實(shí)驗(yàn)室消毒與滅菌效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1.4

1、ADICON Clinical Laboratories,Inc. 艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心 Standard Operating Procedure標(biāo)準(zhǔn)操作程序AD No.編號(hào):SOP-LAB025-GVersion/Revision版次:1.4Page頁碼 6 of 6Written by編制人： guojun zhang張國君Date日期:20100121Effective Date生效日期:Distribution Scope發(fā)放范圍： LAB實(shí)驗(yàn)室Reviewed by審核者：Approved by批準(zhǔn)人：Document Annually Reviewing文件年度審核 Reviewed

2、 by審核者：Reviewed by審核者：Reviewed by審核者：Date日期：Date日期：Date日期：Reviewed by審核者：Reviewed by審核者：Reviewed by審核者：Date日期：Date日期：Date日期：實(shí)驗(yàn)室消毒與滅菌效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1目的消毒和滅菌對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的.感染性物質(zhì)的消毒和滅菌效果評(píng)價(jià),是對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物危害的有效監(jiān)控。2適用范圍中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB15981-1995。3職責(zé)適用于壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果、紫外線表面消毒效果評(píng)價(jià)以及消毒劑濃度測(cè)定。4 工作程序4.1試劑和儀器4.1.1

3、試劑：嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片，壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡，紫外線強(qiáng)度指示卡，G-1型消毒劑濃度試紙，以上材料均購自北京四環(huán)衛(wèi)生藥械廠。4.1.2儀器：Sartorius Baa3s型電子天平（上海），TD型電子天平，GNX-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海），GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)，LDZH-100KBS 立式壓力蒸汽滅菌器（上海），手提式壓力蒸汽滅菌器。4.2標(biāo)準(zhǔn)操作程序4.2.1壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)4.2.1.1生物學(xué)檢測(cè)方法（商品化嗜熱芽胞桿菌生物指示劑）1）將嗜熱芽胞桿菌生物指示劑放入待滅菌物品中，置于壓力蒸汽滅菌器經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，20min/121，30m

4、in）后，從壓力蒸汽滅菌器中取出嗜熱芽胞桿菌生物指示劑，擊碎生物指示劑中玻璃管讓溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基浸潤沾有嗜熱芽胞桿菌的紙片，置培養(yǎng)箱中56培養(yǎng)7天，觀察培養(yǎng)基顏色變化，并記錄結(jié)果。2）結(jié)果判定：溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基不變色，判定為滅菌合格；溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，判定為滅菌不合格。4.2.1.2 生物學(xué)檢測(cè)方法（非商品化嗜熱脂肪芽胞桿菌生物指示劑）1）2%溴甲酚紫酒精溶液的配制：取溴甲酚紫2.0g，溶于100ml95%乙醇中。2）溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基的配制：蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，溶于500ml蒸餾水中，調(diào)PH值至7.07.2，然后再加入2%溴甲酚紫酒精溶液0.3m

5、l，搖勻后，按5ml/管分裝入中號(hào)試管、包口，并置壓力蒸汽滅菌器中，于121（0.105Mpa/cm2）滅菌30min備用。3） 將中號(hào)試管、橡皮塞、牛皮紙置壓力蒸汽滅菌器中，于121滅菌30min備用。4）將嗜熱脂肪桿菌芽胞指示菌片分別放于兩只經(jīng)過滅菌的中號(hào)試管中，用滅菌橡皮塞塞住試管口，然后用滅菌牛皮紙包封后置于金屬試管架中間部位，一同放入壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行滅菌。在壓力滅菌的過程中，將超凈工作臺(tái)紫外線燈開啟，照射30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，打開超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)和照明燈，備用。5） 經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，30min）后，從壓力蒸汽滅菌器中取出試管架，在工作臺(tái)內(nèi)將試管中經(jīng)過滅菌的菌片取出，投

