蛋白質(zhì)定量試劑盒-超敏型BCA法

1、 技術(shù)咨詢電話：400-607-9999蛋白質(zhì)定量試劑盒-超敏型BCA法Micro BCA Protein Assay Kit貨號(hào)：P040004產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是在BCA 法蛋白定量試劑盒基礎(chǔ)上改進(jìn)的超敏蛋白定量試劑盒，尤其適合對(duì)低濃度的蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行定量分析。它具有下列特點(diǎn)。1. 超敏感，最低檢測濃度為 0.5 ug/mL。2. 線性范圍在 0.520 g/mL，尤其適用于低濃度的樣品。3. 對(duì)大多數(shù)離子型和非離子型去污劑不敏感，但對(duì) Cu 的還原劑和螯合劑敏感。4. 比 Lowry 法更加簡單快捷，45 分鐘內(nèi)完成測定。5. 試劑穩(wěn)定，室溫可以放置兩年，工作液 1 天內(nèi)有效。6. 終產(chǎn)物

2、穩(wěn)定，檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。7. 最短可以檢測雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質(zhì)，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質(zhì)。8. 有常規(guī)（普通試管）和微量（96 孔板）兩種檢測模式。規(guī)格及成分成份 500次包裝溶液 A 250 mL 溶液 B 250 mL 溶液 C 10 mL BSA標(biāo)準(zhǔn)品（2 mg/mL） 1 mL×4使用手冊(cè) 1份運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存（但BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要-20保存），有效期一年。使用方法一：96 板操作模式1、取一塊 96 孔板，先進(jìn)行編號(hào)（編號(hào)可以根據(jù)樣品數(shù)增加），并按照下表加入BSA 標(biāo)準(zhǔn)，待測樣品和溶解待測樣品

3、的緩沖液（將BSA 稀釋到0.04ug/uL）：編號(hào)BSA 標(biāo)準(zhǔn)（0.04 ug/uL）（uL）待測樣品（uL）樣品緩沖液（uL）總體積（uL）蛋白含量（ug）00015015001501451500.221001401500.432001301500.844001101501.65600901502.46800701503.271000501504.01 號(hào)樣品0？uL補(bǔ)到150150未知N號(hào)樣品0？uL補(bǔ)到150150未知2、計(jì)算 BCA 工作液需要量：根據(jù)樣品數(shù)量（包括制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品的數(shù)量）和每個(gè)樣品需要0.15 mL BCA 工作液的比例，計(jì)算所需BCA 工作液的用量。3、配制 B

4、CA 工作液：先將溶液A、溶液B 和溶液C 按50：48：2 的比例混合，所得溶液即BCA 工作液。比如：5 ml 溶液A + 4.8 mL 溶液B +200uL 溶液C。4、將 1 倍體積（即150 uL）的BCA 工作液加入到各孔中并混勻。如果用排槍加入并混勻則更好。也可把96 孔板放在振蕩器上振蕩30 秒混勻。5、60放置 1 小時(shí)。6、冷至室溫，10 分鐘內(nèi)完成后續(xù)測定，否則化學(xué)反應(yīng)還在繼續(xù)進(jìn)行，光吸收值會(huì)慢慢升高，每10 分鐘會(huì)升高2.5%左右。7、在 562 nm 下比色測定其余樣品的光吸收。如酶標(biāo)儀沒有562 nm 的設(shè)定，可用接近的波長檢測，如570 nm。8、將編號(hào)為 0 號(hào)

5、的樣品（對(duì)照）的讀數(shù)從其余所有樣品（包括0 號(hào)樣品，其讀數(shù)變成零）中扣除。9、以 0-7 號(hào)樣品的BSA 含量（ug，見上表最右行）為橫坐標(biāo)，以上一步得到的這幾個(gè)樣品的吸光值為縱坐標(biāo)，繪出BSA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線。10、再將待測樣品的吸光值（減去0 號(hào)樣品的讀數(shù)后）標(biāo)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，其在橫坐標(biāo)上對(duì)應(yīng)的蛋白含量（ug）就是待測樣品中的蛋白質(zhì)含量，除以樣品稀釋液總體積（20 uL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位：ug/uL）。二：試管測定模式1、基本操作同上，只是操作改在編號(hào)的玻璃試管中進(jìn)行，同時(shí) BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的使用量從低到高改為0、25、50、100、200、300、400、500 uL，樣

6、品的總體積從200 uL 改為1 mL，BCA 工作液的用量從0.15 mL 改為1 mL。三：注意事項(xiàng)1、加工作液后也可以在室溫放置 2 小時(shí)，或60放置30 分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。所以，如果蛋白質(zhì)濃度較低，可以改在60孵育60 分鐘。2、待測樣品濃度在 202000 微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。3、在一定濃度范圍內(nèi) BCA 法測定蛋白濃度不受下列化學(xué)物質(zhì)的影響：名稱 在此濃度下不受影響 Ammonium Sulfate 1.5 M Brij-35 5.0% CHAPS 5.0% EDTA 10 mM Hepes 100 mM Glycine, pH 2.8 100 mM Guanidine HCl 4.0 M Tween 20、60、 80 5.0% SDS 5.0% Sodium Acetate pH 5.5 200 mM Sodium Chloride (NaCl) 1.0 M Sucrose 40% Sodium Hydroxide (NaOH) 0.1 M NP-40 5.0% Triton X-100 5.0% Urea 3.0 M 4、本方法受樣品中螯合劑和還原劑的影響，所以需確保EDTA 濃度不高于10mM，二硫蘇糖醇不高于1m