液相基本術語及操作

1、液相色譜檢測1 儀器的基本常識及術語1.1儀器結構： 液相色譜儀主要包括泵、進樣器、色譜柱、檢測器；1.2儀器分類： 液相色譜儀屬于精密儀器中的色譜儀器；按照分為離機制，吸附、分配、離子交換、親和色譜，體積排阻色譜；按照流動相與固定相的極性，分為正相色譜法和反相色譜法；高效液相色譜法的應用范圍：高效液相色譜法適用于高沸點不易揮發(fā)、受熱不穩(wěn)定易分解、分子量大的，不同極性的有機化合物，生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3儀器檢定： 液相色譜儀檢定周期為1年，在兩次檢定間期內(nèi)進行一次期間核查，也可以根據(jù)情況增加核查次數(shù)；1.4維護保養(yǎng)： 對于液相維護方式主要是周維護和日維

2、護，其中周維護包括聯(lián)機系統(tǒng)及中工作站軟件維護、數(shù)據(jù)庫整理備份、 檢測器自檢、維護單向閥、溶劑砂芯濾頭、進樣器、電機泵檢查維護、溶劑瓶清洗等；日維護包括環(huán)境溫度、環(huán)境濕度、色譜柱溫度、壓力流速、進樣口是否潔凈、進液處的砂芯過濾頭是否潔凈、流動相交換時是否有沉淀；1.5 色譜法的常用基本術語基線：在色譜操作條件下,沒有被測組分通過鑒定器時,記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線.死時間 ,保留時間及校正保留時間:從進樣到惰性氣體峰出現(xiàn)極大值的時間稱為死時間,以 td 表示 .從進樣到出現(xiàn)色譜峰最高值所需的時間稱保留時間 ,以 tr 表示 .保留時間與死時間之差稱校正保留時間.以 Vd 表示

3、 .死體積 ,保留體積與校正保留體積 :死時間與載氣平均流速的乘積稱為死體積 ,以 Vd 表示 ,載氣平均流速以 Fc表示 ,Vd=tdxFc. 保留時間與載氣平均流速的乘積稱保留體積 ,以 Vr 表示 ,Vr=trxFc峰面積： 流出曲線 (色譜峰 )與基線構成之面積稱峰面積,用 A 表示 .拖尾因子： 是反映峰對稱性的指標，計算公式：拖尾因子TW0.05h/2d1（其中 W0.05h 為5% 峰高處的峰寬，d1 為峰頂點至峰前沿之間的距離） 。峰高與半峰寬: 由色譜峰的濃度極大點向時間座標引垂線與基線相交點間的高度稱為峰高,一般以h 表示 .色譜峰高一半處的寬為半峰寬,一般以x1/2表示；

4、1.7色譜檢測的特性（ 1）靈敏度高；（ 2）線性范圍寬；（ 3）分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間的關系：（ 4）分離度與柱效的平方根成正比，選擇因子一定時，增加柱效；（ 5）分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學性質(zhì)有關的常數(shù)，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化：一般通過改變固定相和流動相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可增大選擇因子；（ 6）增大選擇因子的最有效方法是選擇合適的固定液。對于液相色譜，改變流動相的組成，可以有效控制k ；2 儀器的操作規(guī)程2.1日立液相設備L-2000/2400操作規(guī) 程使用環(huán)境環(huán)境溫度： 4 55 ；相對濕度：小于95%RH 。使用前準備檢查所用溶液 (如

5、流動相，乙腈等)是否足夠。檢查線路是否連接正常。設備操作方法具體操作如下：(1) 依次開啟泵開關，檢測器開關，自動進樣器開關，柱溫箱開關；(2) 打開軟件，點擊“ i”按鈕，出現(xiàn)聯(lián)機界面，點擊“Iinitialize ” i'ni ?.laiz 按鈕，當文本框出現(xiàn)文字時，表示聯(lián)機成功；(3) 檢查所用方法是否符合要求。如不符合，進行設置；(4) 開泵。檢測具體操作如下：(1) 建立所需樣品盒；(2) 點擊檢測按鈕，選擇剛建立的樣品盒；(3) 首先進行走基線；(4) 當基線走平時，點擊系列樣品檢測按鈕，進行標樣，樣品檢測；(5) 當標樣檢測結果出來時，打開結果窗口，選擇所需標樣結果，點擊

