余甘子葉提取物對慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠的保護(hù)作用研究

1、余甘子葉提取物對慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠的保護(hù)作用研究         09-09-09 10:05:00     作者：鐘振國，曾春蘭    編輯：studa20【摘要】  目的研究余甘子葉提取物是否對慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠有保護(hù)作用。方法采用氣管內(nèi)注入脂多糖(LPS)及煙熏的混合刺激方法建立慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠模型，采用病理組織切片及血氣分析方法觀察余甘子葉提取物對慢性支氣管炎及肺氣腫的病理及血氧含量的影響。結(jié)果余甘

2、子葉提取物乙酸乙酯膏（cc）部位對由LPS+煙熏引起的慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠的支氣管炎癥及肺泡病理損害有明顯保護(hù)作用，能減少支氣管壁炎癥細(xì)胞浸潤及肺大泡形成，并能提高動脈血氧含量，各項指標(biāo)均優(yōu)于模型對照組及陽性藥物組，而接近于正常對照組。結(jié)論余甘子葉提取物cc部位具有防治慢性支氣管炎并肺氣腫的作用。 【關(guān)鍵詞】  余甘子葉提取物 慢性支氣管炎 肺氣腫AbstractObjectiveTo study the effect of  the extract from leaves of Phyllanthus emblica L. on chronic bronchitis

3、and emphysema in rats, and provide experimental basis for the exploitation of the leaves of Phyllanthus emblica L.MethodsThe rat model of chronic bronchitis and emphysema was established by intratracheal instillation of lipopolysaccharide(LPS) twice and exposed to cigarette smoke daily.ResultsThe cc

4、 part could obviously lessen the infictration of inflammatory cells and formation of emphysema, increase arterial oxygen content, most of observational indexes were better than those in model group and EM treated group.ConclusionThe cc part has obviously protective effet on chronic bronchitis and em

5、physema.Key wordsThe extracts of leaves of Phyllanthus emblica L.；  Chronic bronchitis    余甘子葉Phyllanthus  emblica L.系大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（Phyllanthus）落葉小喬木或灌木的葉，余甘子樹在我國主要分布在福建、廣東、云南、貴州、四川、海南、廣西等省區(qū)，資源豐富。余甘子具有化痰止咳、健胃消食、清熱生津、保肝解毒等功效。主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽喉痛、白喉、煩熱口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血壓病、肥胖

6、癥、高脂血癥、濕熱性水腫和尿頻等。在我國約有16個民族使用該藥，其中以漢族和藏族等尤為習(xí)用1。余甘子是一味重要的傳統(tǒng)民族藥，已被載入多版中國藥典2。除余甘子外，余甘子葉也具有重要的藥理作用，在廣西民間常用來治療慢性咳嗽等疾病。我們的前期研究工作已顯示余甘子葉在體內(nèi)外具有廣泛的抗菌作用，然而，余甘子葉是否對慢性支氣管炎、肺氣腫具有治療作用仍然不清楚。為此，本項目主要研究余甘子葉提取物對慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠的保護(hù)作用?，F(xiàn)報道如下。1  材料與方法1.1  材料1.1.1  動物清潔級Wistar雄性大鼠，體重180230 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證

7、號：SCXK桂2003-0003。1.1.2  儀器設(shè)備自制0.24立方米玻璃艙（1.0 m×0.6 m×0.4 m）；快速血氣分析儀，Rapidlab348,美國Bayer公司產(chǎn)品。1.1.3   試劑LPS，購自美國sigma公司，用PBS液配成濃度為1 mg/ml溶液；甲天下牌烤煙型香煙，焦油含量15 mg，煙堿含量1.1 mg，廣西卷煙總廠生產(chǎn)；無水氯化鈣，上海泗聯(lián)化工廠產(chǎn)品，批號011001；變色硅膠，青島裕寶精細(xì)化工有限公司產(chǎn)品，批號050917；水合氯醛；天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所產(chǎn)品，批號040413；紅霉素片，0.125 g/片

