電針內(nèi)關(guān)對(duì)心肌缺血再灌注損傷肌酸激酶及丙二醛的影響

1、    電針內(nèi)關(guān)對(duì)心肌缺血再灌注損傷肌酸激酶及丙二醛的影響        摘要：為探討針刺內(nèi)關(guān)抗缺血再灌注損傷作用的內(nèi)在機(jī)制，結(jié)扎家兔左冠狀動(dòng)脈前降支40 min，再灌注1 h，觀察電針內(nèi)關(guān)對(duì)心肌缺血再灌注損傷血清肌酸激酶(CK)和心肌組織丙二醛(MDA)的影響。結(jié)果：缺血再灌注模型組CK、MDA含量明顯升高；針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組與之比較顯著降低，有非常顯著性意義(P0.01)。提示電針內(nèi)關(guān)對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用是通過(guò)減輕自由基損傷反應(yīng)，減少心肌CK的釋放，降低MDA的生成而實(shí)

2、現(xiàn)的。關(guān)鍵詞：針刺；內(nèi)關(guān)；心肌再灌注損傷；肌酸激酶；丙二醛中分類號(hào)：R245.97文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-5633(2000)03-0062-03 Effects of Electroacupuncture on Neiguan Point on CreatineKinase and Malondialdehyde after Myocardial Lschemia-Reperfusion InjuryYAN Jie，TIAN Yuefen，LIN Yaping(Department of Acupuncture and Massage, Hunan University of TC

3、M，Changsha 410007)Abstract:To explore the mechanism of electroacupuncture(EA) on Neiguan point on myocardial ischemia-reperfusion injury,the changes of Creatine Rinase (CK) and malondialdehyde(MDA) in blood serum were observed 40 min after myocardial ischemia and 1h after reperfasion. results:As com

4、pared with the EA group, the contents of CK and MDA of myocardial ischemia-reperfasion group were increased significantly and their differenses were also apparent(P0.01). The present stady suggested that EA on Neiguan point had a protective role on myocardial ischemia-reperfusion by weakening injury

5、 reaction induced by free radical decreasing the releare of CK and reducing the synthesis of MDA.key words:electroacupuncture； Neiguan point; inyocardial reperfusion injury; Creatine kinase;Malodialdch.早期再灌注是挽救缺血瀕危心肌的必要條件，然而心肌缺血再灌注可導(dǎo)致進(jìn)一步的損傷。如何能有效地降低缺血再灌注損傷的程度，一直是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界十分關(guān)注的課題。針刺內(nèi)關(guān)對(duì)心臟的顯著保護(hù)作用已被多年的實(shí)驗(yàn)和臨

6、床所證實(shí)，而針刺防治心肌缺血再灌注損傷機(jī)制的研究尚未見(jiàn)到有關(guān)的闡述。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)缺血再灌注動(dòng)物血清肌酸激酶(CK)及心肌組織丙二醛(MDA)的測(cè)定，研究電針內(nèi)關(guān)對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響及作用機(jī)制。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組大耳白兔32只，體重1.52.5 kg，雌雄不限，由湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。32只動(dòng)物隨機(jī)分為4組：空白組、缺血再灌注模型組、針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組、針刺列缺對(duì)照組，每組8只動(dòng)物。1.2方法1.2.1造模方法25%烏拉坦(4 ml/kg)耳緣靜脈注射麻醉，仰臥固定于兔臺(tái)上，行氣管切開(kāi)術(shù)，接動(dòng)物人工呼吸機(jī)，沿胸骨正中線左側(cè)旁開(kāi)12 cm處切開(kāi)皮膚，暴露胸骨，從第三、四肋

7、間隙處開(kāi)胸，暴露心臟，用眼科剪將心包膜前部剪開(kāi)，止血鉗將左心耳輕輕提起，以左冠狀動(dòng)脈主干為標(biāo)志，在左冠狀動(dòng)脈前降支根部用無(wú)創(chuàng)性小圓針穿零號(hào)醫(yī)用縫合線，心電監(jiān)測(cè)，心臟恢復(fù)規(guī)則跳動(dòng)15 min后靜脈注射肝素(400 u/kg)，在穿線處置一硅膠管結(jié)扎左前降支，以左室前壁發(fā)紺并向外膨脹及心電S-T段抬高為標(biāo)準(zhǔn)31。關(guān)閉胸腔，40 min后開(kāi)胸，剪開(kāi)硅膠管，恢復(fù)左前降支灌流，60 min后頸動(dòng)脈取血，摘取心臟。1.2.2電針治療方法用G6805-1型電針治療儀(上海醫(yī)用電子儀器廠生產(chǎn))疏密波刺激30 min。1.2.3檢測(cè)方法動(dòng)物缺血40 min，再灌注60 min，頸動(dòng)脈插管取血3 ml，LD5-2

