薺菜總黃酮多囊脂質(zhì)體的制備和體外釋放行為研究(一)

1、薺菜總黃酮多囊脂質(zhì)體的制備和體外釋放行為研究(一)作者：梁亦龍，戴傳云，劉火安，舒坤賢【摘要】 目的 研究了薺菜總黃酮多囊脂質(zhì)體的制備和體外釋放行為的研究。方法采用單因素實驗，以蘆丁為對照品，用吸光光度法測定薺菜總黃酮的含量，復(fù)乳法制備多囊脂質(zhì)體，并對多囊脂質(zhì)體的處方進(jìn)行了篩選，同時，對薺菜總黃酮在不同釋放介質(zhì)中體外釋放行為進(jìn)行研究。結(jié)果藥材比為1100，EPCTOChol 的質(zhì)量比為721和初乳與4.0 %的葡萄糖溶液的體積比為12.5時，MVLs的包封率最優(yōu)，對其體外釋放行為研究發(fā)現(xiàn)，薺菜總黃酮在多囊脂質(zhì)體中具有一定的緩釋效應(yīng)，并受釋放介質(zhì)pH的影響。結(jié)論薺菜總黃酮多囊脂質(zhì)體具有一定的緩釋

2、效果。 【關(guān)鍵詞】 薺菜總黃酮；多囊脂質(zhì)體；釋放性能Abstract：ObjectiveTo prepare multivescular liposomes(MVLs) of total flavone in shepherds-purse(TFS) with high encapsulation efficiency and sustained-release. MethodsSingle factor was utilized to optimize extracting process. Concentration of total flavone was measured by the

3、 spectrophotometer, with rutin as standard sample, MVLs was prepared by multiple emulsion methods under different condition. Release of the TFS from the liposomes was studied in vitro. ResultsRatio of drug and material used affected encapsulation efficiency of MVLs, the same as EPCTOChol and first s

4、olution: 4% glucose. High encapsulation efficiency was gained, when the ratio was 1100, 721 and 12.5, respectively. ConclusionThe total flavone in shepherds-purse multivescular liposomes shows high encapsulation efficiency and sustained-release character.Key words：Total flavone shepherds-purse; Mult

5、ivescular liposomes; Sustained-release薺菜Capsella brusa-pastons L.屬十字花科，也稱春菜，一年生或三年生草本植物。薺菜總黃酮(Total Flavone in Shepherds-purse, TFS)用來治療高血壓病，其功效比同為黃酮類的蘆丁要好，且無毒性1，2。為了更好地利用薺菜的價值，將TFS長效制劑不失為一個極好的方法。脂質(zhì)體作為一種靶向藥物載體,具有類似細(xì)胞的結(jié)構(gòu),在體內(nèi)可以改變被包封藥物的體內(nèi)分布,并具有緩釋效果,從而減少藥物的劑量和降低藥物的毒性,提高藥物的治療指數(shù)。多囊脂質(zhì)體為脂質(zhì)體多囊顆粒(Multivesicul

6、ar Liposomes，MVLs)，這些囊泡被連續(xù)的非同心的類脂雙分子磷脂膜所分離，具有更多的包封容積和較大的粒徑，尤其當(dāng)某個囊泡破裂時，藥物只能從破裂的囊泡釋出，完整的囊泡仍然可以保持原狀，因而有很好的緩釋效應(yīng)3。本文研究了TFS的非同心多囊脂質(zhì)體制備方法,測定了包封率、粒徑分布及體外釋放性能等，以使其在體內(nèi)服用后緩釋作用,提高藥物療效，國內(nèi)外尚未見TFS多囊脂質(zhì)體的報道。1 器材UV-2100型分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司）；長風(fēng)牌恒溫水浴器（北京長風(fēng)儀器儀表有限公司）；JA1003A電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；5810R冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；WH-2