6、“Recalculate'ri:'k? lkjuleit進行重新計算，然后點擊“Calibration” k ? li'brei ?n 進行定標；(6) 當樣品結果出來時，打開結果窗口，選擇所需樣品結果，點擊“ Recalculate ” 'ri:'k ? lkjuleit 進行重新計算，然后點擊“ ModifyReport” 'm ?difai, ri'p ?:t,出現(xiàn)結果報告，即可查看樣品具體結果。更換流動相具體操作如下：(1) 當流動相快不夠時或異常時，及時更換流動相；(2) 先把泵關閉，將流動相入口放入新流動相中；(3) 將泵閥逆

7、時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約 3 分鐘后，關閉排氣功能；(4) 排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(5) 走基線，當基線走平時，開始做標樣，做樣。關機具體操作如下：(1) 先把泵關閉，將流動相入口更換為超純水；(2) 將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約 3 分鐘后，關閉排氣功能；(3) 排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(4) 用超純水沖洗管路大約 20 分鐘；(5) 把泵關閉，將超純水更換為100% 甲醇或 100% 乙腈；(6) 將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約 3 分鐘后，關閉排氣功能；(7) 排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(8) 用 100% 甲醇或 100% 乙腈沖洗

8、管路大約 30 分鐘；(9) 關泵，關液相軟件，關泵開關，檢測器開關，自動進樣器開關，柱溫箱開關。維護保養(yǎng)、注意事項(1) 進行旬維護檢查工作，主要檢查事項：軟件是否正常、溫度、清洗、進樣器、泵單元；(2) 每次測量前進行標樣檢測，斜率達到99.99% 要求才能檢測樣品，測完樣品及時清理。(3) 按要求進行每天 2個小時以上的清洗。2.2 Waters高效液相色譜 -2695/2489開機自檢具體操作如下：(1) 打開 Alliance?'lai ?ns2695 和 2489的電源開關至ON(1)的位置，儀器開始進行自檢；(2) 儀器將進行大約 5分鐘的自檢過程，待儀器自我測試完畢后，

9、出現(xiàn)以下畫面，畫面上方的狀態(tài)顯示區(qū)會出現(xiàn)“Idle ” 'aidl 狀態(tài)，表示開機測試正常。流動相有機溶劑要求用色譜純( 進口名牌最好)，水或緩沖鹽溶液要用超純水 ( 電阻率： 18.2M ) ，每 48 小時制備新鮮的水相流動相,尤其是100%含水流動相使用時間不超過兩天。6根管子都在液面以下。溶 劑 的 位 置 必 須 高 于 溶 劑 混 合 閥 (GradientProportioningValve) 。 'greidi ?ntpr ?'p ?:?ni?v? lv清洗柱塞密封墊 (Seal Wash)si:l w ? 的溶液： 含 5% 10% 甲醇的超純水。洗針

10、液 (Needle Wash) 'ni:d?l w ?：50% 甲醇： 50% 水 (該比例僅適用于反相試驗 ) 。注 : 以上溶劑或溶液均需用 0.45 m 的膜過濾并超聲脫氣 1分鐘，用潔凈的玻璃容器盛放 ,避免污染， 同時玻璃容器應用超純水來清洗而不能用自來水。灌注柱塞密封清洗清洗操作步驟：(1) 回到 Menu 'menju:畫面，選擇 Diag ；(2) 確定 Seal Wash si:l w ? 的管路放在正確的位置；(3) 按 Prime Seal Washpraim si:l w? ，再按 Start ，直到清洗溶劑流出泵桿密封圈沖洗廢液管，按Halt ；h ?

11、:lt(4) 按 Close。注意：密封圈清洗(Seal wash)si:l w ?溶劑，在反相液相色譜中可使用Water/MeOH methylalcohol甲醇=90/10或Water/Acetonitrile? sit ?u'naitril乙腈 =95/5(根據(jù)實際需要使用不同溶劑 )。灌注針頭清洗操作步驟：回到 Main mein 的畫面，選擇 Diag ，選擇 Prime praim Ndl Wash 。設定值為 30 秒，若想要多清洗幾次時， 請按 Start Again 。清洗溶劑： 50% 的甲醇溶液注意：若上述清洗溶劑無法避免進樣時的交叉污染，使用較強的溶劑系統(tǒng)來進行

12、清洗操作。打開真空脫氣機如液相儀管路干，可進行使用，如管路不干則按照以下步驟進行操作：按“ Menu/Status ” 'steit ?s 鍵，進入 Status (1) 畫面；利用方向鍵將光標移至“ Degasser ” di:g? s?位置，按 Enter ；利用上下鍵選擇模式為 ON 。注意：在開啟除氣裝置時，要確認所有溶劑管路都充滿溶劑；若沒有溶劑時請執(zhí)行溶劑的Dry Primedrai praim操作。執(zhí)行干灌注確 定 流 動 相 溶 劑 的 管 子 放 在 正 確 的 位 置 ， 檢 測器 (Detector di'tekt ?)廢液管及定量環(huán) (Sample Lo