8、A低速離心3 500 r/min，常溫離心10 min，分離出血清后，用移液槍吸取上層血清0.5 ml置于Eppdorf離心管中，-20保存，測(cè)定血清肌酸激酶(CK)的含量。動(dòng)物缺血40 min，再灌注60 min后，摘取心臟，置于冰冷的生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙拭干，分析天平稱取0.2 g心肌組織，放入5 ml小燒杯內(nèi)，用刻度吸管加入組織塊重量9倍的生理鹽水，眼科小剪盡快剪碎組織塊。將剪碎組織倒入玻璃勻漿管中，置于勻漿機(jī)上，搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨4050次，制備成10%的組織勻漿，倒入離心管中，3 500 r/min常溫離心15 min，移液槍吸取上清進(jìn)行心肌組織丙二醛(MDA)的

9、測(cè)定。CK及MSA試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.2.4統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)中各組數(shù)據(jù)先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，在方差齊的情況下采用單因素方差分析，若各總體均數(shù)有差別，再進(jìn)行SNK檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用CASiOfx-3900pv程序計(jì)算器進(jìn)行。2結(jié)果2.1血清肌酸激酶(CK)的變化缺血再灌注模型組CK值明顯升高，是空白組的2.4倍，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析有非常顯著意義(P0.01)；針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組CK值雖與空白組間的比較有顯著意義(P0.05)，但明顯低于模型組及列缺對(duì)照組，差異有非常顯著性意義(P0.01)，見(jiàn)表1。說(shuō)明針刺內(nèi)關(guān)穴可明顯降低血清中CK含量，減少再灌注后心肌肌酸激酶的釋放。2.2心肌組織丙二醛(

10、MDA)的變化缺血再灌注模型組MDA值升高顯著，與空白組相比有非常顯著意義(P0.01)；針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組MDA含量較低，與模型組及針刺列缺組均存在非常顯著差異(P0.01)，而與空白組比較則無(wú)顯著意義(P0.05)，見(jiàn)表2。說(shuō)明針刺內(nèi)關(guān)能增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)源性SOD的活性，清除氧自由基，降低組織脂質(zhì)過(guò)氧化程度。表1各組動(dòng)物血清CK活性的相互比較(n=8，<"0 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100319191910795" 12 14>±s,u/ml)組別模型組內(nèi)關(guān)組列缺組空白組(34.02

11、77;7.09)P0.01P0.05P0.01模型組(80.40±6.29)P0.01P0.05內(nèi)關(guān)組(45.53±10.96)P0.01列缺組(80.28±11.66)     注：上表方差分析F=52.78，P0.01；“()”中數(shù)據(jù)為血清CK值。 表2各組動(dòng)物心肌組織MDA含量相互比較(n=8，<"0 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100319191910795" 12 14>±s,nmol/mg)組別模型組內(nèi)關(guān)組

12、列缺組空白組(4.57±0.51)P0.01P0.05P0.01模型組(8.14±1.02)P0.01P0.05內(nèi)關(guān)組(4.61±0.52)P0.01列缺組(7.71±0.74)     注：上表方差分析F=56.47，P0.01；“()”中數(shù)據(jù)為心肌組織MDA含量。3討論肌酸激酶(Creatine Kinase CK)存在于肌肉組織中，主要分布于骨胳肌及心肌中，它能催化ATP分子中的高級(jí)磷酸鍵轉(zhuǎn)變成肌酸和ADP。心肌缺血時(shí)，血流量突然停止，在缺血后1015 s，缺血區(qū)心肌停止收縮，心肌細(xì)胞的能量來(lái)源ATP和磷酸肌

13、酸很快降低1。肌酸激酶是心肌缺血時(shí)血清酶最早升高的一種，可作為急性冠心病監(jiān)護(hù)單位最有用酶之一，心肌酶的釋放量是缺血心肌損害程度的重要標(biāo)志2，而心肌酶漏出是心肌缺血再灌注損傷主要表現(xiàn)之一3。心肌缺血再灌注損傷與自由基有密切關(guān)系，心肌缺血和再灌注改變自由基生成和自由基清除劑之間的平衡，自由基可從心肌細(xì)胞內(nèi)外兩個(gè)空間中產(chǎn)生，心肌中的黃嘌呤氧化酶在氧化次黃嘌呤過(guò)程中產(chǎn)生了氧自由基。在心肌組織缺血缺氧和再灌注后，自由基大量產(chǎn)生及自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化作用是再灌注損傷的主要原因。同時(shí)缺血和再灌注也削弱了心肌組織內(nèi)抗自由基系統(tǒng)的活力。心肌缺血時(shí)，自由基產(chǎn)生增多，自由基清除劑SOD減少，而活性很強(qiáng)的氧自由基(