8、，河南天方藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，批號050411230。1.1.4  試藥余甘子葉提取物乙酸乙酯膏（cc）部位，余甘子葉采自廣西邕寧縣，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)教授鑒定，經(jīng)提取分離和抗菌篩選，獲得對抗菌效果較好的醋酸乙酯膏部位（cc）。1.2  方法1.2.1  動物分組取60只體重180230 g的清潔級雄性Wistar大鼠，采用隨機(jī)、均衡方法設(shè)計分為6組，即正常對照組、模型組、余甘子葉cc部位高、中、低劑量組、紅霉素對照組，每組10只；造模3周后開始給藥，給藥時間為15 d，每天給藥后照常煙熏。1.2.2  實驗?zāi)Ｐ椭谱髡φ战M標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)5周，大鼠可自由

9、進(jìn)食、飲水。每天放入玻璃艙內(nèi)2 h，但不予煙熏。模型組（慢性支氣管炎肺氣腫組），第1，14天氣管內(nèi)每次注入LPS溶液0.2 ml，每天上、下午分別在0.24 L玻璃艙內(nèi)用香煙煙熏1 h。每次20支香煙，共40支/d，第1，14天除外。連續(xù)5周。玻璃艙兩端各有一小孔與外界相通，保證常壓狀態(tài)，艙內(nèi)放置無水氯化鈣及變色硅膠吸收水分和二氧化碳，大鼠可自由進(jìn)食、飲水。給藥組在造模滿3周后開始給藥。cc部位高、中、低劑量組給藥量相當(dāng)于臨床用量的30，20和10倍，濃度分別為15，10，5 mg/ml，1 ml/100 g大鼠體重。紅霉素（100 mg/ml）陽性藥物對照組給藥量為1 ml/100 g體重，

10、與臨床用量（70 kg/人）相當(dāng)。1.2.3  標(biāo)本采集及分析實驗滿5周后大鼠禁食不禁水12h后取標(biāo)本及檢測和分析：動脈血氧含量測定：從腹主動脈采集，用快速血氣分析儀分析各組血氧含量。支氣管肺泡液細(xì)胞計數(shù)：用10 ml Hanks液分2次（5 ml/次）行左支氣管肺泡灌洗，合并灌洗液后離心(2 000 r/min)10 min，棄上清液，細(xì)胞用預(yù)冷的Hanks液洗滌3次后，用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。余液制成細(xì)胞片，瑞氏染色行細(xì)胞分類計數(shù)。計算心臟指數(shù)：參照Fulton方法3，沿室間隔右緣剪下右心室（RV），留下左心室加室間隔(LV+S)。分別稱重后，計算右心室肥大指數(shù)（RVHI）：RVHI

11、=RV/(LV+S)。肺病理組織檢查：取右肺中葉靠近肺門處，用10%中性甲醛固定，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色，觀察肺組織病理改變。根據(jù)Cosio等4設(shè)計的小氣管病變評估方法和標(biāo)準(zhǔn)加以改進(jìn)后觀察氣管炎癥病變及評分：選取直徑1 100 m（管腔最短徑/最長徑0.7）的膜性細(xì)支氣管，觀察小氣管炎癥包括以下6項指標(biāo)：上皮脫落糜爛；上皮杯狀細(xì)胞增生；管壁中性粒細(xì)胞浸潤；管壁淋巴細(xì)胞浸潤，淋巴濾泡形成；管壁單核巨噬細(xì)胞浸潤；管腔滲出。對各組大鼠按上述6項指標(biāo)分別評分，無病變者為0分，將輕度、中度、重度異常分別評為1，2，3分，然后累加每一指標(biāo)的得分，將累加分占該標(biāo)本內(nèi)所被檢細(xì)支氣管可能得到的最高分的百分?jǐn)?shù)作為該標(biāo)本細(xì)支氣管這一指標(biāo)的病理積分，6項指標(biāo)的病理積分相加，即可得每一標(biāo)本細(xì)支氣管的病理得分（每項病理指標(biāo)的最大得分為100分，6項指標(biāo)最大病理總分為600分）。1.3  統(tǒng)計方法結(jié)果計量資料以±s表示，EXCEL軟件分析數(shù)據(jù)，兩組間均數(shù)差異用t檢驗（方差不齊時采用t檢驗校正公式）。2  結(jié)果2.1  右心室肥大指數(shù)計算 各組大鼠右心室肥大指數(shù)（R