百恩維生物產(chǎn)品與服務(wù)手冊(cè)_圖文

1、 公司簡(jiǎn)介百恩維生物科技有限公司(Biowit Technologies Ltd. ,是一家專業(yè)從事生物技術(shù)研發(fā)并 提供相關(guān)產(chǎn)品和服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)。 百恩維生物科技有限公司集研發(fā)、 生產(chǎn)、 營(yíng)銷和服務(wù) 于一體,為客戶提供基因、蛋白、細(xì)胞系等生物技術(shù)研發(fā)所需的相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)研發(fā)服務(wù)。 公司目前提供的產(chǎn)品和服務(wù)主要包括 DNA 和基因的克隆、 各種病毒的包裝、 基因表達(dá)及蛋白 產(chǎn)物的分離純化、 干細(xì)胞培養(yǎng)液、 干細(xì)胞分離和存儲(chǔ)以及適于臨床用的個(gè)體特異性誘導(dǎo)型多 能干細(xì)胞的制備和存儲(chǔ)。 公司的長(zhǎng)期目標(biāo)是推出人類重大疑難疾病的干細(xì)胞治療及基因治療 臨床方案和預(yù)防措施,重點(diǎn)研究神經(jīng)疾病、視網(wǎng)膜疾病、白

2、血病、血友病、艾滋病和肝炎的 干細(xì)胞治療和基因治療方案,及提供高效的預(yù)防動(dòng)物或人的傳染病、流行病的疫苗。百恩維目前的員工絕大多數(shù)為技術(shù)人員, 其中大部分具有碩士以上的學(xué)歷。 主要技術(shù)骨 干曾在國(guó)內(nèi)外知名學(xué)府和國(guó)際一流制藥公司從事研發(fā)多年,公司擁有由在分子操作、 蛋白 質(zhì)分離與純化、 病毒包裝、 干細(xì)胞培養(yǎng)與標(biāo)記、 轉(zhuǎn)基因模型研究領(lǐng)域等方面成果卓越的國(guó)內(nèi) 外知名專家領(lǐng)頭的專業(yè)技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。百恩維與國(guó)內(nèi)外知名大學(xué)、中科院以及醫(yī)科院等知名科研機(jī)構(gòu)建立了良好的合作關(guān)系。 這種廣泛的國(guó)際、 國(guó)內(nèi)科研合作, 有利于發(fā)揮各自優(yōu)勢(shì), 確保百恩維生物在干細(xì)胞研究領(lǐng)域 的技術(shù)能夠持續(xù)更新。百恩維引進(jìn)了國(guó)際先進(jìn)的設(shè)

3、備、 國(guó)際規(guī)范的質(zhì)量保證體系及先進(jìn)的工藝流程, 始終堅(jiān)持 質(zhì)量至上的宗旨,致力為客戶提供最好的服務(wù)。百恩維將本著“ 專注、創(chuàng)新、誠(chéng)信、和諧 ”的企業(yè)理念,為生物技術(shù)能夠?yàn)槿祟惤】翟?福而不懈追求!百恩維生物 1 主要產(chǎn)品一、 細(xì)胞因子  細(xì)胞因子是一類能在細(xì)胞間傳遞信息、 調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖或分化、 或調(diào)節(jié) 機(jī)體免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)或小分子多肽, 廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)。 我們提供各種純化的細(xì)胞因子 (cytokine, CK 例如 bFGF 、 TGF 、 TGF 、 NT3、 EGF 、VEGF 、 BMP2、 IFN 、 G-CSF 、 GM-CSF 、 Myostatin 。二、 重編程因子

4、  重編程因子(SOX2、 OCT4、 KLF4、 C-MYC 、 NANOG 經(jīng)過了進(jìn) 一步改造,使其不僅能有效地跨越細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),而且能有效地進(jìn)入細(xì)胞核。 經(jīng)純化后的重編程因子可用于制備非整合性的個(gè)體特異性 iPS細(xì)胞, 也可用于結(jié)構(gòu)和功能分析。三、 重編程細(xì)胞抽提液  重編程細(xì)胞抽提液中含工程化重編程因子(SOX2、 OCT4、 KLF4、 C-MYC 、 NANOG , 這些因子能高效進(jìn)入細(xì)胞及細(xì)胞核,可用于制備安全的非整合型個(gè)體特異性 iPS 細(xì)胞。四、 重編程病毒  1. 整合型慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒  提供攜帶細(xì)胞重編程因子的整合型慢病毒和