7、微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）；Waters-600型HPLC系統(tǒng)（美國Waters公司）；CJJ-1磁力攪拌器（常州國華電器有限公司）。薺菜（采自重慶中藥研究院苗圃）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）；95%乙醇為分析純，其他試劑均為化學(xué)純；卵磷脂(EPC)（四川英格爾生物工程限公司）；三油酸甘油酯(TO)（北京金龍化學(xué)試劑有限公司）；（美國Sigma試劑公司）；膽固醇(Chol)（上?；瘜W(xué)試劑公司）；其他試劑均為化學(xué)純。2 方法2.1 TFS的提取4,5稱取剛摘取的薺菜樣品10 g份于錐形瓶中，然后向瓶中各加入75%乙醇100 ml，再加入4%的NaOH醇溶液，于80恒溫水

8、浴中提取3次，將提取液合并濃縮，過預(yù)處理的AB-8大孔樹脂，70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，70水浴蒸干，得TFS。2.2 含量的測定精密稱取于120干燥后的無水蘆丁20 mg，用75%乙醇溶解于100 ml容量瓶中，定容得濃度為0.2 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。分別精確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)液加水配制成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05，0.06，0.08，0.10 mg/ml蘆丁溶液，在222 nm處分別測定吸收度，以吸光度對質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。2.3 MVLs的制備6MVLs的制備采用復(fù)乳法(multiple emulsion method, MEM)，按配方將一定質(zhì)量比的EPC，TO

9、和Chol溶解于15 ml的有機(jī)溶劑(氯仿和乙醚)，攪拌使磷脂完全溶解，形成油相，緩慢滴加溶有TFS(濃度為1 mg/ml)的葡萄糖5.0%(W/V)溶液，旋渦振蕩形成W/O型乳劑為“初乳”，取一定體積的“初乳”用注射器快速注入到含0.1%(V/V)的吐溫-80乳化劑的4.0%(W/V)的葡萄糖溶液，旋渦振蕩形成復(fù)乳，迅速將復(fù)乳轉(zhuǎn)移到250 ml的圓底燒瓶中，充入N2，控制溫度為35 ，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，既得MVLs懸浮液。2.4 MVLs包封率的測定7取制備的MVLs懸浮液1 ml，于Sephadex-50柱用Tris-HCl緩沖液洗脫，收集并測定游離的TFS含量，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)，計算T

10、FS的含量和MVLs的包封率，包封率(Encapsulation efficiency，EE)的計算公式為：EE(%)=M-mM100%其中 M：加入TFS的總質(zhì)量m：上清液中的TFS的質(zhì)量。2.5 MVLs處方與實驗條件的篩選按上述MVLs的制備方法，分別以藥材比(TFS與膜材的質(zhì)量比，1200，1100 和3200) 、EPCTOChol (質(zhì)量比，811，721和631)和初乳與4.0 %的葡萄糖溶液的體積比(11，12.5，14)為變量，以MVLs包封率為指標(biāo)進(jìn)行單因素考察實驗。2.6 釋放介質(zhì)的配制人工胃液 (Simulated Gastric Fluid，SGF，pH=1. 0的H

11、Cl溶液)：精確量取9.0 ml濃鹽酸于適量蒸餾水中，轉(zhuǎn)至1 000 ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度線。人工腸液 (Simulated Intestinal Fluid，SIF，pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液)：精確稱取NaCl 1.600 g和KH2PO4 6.800 g，用適量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)至1000 ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度線。生理溶液 (Simulated Body Fluid，SBF，0.9%的NaCl溶液)：精確稱取NaCl 9.000 g，于燒杯中用適量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移至1 000 ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度線。3 結(jié)果與討論3.1 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量濃度分別為0.