13、op lu:p )的廢液管是否放置于適當?shù)膹U液容器中。搖動溶劑瓶內(nèi)的過濾器(Solvent Filter) 's ?lv?nt 'filt? ，防止氣泡附著在過濾器的外表面。將空的針筒插入抽液閥(Prime/Ventvalue) 中，以逆時針的方向旋轉(zhuǎn) 3圈。按“Menu/Status ” 'steit ?s 鍵，進入 Status(1) 畫面，按“ Direct Function ” di'rekt 'f ?k?n 功能鍵，選擇 Dry Prime ，按 Enter 。按下面使用的溶劑開啟閥門( 例如 :Open A)，然后將針筒向外拉，抽 出 5 1

14、0mL 溶劑并完全抽出溶劑管子內(nèi)的氣泡，完成后關閉Prime/Vent閥門。在“ Enter a duration” dju'rei ?n 中輸入 3分鐘，按“ Continue”鍵，泵即以3.0mL/min的流速進行清洗(Purge)?？芍貜蜕蟽蓚€步驟，將所要使用的流動相溶劑Dry Prime。執(zhí)行濕灌注按“ Menu/Status”鍵，進入Status(1)畫面，利用方向鍵將光標移至“Composition” k ?mp ?'zi ?n 字段，將欲WetPrime的溶劑輸入100%。按“Direct Function” di'rekt 'f ?k?n 功能鍵

15、， 選擇 Wet Prime，按Enter。WetPrime的原設定值，一般為FlowRate:7.5mL/min， Time:3.0min，然后按下“OK ”鍵，泵即開始進行Wet Prime操作。重復上述的步驟直到所有溶劑Wet Prime進行完畢。設定流動相平衡色譜柱按“ Menu/Status” 鍵，進入 Status (1) 畫面，利用方向鍵將光標移至“ Composition” k ?mp ?'zi ?n 字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設置試驗要求的溶劑組成比例，此時會在原溶劑比例表的下方出現(xiàn)新編輯溶劑比例表(New Composition)。設定好新的溶劑組成比例后，按“

16、 Change Comp” t ?eind ? k ?mp功能鍵 (改變?nèi)軇┙M成比例change composition)，此設定的溶劑組成比例即為當前的比例。利用方向鍵將光標移至“ Flow ” fl ?u 字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設定流速，此時儀器即設定的溶劑組成比例和流速來平衡色譜柱。特別提示:對于常規(guī)的反相色譜試驗至少要用30 倍柱體積來平衡，而對于離子對色譜的平衡可能需要多達沖洗進樣器500 柱體積的流動相來平衡。溶劑管理系統(tǒng)的前處理( Primethesolventmanagementsystem) 要求如下：(1) 改變?nèi)軇?;(2) 發(fā)現(xiàn)注射針頭內(nèi)有氣泡 ;(3) 每天開

17、機的時候。沖洗進樣器執(zhí)行步驟：(1) 按“ Menu/Status ”鍵，進入 Status(1) 畫面，在設定溶劑的畫面中設定適當?shù)牧魉倥c溶劑比例；(2)按 “ Direct Function ” di'rekt 'f ?k? n 鍵 ， 選 擇 PurgeInjectorp ?:d ? in'd ?ekt ?，按 Enter ；(3)輸入 Sample Loop 體積清洗的倍數(shù) (原定值為 6 倍 )，按 Enter ；(4)壓縮測試 (Compression Check)請先不需要測試， 設定完成后按OK 。放入樣品盤打開計算機，運行Empowerim'p

18、au ?軟件，選擇存放數(shù)據(jù)文件的Project ，運行 RunSamples ；按 Develop Methods di'vel ?p 'me ?d按鈕，建立方法；按Monitor 'm ?nit ? 按鈕，觀察基線，待基線平穩(wěn)，可準備進樣。2.2.11 關機首先關閉檢測器電源；在 2695 溶劑槽中換上適當?shù)那逑慈軇?，清洗系統(tǒng)約 60 分鐘 (針對離子對試驗，建議 50% 乙腈： 50% 水 1mL/min 流 速 沖 洗色 譜 柱 2 小 時 以 上 ) ； 按 2695 面 板 Diag 鍵 ， 選擇 Prime SealWash ，清洗泵頭約 1分鐘；再選擇 P