5、逆轉(zhuǎn)錄病毒,其攜帶的因 子有 SOX2、 OCT4、 Klf4、 C-myc 、 Lin28和 Nanog 。這些病毒可以用于常規(guī)的細(xì)胞重編程和 iPS 細(xì)胞的制備。2. 非整合慢病毒和昆蟲桿狀病毒  昆蟲桿狀病毒是非整合型病毒,不僅可感染昆蟲細(xì)胞,而且還能有效地感染人、鼠等多種哺乳類細(xì)胞,是基因表達(dá)的又一個(gè)好體系。為獲得安 全性更好的 iPS 細(xì)胞,我們研發(fā)出非整合型的慢病毒和昆蟲桿狀病毒,其攜帶的重編程因子有 SOX2、 OCT4、 Klf4、 C-myc 、 Lin28和 Nanog 。 百恩維生物 2 主要技術(shù)平臺(tái)及服務(wù)  一、 分子克隆平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)

6、  我們的分子克隆平臺(tái)主要包括調(diào)控元件的克隆,基因修飾,基因報(bào)告系統(tǒng)、基因表達(dá)系統(tǒng) 和轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建。 基于分子克隆技術(shù)平臺(tái),我們提供的服務(wù)包括任何 DNA 片段的克隆,包括任何 DNA 調(diào)控 元件的克隆及 ShRNA 基因干涉質(zhì)粒、 基因表達(dá)、 基因打靶等質(zhì)粒的構(gòu)建。 表達(dá)系統(tǒng)包括 E. coli、 昆蟲及哺乳類細(xì)胞。1. 一般性 DNA  克隆服務(wù)  以動(dòng)物組織或細(xì)胞提取的 gDNA 或者 cDNA 為模板, 或由客戶提供已帶有欲克隆基因片段或各功能元件片段的載體。 應(yīng)客戶要求, 將基因片段或者各功能元件片段亞克隆至各載體。2. 特殊的 DNA 克隆服務(wù) &

7、#160; 1 多 ShRNA 干涉 construct 的構(gòu)建將多個(gè) ShRNA 同時(shí)克隆到一個(gè)載體上,可作用于同一個(gè)基因,其沉默效率高達(dá) 90%以上,甚至接近 100%。該系統(tǒng)免除了建立常規(guī)ShRNA 基因干涉系統(tǒng)的最佳序列摸索過程,可真正替代傳統(tǒng)的基因沉默技術(shù)和基因敲除技術(shù)。 百恩維生物 3 2 哺乳類細(xì)胞附加體非整合表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建建立的哺乳類細(xì)胞附加體非整合表達(dá)系統(tǒng),其附加體可以象質(zhì)粒一樣在哺乳類細(xì)胞內(nèi)復(fù)制 形成多拷貝但又不整合到細(xì)胞的基因組中,因此既能實(shí)現(xiàn)基因的高表達(dá)又免除了基因整合所帶 來的副作用。另一方面,附加體載體的 DNA 裝載量異常之大,幾乎可容納任何大小的基因。

8、因 此,我們建立的附加體非整合表達(dá)系統(tǒng)免除了常規(guī)基因修飾、基因表達(dá)和基因治療過程中合適 載體篩選的繁瑣過程。二、 病毒包裝平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)  可提供多種高滴度的病毒包裝服務(wù), 包括 DNA 整合型慢病毒和非整合型慢病毒 (lentivirus 、 逆轉(zhuǎn)錄病毒 (retrovirus 、各種血清型的腺相關(guān)病毒(AAV 及昆蟲桿狀病毒(baculovirus 。 利用我們的病毒包裝技術(shù),對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì) 胞等,能大大提高目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,而且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加, 這就為 RNAi,cDNA 克隆以及報(bào)告基因的研究提供了一個(gè)有

9、利的途徑; 而且還用來進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞 株的篩選;還可以為活體動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的包含目的基因的病毒液。最重要的是,病 毒系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化,解決了常規(guī)病毒包裝方法滴度不高,純度不高的問題。1. 整合型慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)  整合型慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒既可感染分裂細(xì)胞也可感染非分裂細(xì)胞,可裝載達(dá)長(zhǎng)度達(dá) 10kb 以上的 DNA 片段,比瞬時(shí)轉(zhuǎn)染更適合用于 構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。 包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝 RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助因子。 利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,可產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表

