茶皂素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究

1、茶皂素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究         09-10-27 16:18:00     作者：李忠 李玉山    編輯：studa090420【摘要】目的  觀察茶皂素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法  采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，以茶皂素灌胃給藥，觀測(cè)其對(duì)腦缺血大鼠的神經(jīng)行為、腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶 (NOS)活性及一氧化氮(NO)、活性氧 (R

2、OS)、丙二醛 (MDA)含量的影響。結(jié)果  茶皂素能明顯改善腦缺血大鼠的神經(jīng)行為，拮抗腦缺血再灌注引起的SOD活力的下降及ROS、MDA含量的升高，并使腦缺血大鼠的腦組織中NO及NOS水平明顯下降。結(jié)論  茶皂素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷具有很好的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】茶皂素  局灶性腦缺血  自由基  一氧化氮【Abstract】Objective:To observe the protective effect of tea saponin on Focal cerebral ischemia-reperfusion injury.Met

3、hods: Make focal cerebral ischemia-reperfusion model of rat by suture, delivery tea saponin by Ig.To observe the influence of tea saponin to neurobehavioral and brain superoxide dismutase (SOD), nitric oxide synthase (NOS) activity and nitric oxide (NO), reactive oxygen species (ROS), malondialdehyd

4、e (MDA) content in cerebral ischemia rats. Results:Tea saponin can improve neurobehavioral in cerebral ischemia rats obvious -ly and antagonist cerebral ischemia-reperfusion-induced decline in SOD vitality and ROS, MDA content increased and make the levels of NO and NOS decreased obviously in brain

5、tissue of cerebral ischemia rat.Conclusion:Tea saponin can protect the rats with focal cerebral ischemia-reperfusion injury very well.【Keywords】 Tea saponin   Focal cerebral ischemia   Free radicals   Nitric oxide        茶皂素(Tea saponi

6、n：TS)是從茶樹中提取的一種五環(huán)三萜類植物皂甙，由配基、糖體和有機(jī)酸三部分組成，存在于茶籽、茶葉、茶根等各個(gè)部分，具有多種生物活性。據(jù)報(bào)道1，茶皂素有明顯抗炎、抗?jié)B透、抗菌、化痰、止咳、鎮(zhèn)痛等作用，而且有防止高血壓、高血糖及化痰止咳的作用。目前，對(duì)茶皂素關(guān)于腦缺血再灌注損傷的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)旨在建立動(dòng)物腦缺血再灌注模型，觀察茶皂素對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。        1 材料         1.1茶皂素的制備23 挖取5年以上樹齡

7、的茶樹根，洗凈，切片，烘干，粉碎成粗粉，按料液比l：4加80%乙醇進(jìn)行超聲波法提取。工藝參數(shù)：超聲波頻率為20kHz，提取時(shí)間為20min，提取溶液溫度為50。所得提取液經(jīng)大孔吸附樹脂層析、乙醇洗脫、脫色劑處理后，濃縮烘干，得到茶皂素。產(chǎn)品接近白色，純度達(dá)92.8%-93.1%。在空氣中放置不吸潮、不變色。        1.2試劑與儀器  R0S、SOD、MDA、NO、NOS及考馬斯亮藍(lán)試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品：SC-302超聲波清洗儀（上海波龍?jiān)O(shè)備有限公司），TGL-16型高速臺(tái)式離心機(jī)(上海醫(yī)用分

8、析儀器廠生產(chǎn))，722-型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))。        1.3動(dòng)物 SD大鼠60只，雌雄各半，重250300 g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。         2 方法         2.1大鼠局灶性腦缺血模型的制備(MCAO法)4  SD大鼠共60只，分2批，第1批用于觀察神經(jīng)行為；第2批用于觀察腦組織SOD、NOS活力及ROS、MDA和NO含量

9、的變化。每批分為3組，即假手術(shù)組、模型組和茶皂素組，每組10只。各組動(dòng)物均于手術(shù)前灌胃給藥3d，每天1次，其中茶皂素組給予茶皂素 (0.5g/kg.bw)，假手術(shù)組及模型組均灌胃給予等體積的生理鹽水。第3天給藥后20min，采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞 (MCAO)模型。將大鼠用20%的烏拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，暫時(shí)夾閉頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈分叉下方剪一切口，將一預(yù)先用酒精燈燒成圓頭的尼龍線 (直徑為 0.26mm)插入頸內(nèi)動(dòng)脈至大腦中動(dòng)脈起始端，進(jìn)線深度距頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈分叉處1820 rnm左