19、rime NdlWash ，清洗進樣針 1 2 次；按 Menu/Status 鍵進入手動控制模式，按 Direct Functiondi'rekt 'f?k? n 鍵，選擇 Purge Injectorp ?:d ? in'd ?ekt ? ，沖洗進樣器 ( 針對離子對試驗，建議設定 50% 乙腈： 50% 水的溶劑來沖洗進樣器 )；降低流速至 0，待系統(tǒng)壓力回零后，關閉 2695 電源，關閉計算機及顯示器電源。2.3 島津 LC-20AT液相色譜儀操作規(guī)程準備工作在開機之前，根據(jù)所做樣品的方法要求，準備好所用流動相，標樣及樣品。流動相抽濾后超聲脫氣15 分鐘，標樣和

20、樣品0.45um膜過濾。打開 LC-20A ×2SETS,CTO-10ASvp，SPD-M20A(或 RF-10AXL)電源，待自檢通過。打開 SCL-10Avp電源，檢查開機屏幕應顯示各單元，如果某單元沒有顯示， 則不能控制該單元，需按 f2 鍵取消屏幕Fixed 標志即可顯示并控制該單元。否則檢查通訊設置。打開計算機電源或重新啟動計算機，待正常進入WINXP操作系統(tǒng)。排空操作：打開 LC-20AT 泵排空閥 (逆時針 180 度以上 )，按 Purge 鍵，泵開始排空運行。檢查流動相入口Teflon管路沒有氣泡后，再按Purge鍵停止排空。壓力調(diào)零：如果 purge 時，壓力不為

21、零，需要進行壓力調(diào)零 ,按 LC-20ATvp 泵 Func 鍵選擇 CONTROL 項，按 FUNC 鍵直至屏幕顯示 *ml ZERO ADJ 項，按 Enter 鍵，再按 CE 鍵，即完成調(diào)零。然后關緊排空閥 (順時針旋緊 )。在計算機中雙擊 LC SOLUTION 圖標，進入工作站。再雙擊 Operation Analysis 1 4 進入實時分析窗口 (根據(jù)不同的檢測器選擇 )。在開機畫面中，UserID 選中 Admin ，不需輸入Password ，點擊 OK( 可聽到峰鳴一聲 )，在下面操作中 A B 表示在 A 菜單下選擇 B，以此類推。選中表示在中打號。在左側(cè)助手欄給出了引導

22、順序操作的圖標，自上而下順序執(zhí)行即可(可以跳過執(zhí)行 )：(1)System configuration 系統(tǒng)配置 (第一次安裝或更換檢測器時配置，通常跳過不操作 )；(2)System Check 編輯儀器檢查參數(shù)：并且 RUN 運行檢查。通常不操作 (跳過 )；(3) 點擊 Data acquisition進入采集數(shù)據(jù)編輯方法界面點擊 Instrument Parameter進入儀器參數(shù)設置界面：選中Normal(通用簡單 )或 Advanced(高級詳細 )項，分別設定 Pumps 泵參數(shù)，Oven 柱箱參數(shù)，Detecter 檢測器參數(shù)， Controller系統(tǒng)控制器參數(shù)，Time P

23、rogram時間程序參數(shù)等。儀器配置不同，控制單元項的數(shù)目多少不同; Pumps 泵參數(shù)：Mode 控制方式， Flow 流速，B，C，DConc各項濃度， P Max最大壓力； Oven 柱箱參數(shù)： Oven 設定溫度， T Max 最大保護溫度； Detecter 檢測器參數(shù)： Cell 設定池溫。 Wavelength 設定波長； Controller 系統(tǒng)控制器參數(shù)； Data acquisition選中 Acquisition Time后，設置分析時間，等等； LC TimeProg 時間程序參數(shù)：編輯泵梯度洗脫程序，也可以控制柱箱，檢測器等等；(4) 點擊 Method Data

24、Analysis Parameter編輯積分參數(shù)：設置 Width 峰寬， Slope 斜率， Min Area 最小峰面積等等。新建方法推薦使缺省值，待分析完樣品后再設置此項參數(shù)，得到優(yōu)化的色譜數(shù)據(jù)結果后，將參數(shù)保存在當前方法中；(5) 保存方法：點擊File Save Method as如圖：起文件名*保存后，該方法即作為當前運行的方法;(6) 下載方法：點擊Down Load鍵，向儀器傳送參數(shù)。運行方法點擊如圖圖標 (InstrumentOn/Off系統(tǒng)開 / 關)系統(tǒng)開始運行，檢查各單元參數(shù)應與方法設定一致。等待系統(tǒng)平衡。一般情況下，由于流動相不同， 交換平衡時間不定?？梢杂^察Dete

