高中生物 實(shí)驗(yàn)：大腸桿菌的培養(yǎng)和分離課件 浙科版選修1

1、實(shí)驗(yàn)1：大腸桿菌的培養(yǎng)和分離病毒細(xì)菌放線(xiàn)菌真菌原生生物單細(xì)胞原核，分支狀的菌絲（基內(nèi)、氣生）單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體（種群）菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)芽孢：細(xì)菌的休眠體結(jié)構(gòu)異養(yǎng)型，兼性厭氧型，革蘭氏陰性(紅色)(G-)物質(zhì)(元素)組成：C H O N P S按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基凝固劑凝固劑瓊脂瓊脂擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)分離純化，鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏分離純化，鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基鑒定

2、培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基成分作用主要來(lái)源碳源主要作能源物質(zhì)無(wú)機(jī)碳(CO2)或有機(jī)碳(糖類(lèi))氮源合成含N類(lèi)化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨無(wú)機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓等水生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)促生長(zhǎng)維生素，AA，堿基等消毒：較為溫和的方法，如酒精 注：消毒不能殺死芽孢滅菌：強(qiáng)烈，所有，完全無(wú)菌滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min（牛奶）3、化學(xué)藥劑消毒法:用70%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線(xiàn)消毒（空氣）(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：(2)

3、常用滅菌的方法：常用滅菌的方法：1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 下加熱下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌：100kPa、121 下維持下維持15-30min.稱(chēng)量-計(jì)算-溶化-滅菌-倒平板滅菌：加上封口膜，用牛皮紙包好放在高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，1Kg壓力滅菌15Min倒平板紫外燈，過(guò)濾風(fēng)，酒精燈，酒精棉球在火焰旁右手3指拿錐形瓶，2指拿封口膜使錐形瓶的瓶口迅速通過(guò)火焰左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋待平板冷卻凝固后，將平板倒過(guò)來(lái)放置從大腸桿菌斜面錐形瓶中的液體培養(yǎng)基接種好后在37度搖床振蕩培養(yǎng)12h工具：接種環(huán)在接種前

4、要滅菌分離方法：平板劃線(xiàn)分離法原理：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線(xiàn)后，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。只能蘸一次、再次劃線(xiàn)從上次末端開(kāi)始、劃好倒置培養(yǎng)1-2天、劃線(xiàn)末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落 灼燒接種環(huán)冷卻 劃線(xiàn) （第一區(qū)域）蘸取菌液灼燒接種環(huán)冷卻 劃線(xiàn) （第二區(qū)域）灼燒接種環(huán)冷卻 劃線(xiàn) （第三區(qū)域）灼燒接種環(huán)冷卻 劃線(xiàn) （第四區(qū)域）灼燒接種環(huán)冷卻 劃線(xiàn) （第五區(qū)域）灼燒接種環(huán)平板倒置放置培養(yǎng)第一區(qū)域第二區(qū)域第三區(qū)域第四區(qū)域第五區(qū)域 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線(xiàn)為什么在操作的第一步以及每

5、次劃線(xiàn)之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物能存在的微生物污染培養(yǎng)物每次劃線(xiàn)前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束每次劃線(xiàn)前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)時(shí)，接后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，從而種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，從而通過(guò)劃線(xiàn)次數(shù)的增加，使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種的數(shù)目通過(guò)劃線(xiàn)次數(shù)的增加，使每次劃線(xiàn)時(shí)

6、菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落逐漸減少，以便得到菌落劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線(xiàn)？進(jìn)行劃線(xiàn)？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.3.在作第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么在作第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次