柿葉抗老年癡呆活性成分的研究

1、柿葉抗老年癡呆活性成分的研究柿葉為柿科植物柿(DiospyroskakiThunb.)的干燥葉,主要分布于廣西、河南、安徽、陜西、河北和浙江等省,柿葉收載于中國藥典2015年版一部,作為傳統(tǒng)中藥,主要用于缺血性中風(fēng)、心絞痛及內(nèi)出血等;也可作為功能食品和化妝品,用于高血壓、婦女保健等。研究報(bào)道柿葉具有抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、心血管保護(hù)、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗衰老、免疫提高和抗糖尿病等活性。到目前為止,文獻(xiàn)報(bào)道從柿葉中已分離得到80余個(gè)化合物,包括黃酮類、萜類、多酚類,以及多糖類等。本文在綜述了柿葉化學(xué)成分、藥理活性、有效部位和質(zhì)量控制研究的基礎(chǔ)上,對其有效部位進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。干燥柿葉的9

2、5%和50%乙醇的滲濾提取物,分別用石油醚和乙酸乙酯萃取,其乙酸乙酯萃取物通過大孔樹脂柱色譜、硅膠柱色譜、聚酰胺柱色譜、SephadexLH-20柱色譜、開放ODSft色譜及RP-HPL曲手段,分離得到46個(gè)化合物,通過理化常數(shù)測定、波譜數(shù)據(jù)分析等方法,鑒定了全部結(jié)構(gòu),包括環(huán)烯醚萜類化合物4個(gè),木脂素類化合物8個(gè),三萜類化合物19個(gè),黃酮類化合物7個(gè),芳香醇、醛、酸類化合物8個(gè)。其中,新化合物9個(gè),分別為:persimmonoidA、B(1-2),persimmoninC、D、E、F、G、H、I(13-18;25)。已知化合物37個(gè),分別為:女貞苷(3),橄欖苦苷(4),(+)-皮樹脂醇(5)

3、,(+)-丁香脂素(6),(+)-松脂素(7),(+)-皮樹脂醇甘(8),(+)-丁香脂素-B-D-葡萄糖昔(9),(+)-松脂素-B-D-葡萄糖甘(10),(+)-異落葉松脂素(11),(-)-(7'S,8S,8'R)-4,4-dihydroxy-3,3,5,5-tetramethoxy-7,9-epoxylignan-9-ol-7-one(12),kakisaponinA(19),kakisaponinB(20),2a,3a,19a,23-四羥基烏蘇-12-烯-28-O-B-D-叱喃葡萄糖酯(21),ryobuniC(22),28-O-a-L-叱喃鼠李糖(1-2)-B-D-

4、叱喃葡萄糖委陵菜酸酯(23),rotungenicacid28-O-L-rhamnopyranosyl-(1-2)-0-D-glucopyranoside(24),2a,3a,19a,24-四羥基齊墩果-12-烯-28-O-B-D-叱喃葡萄糖酯(26),2a,3a,19a,24-四羥基烏蘇-12-烯-28-O-BB-D-叱喃葡萄糖酯(27),niga-ichigosideF1(28),barbinervicacid(29),rotungenicacid(30),坡模醇酸(31),槲皮素(32),金絲桃苷(33),山奈酚(34),牡荊素(35),黃芪苷(36),三葉豆苷(37),楊梅素(38),

5、對羥基苯乙醇(39),2-甲基苯甲酸(40),2,4-二羥基6-甲基苯乙酮(41),3-(4-羥基-3-甲氧基苯)丙烷-1,2-二醇(42),香草酸(43),原兒茶酸(44),原兒茶醛(45),羥基酪醇(46)。首次從柿葉中分離得到的化合物23個(gè),分別為:化合物3-12,21-28,39-42,45-46。以總黃酮含量和浸膏得率為指標(biāo),采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選柿葉醇提工藝,并考察其石油醚、乙酸乙酯的萃取工藝。同時(shí),我們還考察了柿葉總?cè)频奶崛」へニ嚒Ｗ罱K確定醇提最佳工藝條件為加入10倍量70%乙醇,煎煮2次,每次2小時(shí)。石油醚脫色脫脂3次,乙酸乙酯萃取3次,得到柿葉總黃酮提取物(簡稱EAPL)。柿

6、葉總黃酮和總?cè)街苽涔に嚭侠?、可行。采用HPLC-Q/TOF-M聯(lián)用技術(shù)定性分析了EAPL的32個(gè)主要化學(xué)成分(14個(gè)黃酮,16個(gè)三菇,2個(gè)其它成分),并采用HPLC-QQQ-MS/M電對其中7個(gè)黃酮類成分進(jìn)行了定量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各成分含量差異較大。為了探討從柿葉中分離得到的12個(gè)化合物(4個(gè)環(huán)烯醚萜,8個(gè)木脂素)在抗氧化、神經(jīng)保護(hù)方面的活性及其與結(jié)構(gòu)和含量的關(guān)系，采用HPLC-QQQ-MS/MS用技術(shù)對柿葉和柿果提取物中的這12個(gè)成分進(jìn)行了含量測定,結(jié)果表明,柿葉與柿果所含7個(gè)化學(xué)成分相同，但在柿葉里含量高。采用3種方法（DPPHt、ABTSS和FRAP*）考察了這12個(gè)成分的抗氧化活性，采用過

7、氧化氫誘導(dǎo)的人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株損傷實(shí)驗(yàn)評價(jià)其中11個(gè)成分（3個(gè)環(huán)烯醚萜,8個(gè)木脂素）的神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果顯示:化合物的結(jié)構(gòu)與抗氧化活性有關(guān)聯(lián);另外,一些化合物顯示出了顯著的神經(jīng)保護(hù)活性。本實(shí)驗(yàn)考察EAPLMAB25-35誘導(dǎo)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜銘細(xì)胞瘤（PC12）細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用以及對凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3影響，初步探討了EAPL預(yù)防和治療老年癡呆（AD）的機(jī)理。結(jié)果表明，EAPL可以減輕A025-35誘導(dǎo)的PC12a胞凋亡，降低Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá)水平，提高Bcl-2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明：EAPL具有保護(hù)PC12ffi胞拮抗AB25-35的損傷作用；具抗AD的機(jī)理可能是由于其清除自由基而產(chǎn)生作用的。同時(shí)，我們還建立了AB1-42誘導(dǎo)大鼠老年