14、OFR)與細(xì)胞膜上的多不飽和脂肪酶反應(yīng)，發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，其過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)對(duì)膜有很強(qiáng)的破壞作用，某些細(xì)胞功能受損傷而導(dǎo)致細(xì)胞死亡，同時(shí)血管內(nèi)皮產(chǎn)生的自由基通過(guò)血管壁轉(zhuǎn)運(yùn)，直接導(dǎo)致心肌損傷49。因此，增強(qiáng)心肌自由基清除系統(tǒng)的功能，降低心肌細(xì)胞在缺血再灌注時(shí)自由基的產(chǎn)生，抑制自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，才能實(shí)現(xiàn)心肌細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)10，測(cè)試MDA的量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組肌酸激酶的釋放量明顯低于模型組及針刺列缺對(duì)照組(P0.01)，說(shuō)明內(nèi)關(guān)穴的針刺效應(yīng)在心肌缺血再灌注肌酸激酶的大量釋放過(guò)程中，起到了很好的抑制作用，酶釋放的減少反映了心肌缺血

15、再灌注過(guò)程中心肌細(xì)胞的損害被大大降低。本實(shí)驗(yàn)中內(nèi)關(guān)組肌酸激酶的釋放量與空白組相比較仍有顯著差異(P0.05)，可能與針刺的刺激程度和刺激時(shí)間有關(guān)。但仍能說(shuō)明針刺抑制CK的釋放，呈現(xiàn)對(duì)心肌細(xì)胞的良好保護(hù)作用。缺血再灌注組脂質(zhì)過(guò)氧化物的最終產(chǎn)物MDA水平明顯增加，針刺內(nèi)關(guān)保護(hù)組能明顯保護(hù)缺血再灌注時(shí)心肌細(xì)胞SOD活力，減少M(fèi)DA生成，使MDA含量顯著下降(P0.01)，而針刺列缺對(duì)照組MDA仍保持較高的水平。提示針刺內(nèi)關(guān)對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用是通過(guò)減輕自由基損傷反應(yīng)，減少心肌CK的釋放，降低MDA的生成而實(shí)現(xiàn)的。 基金項(xiàng)目：國(guó)家中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(97A107)。作者簡(jiǎn)介：嚴(yán)潔(1941-)

16、女，湖北武漢市人，湖南中醫(yī)學(xué)院教授、博士導(dǎo)師，主要從事針灸教學(xué)及針灸經(jīng)絡(luò)的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。嚴(yán)潔（湖南中醫(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）田岳鳳（湖南中醫(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）林亞平（湖南中醫(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）易受鄉(xiāng)（湖南中醫(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）常?。ê现嗅t(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）劉建華（湖南中醫(yī)學(xué)院 針推系，湖南 長(zhǎng)沙 410007）參考文獻(xiàn)：1陳在嘉，徐義樞，孔華宇.臨床冠心病學(xué)M.北京：人民軍醫(yī)出版社.1997.29-37.2劉澤，袁恩榮，吳平生.抗高血壓因子對(duì)心肌缺血損傷的保護(hù)作用J.臨床心血管病雜志，

17、1998，14(3)：159.3羅愛(ài)倫，郭向陽(yáng)，徐守春.卡托普利對(duì)犬缺血再灌注損傷心臟保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究J.中華心血管病雜志，1998，26(3)：226.4丘瑞香，羅致強(qiáng)，羅漢川，等.心脈通膠囊對(duì)冠心病心肌缺血患者抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的臨床研究J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(6)：342.5Roberto F,Ceconl C,Cwreuo S.Oxygen free radicals and myocardial damage: protective role of thiolantaining agen-tsJ.Amer J Med. 1991;91:3C-104S.6華王月，程時(shí).心肌缺血再灌注損傷與生物膜損傷J.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，1993，1(1)：26.7許秀森，劉春香.心肌缺血再灌注損傷的機(jī)理及中藥防治的研究J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1994，11(2)：124.8Anand IS,Wahi PL, Dhalla NS. Pathophysiology and p