大鼠心肌肥厚時(shí)血管活性物質(zhì)的變化與拳參正丁醇提取物的關(guān)系

1、大鼠心肌肥厚時(shí)血管活性物質(zhì)的變化與拳參正丁醇提取物的關(guān)系                             作者：李良東， 周琴， 黃志華， 曾靖*， 張鄉(xiāng)城， 汪有彪  【摘要】  目的觀察拳參正丁醇提取物對(duì)異丙腎上腺素（Iso）所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用及其對(duì)ANG、ANP及ET

2、含量的影響。方法采用Iso 1 mg·kg-1·d-1，背部皮下注射，連續(xù)10 d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天開(kāi)始給予不同濃度的拳參正丁醇提取物或NS，連續(xù)14 d，末次給藥后禁食12 h，稱重，麻醉后斷頭取血，取心臟稱重后左心重量參數(shù)；放免法測(cè)定血漿ANG及心肌組織ANP和ET的含量。結(jié)果模型組左心室重量參數(shù)明顯提高，血漿ANG及心肌組織ET含量升高、心肌組織ANP含量降低；與模型組相比，拳參正丁醇提取物組左心室重量指數(shù)下降，血漿ANG及心肌組織ET含量下降、心肌組織ANP含量升高。結(jié)論拳參正丁醇提取物對(duì)Iso所致大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與升高擴(kuò)血管物質(zhì)

3、ANP及降低收縮血管的活性物質(zhì)ET和ANG的水平有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  拳參正丁醇提取物； 異丙腎上腺素； 心肌肥厚； 血管活性物質(zhì)拳參具有清熱、鎮(zhèn)驚、理濕等療效。拳參通過(guò)95%的乙醇提取后，再依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，其正丁醇萃取部分即得拳參正丁醇提取物（Polygonum Bistorla L. n-Butyl Alcohol Extract，PBNA），主要成分為丁香苷、蘆丁、兒茶素及Mururin A1。有實(shí)驗(yàn)表明，PBNA具有抗心律失常2、鎮(zhèn)痛3、中樞抑制4、心肌缺血保護(hù)5等作用。心肌肥厚是以心肌細(xì)胞體積增大和蛋白含量增多為主要特征的代償反應(yīng)，是對(duì)各種心血管刺激因子

4、的適應(yīng)反應(yīng)，但持續(xù)的心肌肥厚導(dǎo)致心衰而威脅生命。心肌肥厚的發(fā)生是許多因素共同參與的結(jié)果，其中血管活性物質(zhì)就起著非常重要的作用。本實(shí)驗(yàn)利用Iso背部皮下注射構(gòu)建大鼠心肌肥厚模型，研究拳參正丁醇提取物對(duì)Iso所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用及其與血管活性物質(zhì)ANG、ANP及ET含量變化的關(guān)系。1  材料與儀器1.1  動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體質(zhì)量200250 g，購(gòu)自江西中醫(yī)學(xué)院，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（贛）2006-0001。1.2  藥品和試劑拳參正丁醇提取物（由沈陽(yáng)藥科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院植化教研室提供）；鹽酸異丙腎上腺素（Iso）注射針劑（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：

5、H31021344）。ANG、ET及ANP放免試劑盒購(gòu)自北京福瑞生物工程公司。1.3  儀器SN-695型智能放免測(cè)量?jī)x（上海核福光電儀器有限公司），ZS83-1型內(nèi)切式組織勻漿器（浙西機(jī)械廠），賽多利斯BS224S型天平(北京賽多利斯儀器有限公司)。2  方法2.1  動(dòng)物分組雄性SD大鼠32只，隨機(jī)分成4組，每組8只，分別為：對(duì)照組,心肌肥厚模型組,0.5 mg/kg PBNA組,1 mg/kg PBNA組。2.2  造模與給藥方法 大鼠背部皮下注射Iso 1 mg·kg-1·d-1，連續(xù)10 d，制作心肌肥厚模型，對(duì)照組給予等體

6、積生理鹽水。PBNA組于造模后第2天開(kāi)始分別灌胃給以1 mg/kg，0.5 mg/kg的PBNA，連續(xù)14 d，對(duì)照組和心肌肥厚模型組大鼠給予相同體積的NS灌胃。2.3  左心室重量參數(shù)的測(cè)定 末次給藥后禁食12 h，稱體質(zhì)量，水合氯醛(0.35 g/kg)麻醉，取出心臟，去除結(jié)締組織、心房和右心室，用生理鹽水洗凈，吸干后稱左心室重量，計(jì)算,左心室重量參數(shù)=左心室重(mg)體質(zhì)量(g)。2.4  血漿ANG、心肌組織ET和ANP含量測(cè)定大鼠麻醉后，腹腔靜脈取血5 ml，迅速注入放在冰水浴的酶抑制劑抗凝管中，混勻，4，2 000 r·min-1，離心5 min，分離

7、血漿，于-80保存。取5 00 mg左心室心肌組織冰浴下制成10%勻漿，4，3 500 r·min-1，離心10 min，取上清于-80保存。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明，用放免法測(cè)定血漿ANG、心肌組織ET和ANP含量。2.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graphpad prism4.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果以柱狀圖表示，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3  結(jié)果    如表1所示，Iso模型組與對(duì)照組相比，左心室重量參數(shù)明顯增加(P<0.001)，血漿ANG(P<0.01)及心肌組織ET(P<0.001)含量升高、心