25、cter檢測器吸收變化,如果吸收值穩(wěn)定不變，即認為接近平衡，可以調(diào)零等待，確認不變后，準備進樣分析?？梢酝ㄟ^改變衰減或予覽基線觀察基線變化，待基線平穩(wěn) (初始化顯示時與橫軸平行)，準備進樣操作。進樣分析如下：(1) 單針進樣分析：如圖點擊Single Start圖標：出現(xiàn)如下采樣對話框；(2) 編輯樣品參數(shù)：SampleID 樣品信息， MethodName文件名， DataPath數(shù)據(jù)存儲路徑，DataName數(shù)據(jù)文件名，樣品瓶號 (無 )， Tray# 架號 (無 )， Injection進樣量等；方法 Vial(3) 點擊 OK 后，開始進樣操作 (重復單針進樣， 重復執(zhí)行第 7 步驟即

26、可 )；(4) 每個樣到時間分析結束，根據(jù)方法中的積分參數(shù)，所有色譜數(shù)據(jù)會自動進行積分處理。報告予覽和打印點擊Top返回上級引導操作欄。點擊Post Run Analysis進入數(shù)據(jù)后處理界面： 點擊report進入報告界面： 點擊report format進入格式界面：調(diào)入報告格式文件也可以自己編輯報告格式，然后點擊Data 打開數(shù)據(jù)文件， 將左側(cè)數(shù)據(jù)文件拖入右側(cè)報告欄即可。關于報告格式，可以通過內(nèi)容選擇圖標，在報告中確定位置后，添加即可。右鍵功能很強大，用戶可以參考說明書靈活使用。選擇快捷圖標的預覽或打印圖標執(zhí)行報告預覽或打印。關機步驟如下：(1) 更換洗液清洗流路系統(tǒng) (如用緩沖液，先用

27、水清洗 1 小時，再用有機溶劑清洗 30 分鐘以上 )，最后用有機溶劑封存；(2) 清洗結束后，停止系統(tǒng)運行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off鍵即停止所有單元工作；(3) 退出 LC SOLUTION( 可聽到峰鳴一聲 )，再完全退出；(4) 關系統(tǒng)控制器 SCL-10Avp 電源開關；(5) 關主機 SPD-M20A( 或 RF-10AXL) 檢測器， LC-20AT 泵，CTO-10ASvp柱箱電源開關。清洗流路系統(tǒng)要求如果使用緩沖液，先用水更換緩沖液，清洗1 小時，然后更換甲醇清洗 40 分鐘；如果使用有機溶劑(水)，直接更換甲醇清洗40 分鐘即可。

28、2.4 安捷倫高效液相色譜操作規(guī)程開機打開計算機 ,進入 WindowsXP( 或 Windows2000) 畫面 ,并運行Bootp Server程序。打開1100 /1200LC各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標，化學工作站自動與1100LC/1200LC。從“ View ”菜單中選擇“ Method and Run control”畫面 , 單擊”View ”菜單中的 “Show Top Toolbar”，“ Show status toolbar”，“System diagram ” ,” Sampling diagram ”，使其命令前有“

29、”標志，來調(diào)用所需的界面。把流動相放入溶劑瓶中。打開 Purge 閥。單擊 Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，單擊 Setup pump選項，進入泵編輯畫面。設 Flow ： 5ml/min ，單擊 OK 。單擊 Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單， 單擊 Pump control選項，選中 On ，單擊 OK ，則系統(tǒng)開始Purge ，直到管線內(nèi) (由溶劑瓶到泵入口 )無氣泡為止 ,切換通道繼續(xù)Purge ，直到所有要用通道無氣泡為選中單擊 PumpOff ，單擊圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單， 單擊Ok 關泵，關閉Purge valve。Pump Control選項，單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，

30、單擊Setup pump選項，進入 Pump編輯畫面，設Flow ：1.0mL/min。單擊泵下面的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入停泵的體積，單擊Ok 。關機關機前，用 100% 的水沖洗系統(tǒng)20 分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng) 10 分鐘 (如 ACN) ，然后關泵 (適于反相色譜柱，正相色譜柱用適當?shù)娜軇_洗)。退出化學工作站，及其它窗口，關閉計算機( 用shutdown關 )。關掉Agilent 1100/1200電源開關2.5 C8柱修復操作規(guī)程目的為節(jié)約檢測成本，同時統(tǒng)一操作方法，特制定本作業(yè)指導書。 適用范圍本標準適用于愛杰爾、天津蘭博生產(chǎn)的C8 柱修復方法（其它廠家可