6、入經(jīng)滅菌的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，并用滅菌橡皮塞塞住試管口，置培養(yǎng)箱中56培養(yǎng)48小時(shí)，觀察培養(yǎng)基顏色變化，并記錄結(jié)果。6）結(jié)果判定：同次檢測(cè)中，每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基全部不變色，判定為滅菌合格，若有其中之一指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，判定為滅菌不合格。4.2.1.3 壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)生物學(xué)檢測(cè)每個(gè)月檢測(cè)一次。4.2.1.4化學(xué)檢測(cè)方法 1）將3份化學(xué)指示卡片放入待滅菌物品包內(nèi)上、中、下三個(gè)部位，置于壓力蒸汽滅菌器中。2）經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，20min/121，30min）后取出指示卡片，觀察卡片上指示色塊顏色變化，并與標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行對(duì)比，

7、并記錄結(jié)果3）結(jié)果判定：滅菌后，指示色塊顏色的深度達(dá)到或超過指示卡上標(biāo)準(zhǔn)色塊的顏色，表示滅菌合格，若淺于標(biāo)準(zhǔn)色塊，表示滅菌不合格。4）注意事項(xiàng)：壓力滅菌時(shí)，待溫度（壓力）升至121（0.105Mpa/cm2）開始計(jì)時(shí)；指示卡片受潮可影響變色準(zhǔn)確性，故滅菌時(shí)盡量避免與金屬、玻璃等易有凝集水表面或其他潮濕物品接觸；指示卡應(yīng)保存在室內(nèi)干燥、陰涼處。4.2.1.5壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)化學(xué)檢測(cè)每次滅菌檢測(cè)一次。4.2.2 紫外線表面消毒效果評(píng)價(jià)（紫外線強(qiáng)度測(cè)定）4.2.2.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)紫外燈管應(yīng)逐個(gè)編號(hào)，用以區(qū)別。4.2.2.2 將紫外線強(qiáng)度卡懸掛置于距紫外線燈管下垂直1米位置的中央處，有圖案一面朝向燈管

8、，打開紫外線燈管開關(guān)，照射1分鐘。4.2.2.3關(guān)閉紫外線燈管開關(guān)，紫外線強(qiáng)度卡中央光敏色塊經(jīng)過紫外線照射后由乳白色變?yōu)椴煌潭鹊牡仙瑢⑵渑c標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行對(duì)比，并記錄結(jié)果。4.2.2.4結(jié)果判定：指示色塊顏色的深度達(dá)到或超過右側(cè)標(biāo)準(zhǔn)色塊（指示70W/cm2）的顏色，表示紫外線強(qiáng)度70W/cm2，指示色塊顏色的深度達(dá)到或超過左側(cè)標(biāo)準(zhǔn)色塊（指示90W/cm2）的顏色，表示紫外線強(qiáng)度90W/cm2。30W新燈管90W/cm2為合格，使用中的舊燈管應(yīng)70W/cm2為合格。4.2.2.5注意事項(xiàng)：光敏色塊變色后存放時(shí)間久了會(huì)退色，故需要文字記錄；紫外線強(qiáng)度卡應(yīng)保存在室內(nèi)干燥、陰涼處。4.2.2.6 每

9、月測(cè)定一次，紫外燈管的使用期限是1000個(gè)小時(shí)，當(dāng)紫外燈管使用時(shí)間累計(jì)1000小時(shí)時(shí)要做一次紫外強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)4.2.2.3判定結(jié)果，合格則繼續(xù)使用，以后每月測(cè)定一次，不合格則重新更換。4.2.3消毒劑濃度測(cè)定4.2.3.1 施康消毒液濃度測(cè)定1）將消毒劑施康原液分別按1：50和1：100進(jìn)行稀釋，攪拌均勻2）取一條G-1型消毒劑濃度試紙浸于稀釋好的消毒液內(nèi)，即刻取出。3）半分鐘內(nèi)在自然光下與標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行比較，讀出該溶液所含有效成分的濃度值。4）當(dāng)消毒劑溶液有效成分高于1500mg/L，為取得準(zhǔn)確的結(jié)果，將其稀釋至100mg/L1000mg/L濃度后再進(jìn)行檢測(cè)。計(jì)算濃度時(shí)，將比色所得值乘以稀釋

