延腎一號沖劑抗大鼠腎缺血再灌注氧化損傷的研究

1、    【摘要】    目的 觀察延腎一號沖劑對腎缺血再灌注(I/R)損傷大鼠腎組織活性氧（ROS）、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、Ca2+Mg2+ ATP酶活性的變化，探討其抗腎I/R損傷的機(jī)制。方法 72只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、對照組、治療組，各24只。治療組給予延腎一號沖劑，假手術(shù)組及對照組灌以相應(yīng)量的生理鹽水。分別檢測缺血1 h、再灌注24、48 h時尿素氮、肌酐，ROS、MDA含量及SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶活性的變化。結(jié)果 再灌注24、48 h時治療組、對照組與假手

2、術(shù)組血清尿素氮（BUN）、肌酐(Cr)比較均有顯著升高 (P0.01)；再灌注24 h時對照組SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶活性與48 h時相比活性明顯降低 (P0.05)，再灌注24 h時治療組與對照組相比SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶明顯升高 (P0.05)；再灌注24 h時，治療組MDA、ROS則顯著低于對照組 (P0.01) ，再灌注48 h時，治療組與對照組相比仍有顯著差異(P0.01)。結(jié)論 氧化損傷是導(dǎo)致腎I/R損傷的重要原因；氧化損傷主要發(fā)生在I/R 24 h；延腎一號沖劑通過升高SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶的活性，減少M(fèi)DA、ROS產(chǎn)生，減少其對腎臟的損傷作用。

3、    【關(guān)鍵詞】 延腎一號沖劑；腎缺血再灌注；氧化損傷 Effects of herbal medicines Yanshen No.1 on renal ischemical reperfusion injury in ratsTAN JinChuan，WANG YueHua，YANG Chen，et al.Chinese Traditional Medical Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050011，Hebei，China【Abstract】 Objective To exa

4、mine the effects of herbal medicines Yanshen No.1 on reactive oxygen species (ROS)，malondialdehyde (MDA)，superoxide dismutase (SOD) and Ca2+Mg2+ ATP enzymatic activity in rats with renal ischemical reperfusion injury and explore its mechanism.Methods Seventytwo Wistar rats were randomly divided into

5、 sham operation，control and treatment groups（24 rats in each group）.The rats in treatment group were given Yanshen No.1 by gavage，2 g·kg-1·d-1，the rats in sham operation and control groups were given physiological saline by gavage.The level of ROS，MDA，SOD，Ca2+Mg2+ ATP enzymatic activity we

6、re examined at ischemia 1 h and reperfusion 24 and 48 h.Results Compared with sham operation group，the BUN，Cr levels were increased in treatment and control groups at the time of reperfusion 24 and 48 h (P0.01).In control group，SOD and Ca2+Mg2+ ATP enzymatic activity were lower at the time of reperf

7、usion 24 h than that at 48 h (P0.05).At the time of reperfusion 24 h，SOD and Ca2+Mg2+ ATP enzymatic activity in treatment group were higher than that in control group (P0.05).Compared with control group，MDA and ROS were decreased in treatment group (P0.01)，the same result at reperfusion 48 hour (P0.

8、01).Conclusions Oxidative damage is the significant reason leading to renal ischemical reperfusion injury，which is occurred mainly at the time of reperfusion 24 h.The renal protective effects of herbal medicines Yanshen No.1 is partly through increasing SOD，Ca2+Mg2+ ATP enzymatic activity and decrea

9、sing the level of MDA and SOD. 【Key words】 Yanshen No.1；Renal ischemical reperfusion；Oxidative damage腎缺血再灌注(I/R)損傷是臨床導(dǎo)致缺血性急性腎衰竭的原因之一，病死率高，且存活的患者亦多有不同程度的慢性腎功能損害。因此，如何減輕再灌注損傷是目前研究的熱點(diǎn)問題。脂質(zhì)過氧化是I/R導(dǎo)致組織損傷的重要機(jī)制。本研究通過觀察延腎一號沖劑治療后腎組織活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、Ca2+Mg2+ ATP酶活性的變化，探討其抗腎I/R損傷的機(jī)制。1 材料與方法1.1

