研究虎杖苷對實驗性急性胃黏膜損傷的保護作用及其與抗氧化的關系

1、研究虎杖苷對實驗性急性胃黏膜損傷的保護作用及其與抗氧化的關系    研究虎杖苷對實驗性急性胃黏膜損傷的保護作用及其與抗氧化的關系摘要：目的：研究虎杖苷（polydatin,PD）對實驗性急性胃黏膜損傷的保護作用及其與抗氧化的關系。方法制備小鼠無水乙醇型、吲哚美辛（消炎痛）型、大鼠束縛-冷凍（restraint-cold stress,RCS）應激型胃黏膜損傷模型，測定胃黏膜損傷指數；測定大鼠血清 SOD活性和 MDA含量。結果PD可劑量依賴性地抑制實驗性急性胃黏膜損傷。PD可使大鼠束縛冷凍應激型胃黏膜損傷過程中血清中升高的 MDA含量降低，可使降低的 S

2、OD水平回升。結論PD對實驗性急性胃黏膜損傷具有保護作用，其作用機制與 PD抗氧化有關。關鍵詞：胃黏膜損傷；虎杖苷；無水乙醇；吲哚美辛；束縛-冷凍應激Abstract：Objective: To study the protective effect of polydatin (PD) on experimental gastric mucosal lesion in rats and relationship of antioxidative effect. Methods: Make the model of gastric mucosal lesion in rats induced b

3、y ethanol absoute ,RCS and indomethacin;the index of gastric mucosal lesion in rats was determined; the contents of MDA and SOD of serum  were measured. Results: The index of experimental gastric mucosal lesion in rats was inhibited after administration of PD, the decrease of SOD of serum was e

4、levated to normal level. Conclusion: PD can possess protective effect on experimental gastric mucosal lesion in rats .Its mechanism may be related to antioxidative effect.Keywords: Gastric mucosal lesion;  Polydatin;  Ethanol absolute;  Indomethacin;  Restraint-cold stress(RCS) 虎

5、杖苷（polydatin,PD）為蓼科蓼屬多年生草本植物虎杖（Polygonum cuspidatumSieb.et Zucc.）的干燥根和莖中提取的一種單體，也稱白藜蘆醇苷?；⒄刃晕犊嗪?，歸肝、肺、膽經。主要功效有祛風利濕，祛痰止咳，清熱解毒，活血化瘀。中醫(yī)臨床用于治療濕熱黃疸、肺熱咳嗽、瘡癰腫毒、關節(jié)痹痛、經閉經痛、水火燙傷、跌打損傷等。現代研究已證實 PD具有保護心肌細胞、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、抵抗內毒素休克、降血脂、抗脂質過氧化、保肝利膽、鎮(zhèn)咳、平喘，抗病原微生物多種藥理作用1，現有文獻報道虎杖口服液有抗?jié)冏饔?，但有關 PD對急性胃黏膜損傷的影響尚未見報道。本文應用小鼠無水乙

6、醇型、吲哚美辛型和大鼠束縛-冷凍應激型胃黏膜損傷模型研究 PD對實驗性急性胃黏膜損傷的保護作用與抗氧化的關系。1  材料與方法1.1  材料1.1.1  動物昆明種小鼠，（24±2）g；SD大鼠，（200±30）g，兼用安徽醫(yī)科大學實驗動物中心（皖醫(yī)實動準字第01號）提供。實驗前適應性飼養(yǎng)1周。1.1.2  儀器752 MC紫外分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）、TDZ4-W低速臺式離心機（長沙湘儀離心儀器有限公司）、AT250十萬分之一電子天平（瑞士 METTLER公司）。1.1.3  藥品試劑PD：西安冠宇生物技術有

7、限公司產品，虎杖苷含量為99.12%，批號 GY050518，臨用前用生理水（NS）配制；無水乙醇（ethanol absolute）：上海試劑一廠綜合經營公司，批號20050608；吲哚美辛（indomethacin）：上海辛帕斯制藥有限公司，批號050101；西咪替?。╟imetidine,Cim）：常州康普藥業(yè)有限公司，批號0503024；MDA試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號20051128；SOD試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號20051202。1.2  方法1.2.1  分組與給藥昆明種小鼠60只，隨機分為6組：空白對照組，模型對照組，PD大、中、小劑量