31、以嘗試使用） 。C8 柱使用一段時間后，會出現(xiàn)柱壓高、 峰變形問題，大部分的原因為C8 柱污染，通過對污染C8 柱柱頭過濾網(wǎng)進行超聲清洗，然后再生，解決問題。工具、試劑2個扳手， 1把鈍剪刀。乙腈（色譜純）、異丙醇（色譜純）。修復過程（ 1）將故障 C8柱柱頭處擰開用2 個扳手將 C8 柱兩柱頭擰開，取下兩端柱頭。用鈍的剪刀夾住塑料封口，取下塑料封口，過濾網(wǎng)就在封口處。觀察 C8 柱內(nèi)填料是否有污染，如有污染，用干凈的濾紙輕輕擦掉污染物。注意：只能擦去表面一層填料，不能太多，否則會損壞柱子。兩端端口兩端端口圖1：C8柱內(nèi)有過濾網(wǎng)圖2：C8柱內(nèi)部塑料封口，內(nèi)有過濾網(wǎng)（ 2）對兩端柱頭進行超聲清洗

32、（或者對另一支舊C8 柱的后端柱頭進行清洗，并代替此C8 柱前端柱頭）準備小燒杯，倒入10% 乙腈，然后將第一步取出的兩端柱頭（包括過濾網(wǎng)）放入燒杯，超聲半小時；然后將10% 乙腈更換為 100% 乙腈超聲半小時；最后將100% 乙腈更換為超純水，超聲半小時?；蛘邔⒁郧坝眠^的舊C8 柱的后端柱頭卸下，進行清洗， 并代替此 C8 柱的前端柱頭。圖3：對端口，塑料封口，過濾網(wǎng)進行超聲清洗（ 3）安裝柱子將過濾網(wǎng)放入塑料封口處，安裝塑料封口，用扳手擰緊柱子。（ 4）連接柱子，進行再生然后將C8 柱裝到液相色譜儀，等基線走平后，進標品。觀察峰形、柱壓等是否正常，如果正常則可以不進行此步驟，否則進行再生

33、：（1）用 10% 乙腈沖洗30 分鐘，流速為0.6ml/min。（ 2）用 100%乙腈沖洗2 小時。流速為1.0mlmin。（ 3）用 100% 異丙醇沖洗2 小時。流速為0.5mlmin。（ 4 ）用100% 乙腈沖洗2 小時。流速為1.0mlmin。（ 5）用 10% 乙腈沖洗30 分鐘，流速為0.6ml/min，然后換上流動相，然后走流動相，等基線走平后，進標品。（ 5）驗證修復效果驗證方法（ 1 ）觀察柱壓，柱壓正常。（ 2 ）觀察標品出峰情況，峰形良好。（ 3 ）進行回收率驗證，回收率達到85%-105% 。通過以上方面，說明修復成功，此C8柱可以繼續(xù)進行使用。（ 6）注意事項拆

34、裝 C8 柱注意事項清洗手，防止污染柱子內(nèi)部。 拆裝柱子時， 防止柱頭部螺紋變形。 連接 C8 柱與液相色譜儀注意事項連接 C8 柱入口與液相色譜儀，打開泵，使C8 柱出口流出液體，沖 5 分鐘，連接 C8 柱與液相色譜儀檢測器端。防止有異物流入檢測池。3 色譜檢測的項目和關鍵控制點3.1 樣品檢驗流程圖核實檢驗計劃樣品接收樣品確認記錄樣品信上機檢測樣品儀器檢查平衡檢測器儀器聯(lián)機核實出具結果再次核實記錄檢驗結檢驗計劃輸入 unliab核實出具結果（1 ）核實檢驗計劃認真核實檢驗計劃，明確檢驗項目和批次，核實可以開展的項目。（2 ）樣品接收經(jīng)相關檢驗人員對送檢信息及樣品的符合性確認后在送檢單上簽

35、字，檢驗人員即可進行樣品的檢驗。（3 ）樣品確認注意檢查樣品規(guī)格、型號、商標、批次等級內(nèi)容是否清楚，狀態(tài)是否完好、變質(zhì)、污染等。如發(fā)現(xiàn)有任何問題，要詢問送檢單位。（ 4 ）記錄樣品信息將樣品名稱、批次、送樣日期等信息完整的記錄到帶有編碼的原始記錄上，要盡可能的保證信息的完整性，和可追溯性。（ 4 ）樣品前處理按照相應的檢驗方法進行處理，并做好記錄。（ 5 ）上機檢測樣品待儀器平衡完畢后，裝滿洗瓶內(nèi)的清洗溶劑（清洗溶劑要當天用當天配置），根據(jù)作業(yè)指導書或者國標，走標準曲線或者單點，上機即可。（ 6 ）記錄檢驗結果儀器走完樣品后，根據(jù)峰的保留時間定性，峰面積定量，如實記錄檢驗結果于原始記錄中，原始