10、倍數(shù)即可。5）結(jié)果判定：1：50稀釋的消毒液濃度應(yīng)1000 mg/L；1：100稀釋的消毒液濃度應(yīng)500 mg/L。4.2.3.2 次氯酸鈉消毒液的濃度測(cè)定1）將消毒劑濃度試紙浸入已配制好的有效氯含量為500mg/L消毒液中,沾濕后取出,30秒之內(nèi)在自然光下與消毒劑濃度試紙中的標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行比對(duì)，顏色不淺于相對(duì)應(yīng)比色卡的濃度時(shí)，判斷為合格，并做記錄。2）將有效氯含量為2000mg/L的次氯酸鈉消毒液1：3稀釋成有效氯含量500mg/L后按1）步驟操作。 4.2.3.3過氧乙酸消毒液濃度測(cè)定：將15000mg/L過氧乙酸消毒液做1：29稀釋成500mg/L后按4.2.3.2 中1)步驟操作。4.2

11、.3.4注意事項(xiàng)：測(cè)試結(jié)果應(yīng)在試紙浸泡消毒液后半分鐘內(nèi)觀察并記錄結(jié)果，超過1分鐘，顏色逐漸消退；試紙應(yīng)防潮，以免霉變；用后剩余試紙應(yīng)及時(shí)放回原塑料袋內(nèi)包好，以免受到環(huán)境中其他藥物的影響。4.2.4空氣消毒效果的監(jiān)測(cè)4.2.4.1采樣時(shí)間：在消毒處理后、操作進(jìn)行采樣。每月監(jiān)測(cè)一次。4.2.4.2采樣方法：平板暴露法4.2.4.3布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積30m2,設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角3點(diǎn),內(nèi)、外點(diǎn)部位距墻壁1M處,室內(nèi)面積>30m2設(shè)4角及中央5點(diǎn),4角的布點(diǎn)部位距墻壁1m處。（本室無菌間設(shè)設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角3點(diǎn)）4.2.4.4采樣方法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑為9cm）放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距

12、離地面1.5m采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好后立即送檢。4.2.4.5結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（CFU/m3）=50000N/(A×T)A為平板面積（cm2） T為平板暴露時(shí)間（min）N為平均菌落數(shù)（CFU）。4.2.4.6結(jié)果判定：II類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200CFU/m34.2.4.7注意事項(xiàng)：采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動(dòng)的情況下，靜止10min采樣。5 相關(guān)文件5.1 SOP-TE005-GTD型電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.2 SOP-MI004-G隔水式恒溫培養(yǎng)箱標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.3 SOP-MI005-G手提式壓力蒸汽滅菌器標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.4 SOP-MI00

13、7-G超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.5 SOP-LAB010-G實(shí)驗(yàn)室消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.6 SOP-LAB017-G消毒液配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序5.7 EF2005-G消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB15981-1995。6相關(guān)記錄6.1 SOP-LAB025-01-G壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)記錄6.2 SOP-LAB025-02-G紫外線強(qiáng)度測(cè)定記錄6.3 SOP-LAB025-04-G空氣消毒效果監(jiān)測(cè)記錄Document History Summary文件更改記錄Version/Revision修改后版次DCR Ref更改單編號(hào)Summary of Changes更改概述Effective Da

14、te生效日期1.0080066由SOP0055/2.2更改成新編號(hào)，作為新文件生成。08.4.81.10801221.第三頁上加4.2.4空氣消毒效果監(jiān)測(cè)的操作程序。2. 增加6.4空氣消毒效果監(jiān)測(cè)記錄08.06.301.00801361.原文件編號(hào):SOP-LMI006/1.12.未更改文件內(nèi)容，改為全國通用文件。08.07.291.10802611.修改 4.2.1.1生物學(xué)檢測(cè)方法為4.2.1.1.1將嗜熱芽胞桿菌生物指示劑放入待滅菌物品中，置于壓力蒸汽滅菌器經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，20min/121，30min）后，從壓力蒸汽滅菌器中取出嗜熱芽胞桿菌生物指示劑，擊碎生物指示劑中玻璃管