8、組（240，120，60 mg/kg），Cim陽性藥對照組（200 mg/kg）。藥物均用 NS配制，臨用前充分混勻后灌胃（ig）給藥，連續(xù)5 d?？瞻讓φ战M，模型對照組給予 NS，給藥容積均為0.1 ml/10 g。SD大鼠48只，隨機分為6組：空白對照組，模型對照組，PD大、中、小劑量組（180，90，45 mg/kg），Cim陽性藥對照組（140 mg/kg）。連續(xù) ig給藥5 d。空白對照組，模型對照組給予 NS，給藥容積均為1 ml/100 g。1.2.2  無水乙醇誘發(fā)的小鼠胃黏膜損傷模型制備3昆明種小鼠實驗前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，除正常對

9、照組外，每只均 ig無水乙醇0.1 ml，引起胃黏膜損傷，1 h后處死動物。1.2.3  吲哚美辛誘發(fā)的小鼠胃黏膜損傷模型制備4昆明種小鼠實驗前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，小鼠 ig吲哚美辛溶液（64 mg/kg），2 h后處死動物。1.2.4  大鼠 RCS應激型黏膜損傷模型制備5SD大鼠實驗前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，在乙醚輕度麻醉下，將大鼠縛于鐵柵上，待動物清醒后放入4冰箱中應激，3 h后從冰箱中取出腹動脈放血處死取胃。1.2.5  觀察指標和方法1.2.5.1  小鼠胃黏膜損傷面積的測定動物處

10、死后，取出胃，并向胃內注入10%甲醛2 ml，置于同濃度甲醛中充分固定。20 min后，沿胃大彎剪開胃，展平并置于雙目體式鏡下觀察胃出血性病灶，用測微尺計算胃黏膜損傷面積，以每只小鼠胃黏膜損傷面積（mm2）的總和作為其損傷指數，并計算胃黏膜損傷抑制率。1.2.5.2  大鼠胃黏膜損傷指數測定6動物處死后，取出胃，并向胃內注入10%甲醛10 ml，置于同濃度甲醛中充分固定，30 min后，沿胃大彎將胃剪開展平，可見局限于胃黏膜的點狀或條索狀出血性病灶，按 Guth標準改良評分：其中病灶長度1 mm為1分，病灶長度2 mm為2分，病灶長度 3 mm為3分，病灶長度4 mm為4分，若病灶長

11、度4 mm，則分段計分，病灶寬度2 mm時，分數乘以2，最后以全胃病灶分數總和作為該動物胃黏膜損傷指數，并計算損傷抑制率。1.2.5.3  大鼠血清中 MDA含量測定腹主動脈采血，靜置2 h后3 000 r/min離心15 min。取血清-20冷凍保存。采用硫代巴比妥法（TBA法），操作按試劑盒說明進行，單位 nmol/ml。1.2.5.4  大鼠血清中 SOD活性測定按 SOD測定試劑盒說明書進行，單位 nmol/ml。1.2.5.5  數據處理數據以±s表示，兩組間數據比較采用 t檢驗。NextPage2  結果2.1  PD對無

12、水乙醇致小鼠胃黏膜損傷的影響表1表示，PD劑量組胃黏膜損傷指數與模型組對照組比較，大、中劑量組均具有顯著性差異，PD小劑量組胃黏膜損傷指數雖較模型組有所降低，但統(tǒng)計學檢驗差異無顯著性。各劑量組損傷抑制率分別為模型對照組統(tǒng)計學檢驗差異無顯著性。各劑量組損傷抑制率分別為模型對照組的43.04%，29.84%，18.51%，說明PD大、中劑量可明顯減輕無水乙醇所致的實驗性急性胃黏膜損傷。表1  PD對無水乙醇致小鼠急性胃黏膜損傷的影響(略)與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，n=102.2  PD對吲哚美辛致小鼠胃黏膜損傷的影響由表2可見，PD60、120、240 mg

13、/kg組小鼠胃黏膜損傷指數與模型對照組比較，差異均具有顯著性意義，表明 PD對小鼠吲哚美辛致急性胃黏膜損傷的模型也具有明顯的保護作用。表2  PD對吲哚美辛致小鼠胃黏膜損傷的影響(略)與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，n=102.3  PD對大鼠 RCS應激型胃黏膜損傷的影響大鼠束縛-冷凍應激后，鏡下可見鼠胃黏膜表面出現廣泛點狀或條索狀損傷。各組胃黏膜損傷情況見表3，結果顯示不同劑量的 PD對大鼠 RCS應激型胃黏膜損傷均具有明顯的抑制作用。表3  PD對大鼠束縛-冷凍應激型胃黏膜損傷的影響(略)與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，n=82.