10、達(dá)效應(yīng)分子。 2. 非整合型慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)  非整合型慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒既可感染分裂細(xì)胞也可感染非分裂細(xì)胞,還很容易感染人、 猴、鼠等絕大多數(shù)哺乳類細(xì)胞,可很好的替代傳統(tǒng)的 DNA 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,并且免除了常規(guī) DNA 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的條件摸索過程 (包括轉(zhuǎn)染試劑的選擇 及劑量比的摸索 。通過改造傳統(tǒng)的慢病毒的包裝信號(hào)和跨膜運(yùn)輸信號(hào), 建立高效的 DNA 非整合型導(dǎo)入系統(tǒng), 并不破壞宿主細(xì)胞的基因組,不僅可產(chǎn)生與整合型慢病毒同樣高滴度的病毒顆粒,還可避免整合型慢病毒因 DNA 整合到宿主細(xì)胞所帶來的副作用。3. 腺病毒包裝服務(wù)  腺病毒的結(jié)構(gòu)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)聚集形成病毒衣殼

11、,病毒的基因組被包裝進(jìn)去,形成有感染 能力的病毒顆粒,并最終裂解宿主細(xì)胞被釋放出去,完成腺病毒的生活周期。腺病毒有明顯的種屬特異性,例如人的野生型 5型腺病毒感染其他的非人類細(xì)胞(如鼠類細(xì)胞后可以表達(dá)早期基因,基因組也可有一定程度的復(fù)制并能夠形 成一些不成熟的病毒顆粒,卻不能形成成熟的病毒顆粒,也不能二次感染其他細(xì)胞。腺病毒具有宿主范圍廣,能在增殖和非增殖細(xì)胞中感染和表達(dá)基因;能有效進(jìn)行增殖,滴度高;與人類基因同源;不整合到染色體中,無插入致突變性 , 對(duì)人致病性低;能在懸浮培養(yǎng)液中擴(kuò)增;能同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因等優(yōu)點(diǎn)。4. 腺相關(guān)病毒包裝服務(wù)  腺相關(guān)病毒(AAV 是一類微小、無被膜及具

12、有二十面體結(jié)構(gòu)的病毒。多數(shù)情況下, AAV 在培養(yǎng)的正常細(xì)胞中不發(fā)生產(chǎn)毒性感染, 只在有輔助病毒包括腺病毒或皰疹病毒共同感染時(shí)才發(fā)生產(chǎn)毒性感染, 長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是一種缺 陷性病毒。 因此, AAV 被廣泛用于基因表達(dá)載體的構(gòu)建以及基因治療。我們提供各種血清型的 AAV 包裝服務(wù),對(duì)于 2/2型 AAV ,我們還提供了一種特殊的濃縮與純化方法,提高了病毒顆粒的純度和滴度。5. 昆蟲桿狀病毒包裝服務(wù)  昆蟲桿狀病毒不僅可以感染昆蟲細(xì)胞,也可將外源基因?qū)敫鞣N哺 乳類的細(xì)胞,如人體細(xì)胞、小鼠細(xì)胞等。因此昆蟲桿狀病毒因此可能成為哺乳動(dòng)物基因治療的媒介載體,有望在未來人類的基因治療中得到應(yīng)用。

13、我們提供的相關(guān)服務(wù)包括制備高滴度、高純度的病毒顆粒。三、 蛋白平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)  公司裝備有先進(jìn)的蛋白表達(dá)、放大與純化設(shè)備,如發(fā)酵罐、多功能生物反應(yīng)器、 Stansted 超高壓納米均質(zhì)機(jī)、 GE QuixStand 膜分離系統(tǒng)、 GE AKTA系統(tǒng)等,提供各種表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建、 產(chǎn)物的純化和放大以及工藝的優(yōu)化。提供從各種不同規(guī)模的表達(dá)體系中高效表達(dá)、分離及純化 目標(biāo)蛋白的工藝優(yōu)化服務(wù)。對(duì)于工程菌,我們提供從搖瓶培養(yǎng)到高密度發(fā)酵的優(yōu)化方案。若表 達(dá)產(chǎn)物形成包涵體,我們還提供蛋白復(fù)性服務(wù)。對(duì)于各種哺乳類細(xì)胞,我們不僅提供小規(guī)模平 皿培養(yǎng)的條件優(yōu)化,也提供貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)的放大工藝的優(yōu)