10、右可感到阻力，阻斷右側(cè)大腦中動(dòng)脈血流。2h后抽出尼龍線，扎緊動(dòng)脈殘端，縫合皮膚，予以再灌注24h。假手術(shù)組大鼠麻醉后，僅暴露頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉，不閉塞MCA。         2.2神經(jīng)病學(xué)評(píng)分 第1批大鼠采用5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)5，分別于缺血再灌注后3h、6h、12h、24h進(jìn)行評(píng)分。0分=無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；分=不能完全伸展對(duì)側(cè)前肢；2分=向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分=向?qū)?cè)傾倒；4分=不能獨(dú)自行走，意識(shí)喪失。         2.3生化指標(biāo)的測(cè)定 第2批大鼠再灌注24h后，處

11、死大鼠，迅速取腦稱重。用生理鹽水制成10腦組織勻漿液，低溫離心，取上清液，按試劑盒說(shuō)明書分別測(cè)定大腦組織中SOD、ROS、MDA及NO、NOS含量。按考馬斯亮藍(lán)法標(biāo)定蛋白含量。         2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS  FOR WINDOWS 100軟件進(jìn)行 t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。         3 結(jié) 果         3.1茶皂素對(duì)局灶性腦缺血大

12、鼠神經(jīng)功能的影響  造模后，連續(xù)觀察3h、6h、12h、24h，進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分。與假手術(shù)組比較，各造模組在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損(P0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且茶皂素組不同時(shí)段的積分均低于模型組，在缺血再灌注3h、6h、12h茶皂素組評(píng)分降低明顯(P0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。         3.2茶皂素對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織ROS、MDA、SOD的影響  MCAO大鼠腦組織中SOD活性較假手術(shù)組明顯減少，ROS、MDA含量明顯增加 (P<0.05)；與模型組比較，茶皂素組能

13、不同程度的改善腦損傷，抑制腦組織ROS、MDA的產(chǎn)生，提高SOD活性，差異顯著(P<0.05)。         3.3茶皂素對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織NO、NOS的影響  MCAO大鼠腦組織中NO含量及NOS活性較假手術(shù)組明顯增加；與模型組比較，茶皂素組能不同程度的改善腦損傷，抑制腦組織NOS的活性，減少NO的含量。     09-10-27 16:18:00     作者：李忠 李玉山   

14、0;編輯：studa090420        4 討論         缺血性腦血管疾病是臨床的常見病和多發(fā)病。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血再灌注損傷與NO、氧自由基等有關(guān)。腦內(nèi)NO的作用是雙重性的，其既有腦保護(hù)作用，又有神經(jīng)毒性作用6。低濃度NO由于能擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集與粘附，可使谷氨酸調(diào)控的離子通道下調(diào)，防止細(xì)胞內(nèi)鈣超載，因而對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用；但在高濃度下，NO對(duì)細(xì)胞有損傷作用7。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，大鼠在腦缺血再灌注24h時(shí)，腦組織NO含量及NOS活

15、性均明顯升高，而茶皂素能明顯降低腦缺血再灌注大鼠腩組織NO含量和NOS活性，表明茶皂素對(duì)大鼠腦缺血再灌注有保護(hù)作用。        自由基能夠攻擊腦細(xì)胞膜的不飽和脂肪酸，使之發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受到破壞，使膜的通透性增加，從而導(dǎo)致組織水腫、壞死，細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。茶皂素可明顯提高M(jìn)CAO大鼠腦組織中SOD活性，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物ROS、MDA的生成，表現(xiàn)其抗氧化特性，對(duì)保護(hù)細(xì)胞膜免受自由基的損害起著積極作用。本實(shí)驗(yàn)在局灶性腦缺血再灌注模型上進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，茶皂素能有效的改善 MCAO大鼠再灌注后3h、6h、1

16、2h、24h出現(xiàn)的行為功能障礙及神經(jīng)功能缺損，提高肌張力。        因此，我們認(rèn)為茶皂素對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用可能與其顯著的抗組織自由基損傷及抗NO神經(jīng)毒作用有關(guān)。 參 考 文 獻(xiàn)1 張星海，楊賢強(qiáng)茶皂素性質(zhì)及應(yīng)用研究近況J福建茶葉，2003,22 劉昌盛，黃鳳洪，夏伏建，等超聲波法提取茶皂素的工藝研究J中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2006,28(2):203-2063 唐明遠(yuǎn)，盧向陽(yáng)，屈姝存，等茶皂素制備新工藝J湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000, 2, 26(1):66.4 馮亦璞，閏超華腦缺血實(shí)驗(yàn)見：張均田主編現(xiàn)代藥理空驗(yàn)方法(下冊(cè))5 Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et a1Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in ratsJStroke，1989；20(