15、讓溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基浸潤沾有嗜熱芽胞桿菌的紙片，置培養(yǎng)箱中56培養(yǎng)7天，觀察培養(yǎng)基顏色變化，并記錄結(jié)果。4.2.1.1.2結(jié)果判定：溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基不變色，判定為滅菌合格；溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，判定為滅菌不合格。2.修改4.2.1.2化學(xué)檢測(cè)方法 為4.2.1.2.1將3份化學(xué)指示卡片放入待滅菌物品包內(nèi)上、中、下三個(gè)部位，置于壓力蒸汽滅菌器中。4.2.1.2.2經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，20min/121，30min）后取出指示卡片，觀察卡片上指示色塊顏色變化，并與標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行對(duì)比，并記錄結(jié)果08.11.111.22009005421、增加4.1.2儀器：Sarto

16、rius Baa3s型電子天平（上海），TD型電子天平，GNX-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海），GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)，LDZH-100KBS 立式壓力蒸汽滅菌器（上海），手提式壓力蒸汽滅菌器。2、增加4.2.1.2生物學(xué)檢測(cè)方法（非商品化嗜熱脂肪芽胞桿菌生物指示劑）1） 2%溴甲酚紫酒精溶液的配制：取溴甲酚紫2.0g，溶于100ml95%乙醇中。2）溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基的配制：蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，溶于500ml蒸餾水中，調(diào)PH值至7.07.2，然后再加入2%溴甲酚紫酒精溶液0.3ml，搖勻后，按5ml/管分裝入中號(hào)試管、包口，并置壓力蒸汽滅菌器中，于12

17、1（0.105Mpa/cm2）滅菌30min備用。3）將中號(hào)試管、橡皮塞、牛皮紙置壓力蒸汽滅菌器中，于121滅菌30min備用。4）將嗜熱脂肪桿菌芽胞指示菌片分別放于兩只經(jīng)過滅菌的中號(hào)試管中，用滅菌橡皮塞塞住試管口，然后用滅菌牛皮紙包封后置于金屬試管架中間部位，一同放入壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行滅菌。在壓力滅菌的過程中，將超凈工作臺(tái)紫外線燈開啟，照射30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，打開超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)和照明燈，備用。5）經(jīng)過一個(gè)滅菌周期（121，30min）后，從壓力蒸汽滅菌器中取出試管架，在工作臺(tái)內(nèi)將試管中經(jīng)過滅菌的菌片取出，投入經(jīng)滅菌的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，并用滅菌橡皮塞塞住試管口，置培養(yǎng)箱中56培

18、養(yǎng)48小時(shí)，觀察培養(yǎng)基顏色變化，并記錄結(jié)果。6）結(jié)果判定：同次檢測(cè)中，每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基全部不變色，判定為滅菌合格，若有其中之一指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，判定為滅菌不合格。3、4.2.1.3 壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)生物學(xué)檢測(cè)每個(gè)月檢測(cè)一次。增加4.2.1.5壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)化學(xué)檢測(cè)每次滅菌檢測(cè)一次。4.2.2.5 每月測(cè)定一次，紫外燈管的使用期限是1000個(gè)小時(shí)，當(dāng)紫外燈管使用時(shí)間累計(jì)1000小時(shí)時(shí)要做一次紫外強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)4.2.2.3判定結(jié)果，合格則繼續(xù)使用，以后每月測(cè)定一次，不合格則重新更換。4.2.3.2 次氯酸鈉消毒液的濃度測(cè)定1）將消毒劑濃度試紙浸入已配制好的有效氯含量為500mg/L消毒液中,沾濕后取出,30秒之內(nèi)在自然光下與消毒劑濃度試紙中的標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行比對(duì)，顏色不淺于相對(duì)應(yīng)比色卡的濃度時(shí)，判斷為合格，