12、01，0.02，0.03，0.04，0.05，0.06，0.08，0.10 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液用分光光度計法檢測，以吸光度對蘆丁的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，結(jié)果如圖1所示，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，表明在0.010.10 mg/ml有良好的線性關(guān)系。3.2 各因素對MVLs包封率的影響3.2.1 藥材比在MVLs的制備過程中，當(dāng)其它條件不變時，改變TFS與膜材的質(zhì)量比，復(fù)乳法制備，分離出MVLs并測定MVLs的包封率，結(jié)果如圖2所示，由圖2可看出，隨著包封藥物所占比例的增大，MVLs的包封率也不斷增大，當(dāng)藥材比為1100時，MVLs的包封率為33.06%，3200時，MVLs的包封率增大為3

13、5.14%，但總體趨勢來看，隨著包封藥物所占比例的增大，包封率變化趨勢不明顯，綜合考慮，TFS與膜材的質(zhì)量比為1100時最合適。3.2.2 磷脂比在MVLs的制備過程中，當(dāng)其它條件不變時，改變EPCTO的質(zhì)量比，復(fù)乳法制備，分離出MVLs并測定MVLs的包封率，結(jié)果如圖3所示，由圖3可看出，隨著TO的比例增大，TFS在MVLs的包封率先增大，然后減少，當(dāng)EPCTOChol為721時，TFS在MVLs的包封率最高，為36.55%，因此，EPCTOChol為721是最佳比例。3.2.3 初乳與4.0 %的葡萄糖溶液的體積比在MVLs的制備過程中，當(dāng)其它條件不變時，改變初乳與4.0 %的葡萄糖溶液的

14、體積比，采用復(fù)乳法制備，分離出MVLs并測定MVLs的包封率，結(jié)果如圖4所示，由圖4可看出，MVLs的包封率先升后降，初乳與4.0 %的葡萄糖的體積比為12.5時，TFS在MVLs的包封率最高。因此，初乳與4.0 %的葡萄糖的體積比為12.5為最佳比例。3.3 TFS不同介質(zhì)中的釋放行為圖5為TFS在不同的釋放介質(zhì)中的釋放行為，結(jié)果表明，TFS在MVLs中具有一定的緩釋效應(yīng)，pH值不同，釋放速率不同，TFS在pH=1.0的SGF溶液中的釋放速率最慢， pH分別為7.0，7.4的SBF和SIF釋放介質(zhì)中速率次之。說明TFS在MVLs中的釋放行為受pH值的影響。4 結(jié)論實驗表明：MVLs的制備采用

15、復(fù)乳法，質(zhì)量比為EPCTOChol=721的膜材，溶解于15 ml的有機(jī)溶劑中，攪拌使磷脂完全溶解，形成油相，緩慢滴加溶有TFS(濃度為1 mg/ml)的葡萄糖5.0%(W/V)溶液，旋渦振蕩形成W/O型乳劑為“初乳”，取的“初乳”用注射器快速注入到2.5倍體積的含0.1%(V/V)的吐溫-80乳化劑的4.0%(W/V)的葡萄糖溶液，旋渦振蕩形成復(fù)乳，迅速將復(fù)乳轉(zhuǎn)移到250 ml的平底錐形瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，用氮氣吹除有機(jī)溶劑，既得的MVLs包封率最佳。對其體外釋放行為研究發(fā)現(xiàn)，TFS在MVLs中具有一定的緩釋效應(yīng)，并受釋放介質(zhì)pH的影響?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1盧 勝,蘇濃,王桂澤.營養(yǎng)保健型佳蔬薺菜J.中國食物與營養(yǎng), 2004(7): 53.2程愛芳.薺菜的營養(yǎng)價值及藥用價值J. 蔬菜, 2004(6):36.3肖超菊,齊憲榮,艾尼瓦爾,等. 順鉑緩釋多囊脂質(zhì)體的制備和體外釋放性能研究J. 藥學(xué)學(xué)報, 2003, 38(2): 133.4劉火安, 戴傳云, 王伯初. 薺菜總黃酮的分離純化研究J. 時珍國醫(yī)國藥, 20