14、4  PD對大鼠血清中 MDA含量和 SOD活性的影響表4顯示，模型對照組大鼠血清中和 SOD較正常對照組明顯升高，SOD含量明顯降低。而用藥組經給予 PD后，血清中 MDA含量較模型對照組明顯降低，SOD明顯升高。3  討論本研究通過采用大鼠束縛-冷凍應激和小鼠無水乙醇、吲哚美辛灌胃3種動物模型，發(fā)現預先給予 PD灌胃，連續(xù)5 d可以劑量依賴性地抑制由上述3種模型所引起的急性胃黏膜損傷，表明 PD對急性胃黏膜損傷具有明顯的保護作用。表4  PD對大鼠血清中的 MDA和 SOD活性的影響(略)與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01；與空白對照組比較，#P0.

15、01，n=8研究表明多種類型的急性胃黏膜損傷都與氧自由基有關79。氧自由基在整體和細胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜細胞的脂質過氧氣化，引發(fā)胃黏膜損傷。MDA作為羥基自由基（誘導脂質過氧化反應）的一個指標，可以間接地反映羥自由基形成的數量。已經證明乙醇誘發(fā)的急性胃黏膜損傷與氧自由基和胃黏膜的血流量減少有關?；⒄瓤诜簩o水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷與氧自由基和胃黏膜的血流量減少有關，而虎杖口服液對無水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷有保護作用，PD能改善微循環(huán)，抗脂質過氧化。本實驗中也發(fā)現 PD大、中劑量對無水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷有保護作用，可能是與 PD的抗氧化有關，具體機制有待研究。束縛-冷凍應激性胃黏膜損傷與

16、胃黏膜血流量減少有關外，還有氧自由基參與10。本實驗中也發(fā)現PD能有效拮抗大鼠束縛-冷凍應激所致 SOD活性降低，并抑制脂質過氧氣化產物 MDA升高，具有較強的清除氧氣自由基作用。提示 PD的這種胃黏膜保護作用可能與其抗氧化作用有關。吲哚美辛屬于非甾體抗炎藥，作為環(huán)氧化酶抑制劑，其作用結果是抑制胃內前列腺素（PG）的合成，從而使胃黏膜的防御能力降低。文獻報道虎杖對吲哚美辛致大鼠胃潰瘍有保護作用11，其機制與抗氧化有關。本研究中 PD可使小鼠吲哚美辛苦型胃黏膜損傷減輕，提示 PD對胃黏膜保護作用可能與促進胃組織中 PG的生物合成有關，或與 PD的抗氧化相關。另有文獻報道應激所致急性胃黏膜損傷與缺

17、血再灌注有關，PD是否有抗胃黏膜缺血再灌注損傷作用，將有待進一步探討。參考文獻：1馮  雷.虎杖研究新進展J.醫(yī)藥論壇雜志，2003，24（9）：78.2傅志泉，雍定國，周智林，等.虎杖口服液抗胃出血及抗胃潰瘍作用的實驗研究J.浙江中醫(yī)學院學報，2004，28（4）：60.3  馬  燕，胡  強，趙維中.梔子總苷對小鼠實驗性胃黏膜損傷的保護作用J.時珍國醫(yī)國藥，2005，16（2）：386.4  梁心平，楊素娟.消炎痛致胃黏膜操作時胃組織胺含量變化及甲氰咪呱的影響J.中國應用生理學雜志，1990，6（1）：55.5  趙維中，王宇翎

18、，陳志武，等.蕓香甙的胃黏膜保護作用研究J.安徽醫(yī)科大學學報，1998，33（2）：93.6  Guth PH,Paulsen G,Nagata H et al.Histologic and microcirculatory changs in alcohol-induced gastric lesions in the rat:Effect of prostaglandin cytoprotectionJ. J Gastroenterology,1984,87(5):1083.7  IZgüt-Uysal VN,Arzu Ag ac,Narin Derin .Effect of carnitine on stress-induced lipid perxidation in rat gastric mucosa.J.J Gastroenterol 2001,36(4):231.8  K wiecien S,Brzozowski T,Kontuek SJ.Effects