10、實(shí)驗(yàn)動物及分組 清潔級健康雄性Wistar大鼠，體重190210 g，由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。72只大鼠自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，進(jìn)行尿蛋白定性檢測，全部為陰性。隨機(jī)分為假手術(shù)組、對照組、治療組，每組24只。自造模前1 w開始，每日灌胃一次，一直到處死為止。治療組給予延腎一號沖劑，用藥量為2 g·kg-1·d-1（用藥量相當(dāng)于成人每日每公斤體重的20倍）；假手術(shù)組及對照組灌以相應(yīng)量的生理鹽水。以2%戊巴比妥納（0.25 ml/100 g）腹腔注射麻醉，腹部正中切口暴露腹腔，小心分離雙側(cè)腎蒂。假手術(shù)組僅切除右側(cè)腎臟后關(guān)腹。對照組及治療組以無創(chuàng)動脈夾關(guān)閉左側(cè)腎動脈60

11、min，然后開放動脈血流，同時切除右側(cè)腎臟。開放血流后腎臟由暗紅變?yōu)轷r紅，表明再灌注成功，縫合腹腔。并分別于缺血60 min、再灌注24、48 h處死動物，股動脈取血，留取腎臟標(biāo)本。1.2 材料 延腎一號沖劑由黃芪、人參、冬蟲夏草、土茯苓、生大黃、當(dāng)歸、丹參等藥組成，由河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)院制劑室制備。HH.W21.600型電熱恒溫水箱為天津市泰斯特有限公司生產(chǎn)，TDL5A離心機(jī)為上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)，F(xiàn)J2021放射免疫計(jì)數(shù)器為國營262廠生產(chǎn)。SOD、ROS及Ca2+Mg2+ ATP酶及MDA試劑盒皆為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.3 觀察指標(biāo)及方法 腎功能指標(biāo)血清尿素氮（BUN）、肌酐(

12、Cr)測定，取股動脈血，采用全自動生化分析儀測定；MDA采用硫代巴比妥酸（TBA）比色分析法，SOD活力測定采用黃嘌呤氧化酶法，ROS、Ca2+Mg2+ ATP酶活性測定均采用化學(xué)比色法。腎臟病理學(xué)光鏡觀察，取腎組織，用FAA液固定，石臘包埋切片，以3 m的石臘切片，行HE 及Masson染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍片。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩組間t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較首先采用方差分析，若方差分析有顯著性則進(jìn)一步行均數(shù)間的兩兩比較。2 結(jié)果2.1 各組大鼠各時間點(diǎn)腎組織中Cr、BUN含量比較 缺血1 h，對照組、治療組血清BUN已開始升高

13、，與假手術(shù)組相比有顯著差異(P0.05)，對照組雖比治療組升高明顯，但無顯著差異(P0.05)，對照組、治療組血Cr雖有升高，但與假手術(shù)組相比無顯著差異(P0.05)，治療組血Cr雖較對照組降低，但無顯著差異(P0.05)。再灌注24、48 h后，與假手術(shù)組相比，治療組、對照組BUN、Cr明顯升高 (P0.01)，與對照組相比，治療組再灌注24、48 h BUN、Cr均明顯降低 (P0.01)。見表1。2.2 各組大鼠各時間點(diǎn)腎組織中SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶比較 缺血1 h,與假手術(shù)組相比，對照組、治療組SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶活性無明顯差異(P0.05)。再灌注24 h時，與假手術(shù)組相比，對照組SOD、 Ca2+Mg2+ ATP酶明顯降低 (P0.01)，說明氧化損傷主要發(fā)生在再灌注時；與對照組比較，治療組SOD、 Ca2+Mg2+ ATP酶活性顯著升高 (P0.01)。再灌注48 h時，對照組SOD、Ca2+Mg2+ ATP酶活性有所恢復(fù)，與24 h時相比差異顯著 (