36、記錄按方法要求進行實際記錄檢測值。（ 7 ）核實出具結果對于外部樣品的檢測，記錄好檢驗結果后，核實無誤后即可出具檢驗結果。（8 ）核實檢驗計劃對于內(nèi)部樣品的檢測，輸入結果前需再次核實檢驗計劃，保證沒有漏檢后方可輸入檢驗結果。（ 9 ）輸入 unliab打開 unliab系統(tǒng)，選擇正確的樣品類型和業(yè)務類型，創(chuàng)建樣品，創(chuàng)建完畢后如實填寫unliab系統(tǒng)中的信息卡，正確分配檢測項目，輸入結果。結果報出時，檢測結果在檢出限以下時，均報未檢出；檢測結果在檢出限以上時，報實測值。如檢驗處均使用程序輸單，則要求各崗位的輸單密碼不能外漏；結果輸入后不允許隨意改動，如需修改則上報直屬領導同意后則進行修改，其他人

37、員無權修改；所有過程檢驗結果均在出具結果的當班下班前提交系統(tǒng)或輸入固定文件夾中；按照規(guī)定的程序進入預定的表格，不允許輸入的內(nèi)容和文件名稱不對應、存在相同或能引起誤解的名稱，不能保證儲存的唯一性。檢驗報告儲存要求：如使用 Unilab系統(tǒng)出具結果， 由于起系統(tǒng)有自動保存功能，故不需要對其進行下載保存，其他電子版檢驗報告要求每半年進行備份刻盤一次。3.2 三聚氰胺檢測原理：試樣用三氯乙酸溶液- 乙酸鉛提取，經(jīng)陽離子固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜法測定，外標法定量。三聚氰胺檢驗方法流程圖：接樣稱量樣品加0.1% 三氯乙酸 50ml加0% 乙酸鉛2ml超聲20min離心10min（8000r/min

38、）過混合型陽離子交換柱凈化氮吹20%甲醇溶液定容1ml0.45um過濾上機。稱量樣品：嚴格按照天平的使用規(guī)程操作即可。具體如下：天平使用前檢查：(1) 準備使用天平時觀察周圍是否存在震動的情況，如果存在應在震動結束后再稱取樣品。(2) 檢查天平的使用環(huán)境是否符合溫度10 30 、濕度 25 85 的要求，水平泡是否處于中央位置。(3) 打開天平，待天平完成自檢顯示“0.0000 ”時，可以使用。(4) 對于過冷、過熱和含有揮發(fā)性及腐蝕性的物體，不可放入天平內(nèi)稱量，被測物不得超過天平最大的負載。稱量(1) 將被測物放在稱盤中央，待顯示器左側(cè)邊的“”標志熄滅后，該數(shù)字即為被稱物的質(zhì)量；(2) 如稱

39、量需盛放物質(zhì)， 先稱量容器， 按 TAR 鍵，顯示為零即去皮， 再置被稱物質(zhì)于容器中，這時顯示的是被稱物的凈重；(3) 每次稱量時都應將天平門關閉，稱量樣品過程中，避免出現(xiàn)抽拉抽屜、人員走動、倚靠實驗臺等對結果有影響的動作；(4) 稱量完畢后關閉天平開關，但不必斷掉電源；(5) 稱樣時所使用的離心管等要編號與樣品一一對應， 并且記錄下樣品的質(zhì)量；加藥品加入藥品時注意要邊加邊搖，讓藥品與樣品充分接觸，使粉末狀樣品充分的溶解在藥品中。超聲處理：超聲樣品時執(zhí)行超聲波操作規(guī)程即可。具體如下：工作前準備：(1) 檢查電源連接線是否有破損，電源插頭是否插入220V 的三芯電源插座并連接牢固；(2) 檢查清

40、洗槽是否有異物；(3) 檢查排水閥門是否關閉；超聲處理：(1) 樣品在超聲時要求超聲波清洗機中的液面一定要高于樣品的液面;(2) 時間控制符合要求 ;(3) 樣品超聲處理完成后，關閉電源開關，將槽內(nèi)水放凈，并將機體擦洗干凈；斷開電源，讓機體自然散熱 ;離心樣品 :樣品離心時執(zhí)行離心機的操作規(guī)程即可。如下：(1) 檢查電源及數(shù)據(jù)線連接是否牢固，打開儀器電源，設定所需溫度;(2) 待溫度達到設定溫度時，打開儀器上蓋，將需離心的樣品對稱放入離心機內(nèi)，關閉儀器上蓋，設定轉(zhuǎn)速，設定運轉(zhuǎn)時間，點擊開始離心;(3) 離心結束后將樣品取出，如暫時不使用，需將儀器上蓋蓋好，如長時間不使用，需將腔體內(nèi)冷凝水清理后

