Eotaxin-2(MPIF-2/CCL24)Eotaxin-3(CCL26)TROP1(EpCAM)ErbB2ErbB3Erythropoietin RE-SelectinFas(TNFRSF6/Apo-1)Fas Ligand(TNFSF6)

9、Fc gamma RIIB/C(CD32B/C)FerritinFGF-4FGF-6FGF-7(KGF)FGF-9Flt-3 LigandFLRGFollistatinFractalkine(CX3CL1)FSHFurinGalectin-7GCP-2(CXCL6)GCSFGDF-15GDNFGITR(TNFRSF18)GITR Ligand(TNFSF18)GM-CSFGRO alpha/beta/gammaGRO alpha(CXCL1)Growth HormoneHB-EGFHCC-4(CCL16)hCG intactHGFHVEM(TNFRSF14)I-309(TCA-3/CCL1)I

10、CAM-1(CD54)ICAM-2(CD102)ICAM-3(CD50)IFN-gammaIGFBP-1IGFBP-2IGFBP-3IGFBP-4IGFBP-6IGF-1IGF-1 RIGF-2IL-1 R2IL-1 R4(ST2)IL-1 R1IL-10IL-10 R alphaIL-10 R betaIL-11IL-12 p40IL-12 p70IL-13IL-13 R alpha 2IL-13 R1IL-15IL-16IL-17AIL-17BIL-17CIL-17FIL-17 RAIL-18 BP alphaIL-18 R beta(AcPL)IL-1 alpha(IL-1 F1)IL-

11、1 beta(IL-1 F2)IL-1 ra(IL-1 F3)IL-2IL-2 R beta(CD122)IL-2 R gamma(Common gamma Chain)IL-2 R alphaIL-21 RIL-22IL-28A(IFN-lambda 2)IL-29(IFN-lambda 1)IL-3IL-31IL-4IL-5IL-5 R alphaIL-6IL-6 RIL-7IL-8(CXCL8)IL-9InsulinIP-10(CXCL10)I-TAC(CXCL11)LAP/TGF beta 1LeptinLeptin RLIFLight(TNFSF14)LIMPIIL-Selectin

12、(CD62L)Luteinizing hormoneLymphotactin(XCL1)LYVE-1MarapsinMCP-1(CCL2)MCP-2(CCL8)MCP-3(MARC/CCL7)MCP-4(CCL13)M-CSFM-CSF RMDC(CCL22)MICAMICBMIFMIG(CXCL9)MIP-1 alpha(CCL3)MIP-1 beta(CCL4)MIP-1 delta(CCL15)MIP-3 alpha(CCL20)MIP-3 beta(CCL19)MMP-1MMP-10MMP-13MMP-2MMP-3MMP-7MMP-8MMP-9MPIF-1(CCL23)MSP alph

13、a/betaNAP-2(PPBP/CXCL7)NCAM-1(CD56)NGFR(TNFRSF16)Nidogen-1NrCAMNRG1-beta 1(HRG1-beta 1)NT-3NT-4Oncostatin MOsteopontin(SPP1)Osteoprotegerin(TNFRSF11B)PAI-1PARC(CCL18)PDGF-AAPDGF R alphaPDGF R betaPDGF-ABPDGF-BBPECAM-1(CD31)PLGFPlatelet factor 4(CXCL4)ProcalcitoninProlactinPSA-freePSA-totalRAGERANK(T

14、NFRSF11A)RANTES(CCL5)ResistinS100 BSAA(Serum Amyloid A)SCFSCF R(CD117/c-kit)SDF-1 alpha(CXCL12 alpha)SDF-1 beta(CXCL12 beta)gp130Sonic Hedgehog N-Terminal(Shh-N)Siglec-5(CD170)Siglec-9TNF RII(TNFRSF1B)TNF RI(TNFRSF1A)TACETARC(CCL17)TECK(CCL25)TGF beta 2TGF alphaTGF beta 3TGF beta 1Thrombopoietin(TPO)ThyroglobulinTie-1Ti