養(yǎng)肝利膽顆粒治療膽囊炎作用機(jī)理研究

1、養(yǎng)肝利膽顆粒治療膽囊炎作用機(jī)理研究         作者：高建平，金若敏，朱培庭，吳耀平，沈偉，陳艷艷 【摘要】 目的觀察養(yǎng)肝利膽顆粒的溶石和抗菌作用。方法采用體外溶石實(shí)驗(yàn)觀察該藥的溶石作用；采用豚鼠膽色素結(jié)石模型觀察口服養(yǎng)肝利膽顆粒對動(dòng)物的成石率和膽汁成分的影響；采用體外試管法研究藥物的直接抑菌作用                  &

2、#160;  作者：高建平，金若敏，朱培庭，吳耀平，沈偉，陳艷艷 【摘要】  目的觀察養(yǎng)肝利膽顆粒的溶石和抗菌作用。方法采用體外溶石實(shí)驗(yàn)觀察該藥的溶石作用；采用豚鼠膽色素結(jié)石模型觀察口服養(yǎng)肝利膽顆粒對動(dòng)物的成石率和膽汁成分的影響；采用體外試管法研究藥物的直接抑菌作用以及含藥血清和含藥膽汁的抑菌作用。結(jié)果養(yǎng)肝利膽顆粒體外能溶解膽色素型、膽固醇型和混合型結(jié)石;體內(nèi)能降低模型豚鼠的成石率，升高膽汁中總膽汁酸的量，降低總膽紅素和游離膽紅素含量；藥物對痢疾桿菌、變形桿菌、大腸桿菌等有直接抑制作用；含藥血清和含藥膽汁對大腸桿菌、痢疾桿菌等有較強(qiáng)的抑菌作用。結(jié)論養(yǎng)肝利

3、膽顆粒治療膽囊炎主要的作用機(jī)理是其具有溶石和抗菌作用。 【關(guān)鍵詞】  養(yǎng)肝利膽顆粒； 膽囊炎； 溶石； 抗菌； 作用機(jī)理Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of Yang-Gan-Li-Dan Granule  (YGLDG) on litholysis and bacteriostasis. MethodsThe effect of the granule on litholysis was tested in vitro. The model of bile pigment calculus in guinea pig

4、s was established,and the effect of the granule on anti-lithogenesis and on bile components was also observed in vitro. By adding the granule dilution, the drug contained serum and bile, which were prepared from the rats given the granule per os, directly into the culture medium, the anti-bacteria e

5、ffect of the granule was evaluated.ResultsIn vitro, YGLDG solution could increase the litholytic effect on human bile pigment calculus, chelecsterol calculus and combined calculus. In vitro, it could inhibit lithogenesis in guinea pigs, elevate the level of total bile acid and reduce the levels of t

6、otal and free bilirubin. In vitro, YGLDG showed the bacteriostatic effect for Bacillus dysteriae, Escherichia coli, Staphylococcus aureus etc. The drug-contained serum and bile had the obvious bacteriostatic effect on Escherichia coli, Bacillus dysteriae etc.ConclusionThe results show that the main

7、mechanisms of YGLDG on treating cholecystitis are related to its effects on litholysis and bacteriostasis.Key words:Yang-Gan-Li-Dan Granule (YGLDG);   Cholecystitis;   Litholysis;   Bacteriostasis;   Mechanism    膽囊炎是膽道系統(tǒng)常見疾病，其發(fā)生和發(fā)展的主要原因多與膽囊結(jié)石和細(xì)

8、菌感染等有關(guān)13。養(yǎng)肝利膽方是上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院名中醫(yī)朱培庭教授多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，主要由白芍、首烏等中藥組成，適用于屬于肝陰不足之證的膽道感染和膽石癥。臨床實(shí)驗(yàn)顯示該方對于膽囊炎和膽石癥治療的總有效率達(dá)90%以上4。已有研究證實(shí)養(yǎng)肝利膽顆粒具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解痙以及保肝利膽等作用5，6，證明該方對膽囊炎的常見臨床癥狀和病理生理異常具有改善作用。為進(jìn)一步探討其治療膽囊炎的作用機(jī)理，筆者對養(yǎng)肝利膽顆粒溶石防石和抗菌等作用進(jìn)行了研究。結(jié)果報(bào)道如下。1  材料與儀器1.1  試劑和藥物 養(yǎng)肝利膽顆粒（干膏粉），四川美大康藥業(yè)股份有限公司提供，批號020301。每克干

9、膏粉相當(dāng)于4 g生藥（以下簡稱養(yǎng)肝利膽）。膽寧片，上海中藥制藥一廠生產(chǎn)，批號000715。熊去氧膽酸片，上海黃河利亞制藥有限公司生產(chǎn)，批號000101。頭孢他啶，粉針劑，ELI LILLY DO BRASIL LTDA.生產(chǎn)，批號100600C。各藥物用蒸餾水配制成相應(yīng)的濃度備用。烏拉坦，中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號C20021104。1.2  儀器  BTR-815型生化分析儀，西班牙臨床診斷有限公司產(chǎn)品。微量分光光度儀（酶標(biāo)儀），美國MD 250型。1.3  動(dòng)物 Wistar大鼠，體重200300 g；豚鼠，體重250320 g，雌雄