41、，關閉儀器電源過混合型陽離子交換柱樣品離心時準備好所需要的陽離子小柱和試管并一一編號。離心結束后活化陽離子小柱、上樣、淋洗等。整個萃取過程要求銜接緊密不可以使小柱干燥，并且每一種液體按要求控制流速在1ml/min 左右 ;氮吹 :執(zhí)行氮吹儀操作規(guī)程即可，具體如下：用前檢查(1) 檢查電源線路是否正常；(2) 檢查氮氣連接管路是否正常；(3) 檢測氮吹針是否清潔，并進行必要的清潔工作使用(1) 連接電源，打開氮吹儀開關，調(diào)節(jié)溫度，準備升溫；(2) 將針頭放置好，調(diào)節(jié)氮氣流路暢通。將氮氣開關打開，使用調(diào)壓閥調(diào)節(jié)氮氣流速適合；(3) 待溫度和壓力達到檢驗要求，則放置樣品；(4) 調(diào)節(jié)針頭位置 (距離

42、液面 1-2cm) ，使氮氣開始吹干樣品；(5) 樣品吹干后，關閉氮氣。關閉氮吹儀開關，取下電源插頭；(6) 取出樣品 ;注意事項(1) 注意保持氮吹儀清潔 ,氮氣管路一定要連接緊密 ;(2) 三聚氰胺要求氮吹的溫度是 50 ±5（），并且吹針要用甲醇擦拭干凈，防止樣品間交叉污染，氮氣流量以液面有輕微的波動即可，不可以吹的液面飛濺。并且所使用的試管是玻璃的，在氮吹時小心不要發(fā)生強烈得磕碰，以免碰碎試管 ;濃縮完全的吹干后用所需的溶液1 毫升定容，漩渦1 分鐘，過相應的0.22um或 0.45um針頭過濾器 (針頭過濾器分水系和有機系)緩慢地過濾樣品到已經(jīng)一一編號的進樣瓶中準備上機。上

43、機儀器參考條件：流動相：離子對緩沖鹽：乙腈=90:10流速： 1.0ml/min柱溫： 40 檢測器：紫外檢測器。波長 ;240nm進樣量： 20ul備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當調(diào)整;此方法的檢出限2mg/kg3.3山梨酸、苯甲酸山梨酸、苯甲酸檢測原理：去除試樣中脂肪和蛋白質(zhì)，甲醇稀釋，過濾后，采用反相液相色譜法奮力測定。方法檢測流程圖： 稱量樣品加入 0.1M 氫氧化鈉溶液 25ml 超聲水浴 15min 調(diào)節(jié) PH 到 8 分別先后加入 2ml 亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液劇烈振搖，靜止15min 用甲醇定容，靜止15min過 0.45um濾

44、膜過濾取清液上機色譜參考條件：色譜柱： C18,250mm*4.6mm， 5um流動相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液=1 ：9流速： 1.2ml/min檢測波長： 227nm柱溫：室溫進樣量： 10ul山梨酸、苯甲酸檢出限1mg/kg3.4安賽蜜、糖精鈉安賽蜜、 糖精鈉檢測原理：樣品中安賽蜜、 糖精鈉經(jīng)高效液相反相柱 C18 分離后，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。方法流程圖： 稱量樣品加入氫氧化鈉溶液25ml超聲15min調(diào)節(jié)PH到 8（用0.5mol/l的硫酸） 分別先后加入2ml亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液振搖靜止15min加入40ml甲醇定容到100ml靜止 15min 0.45um有機濾膜取清液

45、過濾上機檢測。儀器參考條件：柱溫箱： 30-40 紫外檢測器： 230nm進樣量： 20ul 和 10ul色譜柱： C18 或 C8 （250*4.6mm,5um）流速： 1.0ml/min備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當調(diào)整。安賽蜜、糖精鈉的檢出限3mg/kg3.5 對羥基苯甲酸乙丙酯對羥基苯甲酸酯類檢測原理：試樣用甲醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。3.5.2依據(jù) DB37/T1100-20083.5.2方法檢測流程圖： 稱取樣品于 25ml比色管加入 15ml 甲醇漩渦 2min 超聲 10min 用甲醇定容至25ml 靜止分層， 取上清液經(jīng) 0.2um 有機濾膜過濾上機檢測。3.5.3儀器條件：色譜柱： C18 柱，