14、化。 1. E.  coli  表達(dá)與純化服務(wù)  提供載體構(gòu)建、表達(dá)檢測(cè)、高密度發(fā)酵、蛋白純化等多項(xiàng)服務(wù),也可以為客戶優(yōu)化載體表 達(dá)與蛋白分離的條件。2. 哺乳細(xì)胞表達(dá)與純化服務(wù)  提供載體構(gòu)建、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、表達(dá)檢測(cè)及大容量細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)和蛋白純化等服務(wù)。3. 昆蟲細(xì)胞表達(dá)與純化服務(wù)  提供昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)檢測(cè)及大容量細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)和蛋白純化等多項(xiàng)服務(wù)。4. 哺乳類穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株服務(wù)  我們提供慢病毒表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建、病毒包裝和穩(wěn)定細(xì)胞株篩選等多項(xiàng)服務(wù)。四、 組織干細(xì)胞平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)  成體干細(xì)胞經(jīng)常位于特定的微環(huán)境

15、中。微環(huán)境中的間質(zhì)細(xì)胞能夠產(chǎn)生一系列生長(zhǎng)因子或配 體,與干細(xì)胞相互作用,控制干細(xì)胞的更新和分化。許多成體的組織和器官,比如表皮和造血 系統(tǒng),具有修復(fù)和再生的能力。成體干細(xì)胞在其中起著關(guān)鍵的作用。在特定條件下,成體干細(xì) 胞或者產(chǎn)生新的干細(xì)胞,或者按一定的程序分化,形成新的功能細(xì)胞,從而使組織和器官保持 生長(zhǎng)和衰退的動(dòng)態(tài)平衡。最近研究表明,以往認(rèn)為不能再生的神經(jīng)組織仍然包含神經(jīng)干細(xì)胞, 說明成體干細(xì)胞普遍存在,問題是如何尋找和分離各種組織特異性干細(xì)胞。我們建立了高標(biāo)準(zhǔn) 的細(xì)胞培養(yǎng)室, 整體潔凈度可達(dá)百級(jí), 可提供各種組織干細(xì)胞分離和存儲(chǔ)服務(wù) , 包括人脂肪肝細(xì) 胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、臍帶血干細(xì)胞,

16、并建立個(gè)體特異性組織干細(xì)胞庫,用于干細(xì)胞治療。1. 干細(xì)胞分離與培養(yǎng)服務(wù)  將細(xì)胞從活體組織上分離出來,利用細(xì)胞永生化技術(shù),把微量的干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),可 高效放大, 并不降低其分化的潛能。2. 干細(xì)胞標(biāo)記服務(wù)  對(duì)干細(xì)胞的基因組進(jìn)行修飾,如將編碼熒光蛋白的基因表達(dá)盒穩(wěn)定整合到干細(xì)胞的基因組 中,便于示蹤干細(xì)胞的分化去向,即示蹤其子代細(xì)胞的類型。 五、 iPS 細(xì)胞平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)  提供個(gè)體特異性 iPS 細(xì)胞(誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的制備和存儲(chǔ)服務(wù) , 將個(gè)體特異性體細(xì)胞重 編程成各種類型的 iPS 細(xì)胞,包括 DNA 整合型和非整合型,并建立個(gè)體特異性 iPS 細(xì)

17、胞庫, 用于干細(xì)胞治療。我們還提供各種熒光標(biāo)記的 iPS 細(xì)胞,以便于示蹤 iPS 細(xì)胞的分化去向,即 示蹤其子代細(xì)胞的類型。 六、 細(xì)菌  / 細(xì)胞株平臺(tái)及相關(guān)技術(shù)服務(wù)  提供各種工程菌和遺傳修飾的細(xì)胞株的建立服務(wù)。包括高效表達(dá)的工程化大腸桿菌的建立, 以及各種哺乳類(如人體細(xì)胞、小鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、豬細(xì)胞、猴細(xì)胞等細(xì)胞系的構(gòu)建包括 熒光標(biāo)記、穩(wěn)定表達(dá)、基因沉默和基因敲除。 主要設(shè)備Millipore純水系統(tǒng) ABI 9700 PCR 擴(kuò)增儀 AKTA Bio-Rad Gel Doc 成像系統(tǒng) MicroChemi 成像系統(tǒng) 熒光顯微鏡 發(fā)酵罐 多功能生物反應(yīng)器 百恩維生物 9 Stansted 超高壓納米均質(zhì)機(jī) GE QuixStand 膜分離系統(tǒng) Thermo Scientific 高速離心機(jī) 生物安全柜 百恩維生物 1