高效液相色譜法測定退燒沖劑中黃芩苷的含量

1、    高效液相色譜法測定退燒沖劑中黃芩苷的含量        摘要目的：測定退燒沖劑中黃芩苷的含量。方法：采用HPLC法，C18柱，流動相醋酸緩沖液（pH4.5）-甲醇(11)，檢測波長254nm。結果：黃芩苷在0.510mg.L-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，r0.9998，平均回收率98.6%，RSD為1.59%。結論：所建立的含量測定方法簡便、準確，可作為該產(chǎn)品的質量控制方法。關鍵詞高效液相色譜法；退燒沖劑；黃芩苷中分類號R927.2 DETERMINATION OF B

2、AICALIN IN TUISHAO CHONGJI BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHYMa Xiujing，Yuan Cheng，Li Rong(General Hospital of Jinan Military Region,Jinan250031)AbstractAIM To establish a RP-HPLC method for determination of Baicalin in Tuishao Chongji.METHODS The contents of Baicalin was determined by HPLC,u

3、sing Spherisorb C18(4×250mm) column,acetic acidbuffer（pH=4.5）-methanol(11) as the mobile phase.The detective wavelength was 254nm.RESULTS The average recovery was 98.6% with the relative standard deviation (RSD) 1.59%(n=5).CONCLUSION This method is simple and accurate,Which can be used in the q

4、uality control of this product.Key wordsHPLC;Baicalin;Tuishao Chongji退燒沖劑是我院自制制劑，主要由石膏、知母、黃芩、柴胡、金銀花、大青葉組成。具有清熱解毒、瀉火等作用，臨床用于治療外感熱癥近20年，療效確切。方中主藥黃芩瀉火解毒1，黃芩苷為其主要有效成分。為控制產(chǎn)品質量，采用高效液相色譜法測定了退燒沖劑中黃芩苷的含量。1儀器與試藥Waters高效液相色譜儀；515 pump；U6K進樣器,490紫外檢測器；Baselin 810色譜工作軟件（Waters公司）。島津2101-PC 紫外分光光度計（日本島津制作所）。黃芩苷對照

5、品（中國藥品生物制品檢定所）；退燒沖劑（本院制劑室，批號 970221，970107，961125，961011）。甲醇為色譜純,醋酸為分析純。2方法與結果2.1色譜條件色譜柱Spherisorb C18（5m，4×250mm）；流動相:醋酸緩沖液（pH4.5）-甲醇(11)，流速1.2ml.min-1；檢測波長254nm;靈敏度：0.1AUFS,室溫。2.2系統(tǒng)適應性試驗分別取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液(處方中除去黃芩，按供試品的制備方法制備)各10l分別進樣。在保留時間（tR）6.7min處，供試品和對照品溶液中出現(xiàn)黃芩苷的色譜峰,而黃芩的陰性對照溶液未見此色譜峰

6、。表明在本試驗條件下，黃芩苷的測定不受其它雜質峰的干擾，結果見1。1對照品 樣品及陰性對照品的HPLC譜A 黃芩苷對照品B 樣品C 陰性對照品a 黃芩苷色譜峰2.3標準曲線的制備稱取黃芩苷對照品2.5mg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，加入50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml對照品溶液置于10ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻。分別吸取10l進樣3次，以濃度C對峰高 H進行回歸，結果在0.510mg.L-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回歸方程為：C=7.017×10-3H-3.90，r

7、=0.9998。2.4精密度試驗分別取濃度為0.5、2.5、5.0mg.L-1的對照品溶液各10l,每個濃度重復進樣5次,以峰高計算,黃芩苷的日內(nèi)變異試驗在同1d內(nèi)測定；日間變異試驗連續(xù)5d測定，結果見表1。表1黃芩苷對照品溶液的精密度試驗結果(n=5)黃芩苷濃度（mg.L-1）日內(nèi)日間測得濃度平均值（mg.L-1）RSD（%）測得濃度平均值（mg.L-1）RSD（%）0.50.511.620.522.862.52.461.492.423.595.04.862.224.943.232.5穩(wěn)定性試驗精密吸取同一批供試品溶液10l，每間隔0.5h進樣一次，測定峰高，結果表明峰高積分值在3h內(nèi)穩(wěn)定，

8、RSD為1.54%。2.6重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品（970107）5份，依法平行測定5次，結果RSD為3.64%(n=5)。2.7回收率試驗取己知含量的樣品0.1g（批號970107,含量4.06mg.g-1）5份，精密稱定，分別加入對照品溶液5ml，按樣品含量測定項下操作，同法測定，結果見表2，平均回收率為98.6%，RSD為1.59%。 表2退燒沖劑中黃芩苷的加樣回收率試驗對照品加入量(mg)實測量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.2520.255101.20.2520.24898.40.2520.24597.298.61.590.2520.24697.60.2520.2

9、4998.82.8樣品測定取不同批號的退燒沖劑樣品0.1g，精密稱定，用50%甲醇溶液溶解，濾至100ml容量瓶中，并自漏斗上稀釋至刻度，搖勻。取少量溶液離心,上清液用微孔濾膜（0.45m）濾過，濾液作為供試品溶液。精密取對照品和供試品溶液各10l，重復進樣3次，依前法測定，據(jù)峰高以外標法計算樣品中黃芩苷的含量，結果見表3。 表3退燒沖劑含量測定結果批號樣品含量(mg.g-1)RSD(%)9610114.351.689611253.231.119701074.062.049702213.781.473討論3.1有關黃芩苷的測定方法有紫外分光光度法2，薄層掃描法3，HPLC法4、5等。本文在退燒

10、沖劑含量測定中采用HPLC法，并對多種流動相及流動相的不同比例進行了篩選，結果以醋酸緩沖液（pH4.5）-甲醇(11)為好；并且同法測定了陰性對照溶液，結果黃芩苷可以基線分離且不受其它組分干擾，分離效果好。3.2經(jīng)過對多批樣品中黃芩苷的含量測定表明，該方法簡便、準確，可以控制產(chǎn)品的質量。 作者簡介：馬秀?，女，博士研究生，主管藥師。作者單位：馬秀?（中國人民解放軍濟南軍區(qū)總醫(yī)院濟南250031）李熔（河南省洛陽市商業(yè)職工醫(yī)院洛陽471000）參考文獻：1中國藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部.廣州:廣東科學技術出版社，1995；2702石淑琴，郭軍，闞志軍.二階導數(shù)法測定雙黃連注射劑中黃芩苷的含量.中成藥,1992；14(5):103呂方軍.薄層掃描法測定銀黃注射液中綠原酸與