8、肌組織ANP含量降低(P<0.01)。與模型組相比，PBNA治療組左心室重量指數(shù)下降，其中高劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；血漿ANG含量下降，低劑量組(P<0.001)及高劑量組（P<0.01）均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；心肌組織ANP含量升高，低劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；心肌組織ET含量下降，低劑量組(P<0.001)及高劑量組（P<0.01）均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1  PBNA對(duì)左心室重量參數(shù)及血漿ANG、心肌組織ANP和ET含量的影響（略）1         

9、;4  討論    心肌肥厚是心臟維持適當(dāng)收縮功能對(duì)各種病理狀態(tài)的代償反應(yīng)。Iso作為受體激動(dòng)劑，可使心肌收縮力增強(qiáng)，心率加快，膠原纖維增生，產(chǎn)生心肌肥厚6。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠左心室重量參數(shù)明顯增大，說(shuō)明動(dòng)物模型復(fù)制成功。給予PBNA后，左心室重量參數(shù)降低，提示PBNA具有抗心肌肥厚作用。    心肌肥厚的發(fā)生是許多因素共同參與的結(jié)果，其中血管活性物質(zhì)就起著非常重要的作用。高血壓病患者的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(rennin angiotensin system，RAS)被高度激活，兒茶酚胺大量釋放，造模大鼠心率增快，血

10、壓升高，引起心肌損傷、心肌缺血、心肌壞死、心肌纖維化，心力衰竭、左室重構(gòu)和體內(nèi)水鈉潴留等心肌結(jié)構(gòu)及心臟功能一系列改變，而ANG在其中起著重要作用，大鼠心肌局部異常增高的ANG 可誘發(fā)心肌細(xì)胞增殖反應(yīng)，心肌結(jié)構(gòu)發(fā)生病理性的肥厚改變，進(jìn)而誘發(fā)慢性充血性心力衰竭7。    ET是一種由21個(gè)氨基酸殘基組成的活性多肽，具有強(qiáng)大和持久的縮血管作用，也是一種重要的內(nèi)源性心血管調(diào)節(jié)肽。在缺氧、心力衰竭、心肌肥厚、冠心病等多種病理情況下，血漿ET-1含量增高，也是心臟受損的指標(biāo)之一8，9。ET-1可促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大和心臟成纖維細(xì)胞增殖，加速心肌肥厚的進(jìn)程10。 

11、0;  心鈉素在正常成人心室肌的表達(dá)是微量的。ANP最早被認(rèn)為是一種利尿、擴(kuò)血管的激素， 隨后的研究顯示ANP還具有抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、內(nèi)皮素的分泌及交感神經(jīng)活動(dòng)等作用。在人衰竭或肥厚的心臟，ANP的表達(dá)顯著增加，提示ANP可能作為自分泌和（或）旁分泌抑制性調(diào)節(jié)因子在一些病理狀況下（如心臟衰竭或心臟肥厚），抑制過(guò)度心臟細(xì)胞生長(zhǎng)。有研究報(bào)道，靜脈注射心鈉素可抑制左心室重構(gòu)11；敲除ANP基因的大鼠，對(duì)容量超負(fù)荷所致的心肌肥厚的反應(yīng)加劇12；ANP對(duì)ET-1促心肌細(xì)胞肥大有明顯的抑制作用10。這些研究結(jié)果表明ANP與心肌肥厚的進(jìn)展緊密相關(guān)。ET-1可能是促使心臟肥厚加重的始

12、動(dòng)因素，而ANP則是重要的代償因素，它能通過(guò)對(duì)ET-1的拮抗而緩解心臟肥厚的進(jìn)展13，14。    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PBNA可提高心肌組織ANP含量且同時(shí)降低ET及Ang含量，從而抑制心肌肥大及心力衰竭的進(jìn)程，對(duì)心臟起保護(hù)作用。【】  1劉曉秋，李維維，生可心，等拳參正丁醇提取物的化學(xué)成分J沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006,23(1)：16.2Zeng jing，Huang xianhua，Lai fei，et al.Antiarrhythmic Effects of Polygonum Bistorta L.Agueous extractJ. Drug De

13、velopment Research 2002, 55(4):264.3曾靖，李良東拳參水提取物鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)觀察J臨床康復(fù),2005,9（6）:804曾靖，黃志華拳參正丁醇提取物中樞抑制作用的研究J贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003，23（4）:3595葉和楊，黃志華，汪秀榮，等拳參正丁醇提取物保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的劑量依賴性效應(yīng)J中國(guó)臨床康復(fù)，2005，39（9)：1186Bos R, Mougenot N, Findji L, Mediani O, et al. Inhibition of catecholamine-induced cardiac fibrosis by an aldost

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16、文，陳 曦，油紅捷，等心鈉素及內(nèi)皮素對(duì)心肌細(xì)胞肥大及心臟成纖維細(xì)胞增殖的影響J高血壓雜志，2006, 14（5）：375.11Kasama S, Toyama T, Hatori T, et al. Effects of intravenous atrial natriuretic peptide on cardiac sympathetic nerve activity and left ventricular remodeling in patients with first anterior acute myocardial infarction J. Am Coll Cardiol, 2007, 13; 49(6): 667.12Mori T, Chen YF, Feng JA, et al. Volume overload results in exaggerated cardiac hypertrophy in the atrial natriuretic peptide knockout mouseJCardiovasc Res, 2004, 61:771.13Han B, Hasin Y. Cardiovascular effects of nat