10、皆用，均由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號分別為醫(yī)動(dòng)字02-24-4號和20-60號。1.4  其他 膽色素型、膽固醇型、混合型人體結(jié)石，均由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院提供。50 g致石飼料（自制）中，含正常飼料45.43 g，致石性藥物4.57 g(其中有酪蛋白1 g，蔗糖1.5 g，豬油1 g，微晶纖維素1 g，膽酸0.02 g，膽固醇0.05 g)；正常飼料由上海申旺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌，綠膿桿菌，痢疾桿菌，溶血性鏈球菌，糞鏈球菌，肺炎桿菌，由上海市防疫站和衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，血清肉湯培

11、養(yǎng)基，血清瓊脂培養(yǎng)基，由上海第二醫(yī)科大學(xué)微生物教研室自制。2 方法2.1 溶石2.1.1  體外溶石作用7   取人膽色素型、膽固醇型和混合型3種結(jié)石，洗凈，80恒溫干燥24 h，稱取100101 mg（W1）結(jié)石裝入含有經(jīng)60Co輻照滅菌的藥物或生理鹽水10 ml的小瓶內(nèi)，隨機(jī)分為正常對照組，養(yǎng)肝利膽大、小劑量組，膽寧片組和熊去氧膽酸組。將小瓶置于37恒溫箱中，每兩天無菌操作換藥液或生理鹽水1次，共30 d，末次換藥或生理鹽水后48 h取出結(jié)石，沖洗干凈后同前法烘干，稱重（W2），計(jì)算溶石率。    溶石率（%）=W1-W

12、2W1×100%2.1.2 體內(nèi)溶石作用  取健康豚鼠，隨機(jī)分為正常對照組，模型對照組，養(yǎng)肝利膽大、中、小劑量組和膽寧片組。除正常對照組動(dòng)物每天喂以正常飼料外，其它各組動(dòng)物均喂以致石飼料制備豚鼠膽色素結(jié)石模型8。同時(shí)各組動(dòng)物分別灌服生理鹽水或不同藥物（見表2）10 ml/kg，1次/d，連續(xù)6周。末次給生理鹽水或藥物24 h后，稱鼠體重，各鼠腹腔注射25%烏拉坦麻醉，剖開膽囊觀測其成石情況，同時(shí)取膽汁作膽汁成分檢測。2.2  抑菌2.2.1 體外直接抑菌作用9將養(yǎng)肝利膽、膽寧片分別用生理鹽水溶解稀釋至200 mg/ml，再加等量的營養(yǎng)肉湯或血清肉湯，經(jīng)1

13、1530 min消毒滅菌。采用試管稀釋法，用微量加樣器取制備好的菌液0.1 ml(相當(dāng)于108CFU/ml)加至已對倍稀釋的各受試試管中（各管樣品的稀釋度為12，14，18，116，132，164，1128，1256），同時(shí)設(shè)肉湯對照管和待測藥物原液對照管。將試管置35孵育48 h后觀測結(jié)果，求MIC。2.2.2 體外藥物血清抑菌作用         含藥血清的制備：取健康Wistar大鼠，隨機(jī)分為正常對照組、養(yǎng)肝利膽組、頭孢他啶組。前兩組分別灌胃給予蒸餾水或養(yǎng)肝利膽28.8 g生藥/（kg·d），每次給藥容量為9

14、 ml/kg，2次/d，連續(xù)7次。末次給蒸餾水或藥后1.5 h，腹腔注射25%烏拉坦麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)脈取血；頭孢他啶（1.8 g/kg）組腹腔注射給藥，給藥容量為4.5 ml/kg，30 min后，同法取血。離心分離血清，置于56水浴中滅活30 min，備用。   體外抑菌作用  ：將裝有1 ml營養(yǎng)肉湯試管分為4組，依次為正常對照組、養(yǎng)肝利膽組、頭孢他啶組和空白對照組，分別加入空白血清、含養(yǎng)肝利膽血清、含頭孢他啶血清和營養(yǎng)肉湯各1 ml。按“2.2.1”方法將各菌液接種至各試管中，將試管置35孵育，分別于0，6，12 h和24 h后取出，參照文獻(xiàn)9用分光光度儀在波長590 nm下測定其OD值。2.2.3 含藥物膽汁抑菌作用       含藥膽汁的制備：取健康豚鼠，分組和給藥量同“2.2.2”項(xiàng)中“含藥血清的制備”項(xiàng)下，前兩組分別灌胃給予蒸餾水或養(yǎng)肝利膽，2次/d，連續(xù)8次，末次給蒸餾水或藥后2 h，腹腔注射25%烏拉坦麻醉動(dòng)物，從膽囊中抽取膽汁；頭孢他啶組腹腔注射給藥1次，1.5 h后，同法取膽汁，并將膽汁按18比例稀釋備用。