實(shí)驗(yàn)一 酵母菌株的篩選分離

1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.通過酒母中酵母的篩選實(shí)驗(yàn)，熟悉微生物分離純化、接種微生物操作實(shí)驗(yàn)；2.熟悉產(chǎn)酒精酵母的TTC顯色平板等性能篩選實(shí)驗(yàn)；2、 實(shí)驗(yàn)材料與儀器：培養(yǎng)基：YPD培養(yǎng)基、MEB、TTC顯色培養(yǎng)基；酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%呂氏堿性美藍(lán)儀器：滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)箱；移液管、涂布棒，接種環(huán)，平板、三角瓶、試管（15*150mm）、硅膠塞、杜氏小倒管、紗布、報(bào)紙；3、 實(shí)驗(yàn)步驟：1.1 培養(yǎng)基的配制YPDS固體培養(yǎng)基（1L）：稱取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水當(dāng)中，分裝到三角瓶中后加入2%瓊脂粉，115滅菌20min；注：為抑制霉菌菌絲的生長(zhǎng)?？稍?/p>

2、培養(yǎng)基中加入0.5%-1%的脫氧膽酸鈉。YPD液體培養(yǎng)基（1L）：按YPDS配方配制，不加瓊脂，121滅菌20min；TTC顯色培養(yǎng)基：每100mlYPDS培養(yǎng)基中加入0.05g的TTC；1.2 酵母的分離純化：1.2.1 梯度稀釋 將酒樣混勻后取1ml加入到9ml的無菌水中制成10-1濃度梯度，之后從中取出1ml再加入到9ml的無菌水當(dāng)中，濃度梯度為10-2，依次往下推，分別制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀釋度的菌液；1.2.2 涂布 將稀釋得到的10-2,10-3,10-4三個(gè)梯度的菌液取0.5 ml到預(yù)先倒好的TTC顯色培養(yǎng)基平板中，沿一個(gè)方向均勻的進(jìn)行涂布，然后將涂布好

3、的平板用報(bào)紙包好避光培養(yǎng)，倒置于恒溫厭氧培養(yǎng)箱中28培養(yǎng)2-3d。1.3 酵母的保藏將劃線純化后的酵母菌株接種在YPDS斜面試管上，用記號(hào)筆寫上將接種的菌名、日期和接種者，28培養(yǎng)1-2d，培養(yǎng)好后放置于4冰箱保存；四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、 對(duì)實(shí)驗(yàn)過程中所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行拍照；注：左上圖濃度梯度10-2，右上圖濃度梯度10-3 左下圖濃度梯度10-4，右下圖為酵母菌株接種在YPDS斜面試管2、 記錄所篩選到酵母菌株的顏色分級(jí)并進(jìn)行編號(hào)； 酵母菌株的顏色隨濃度梯度增加而變深，如顏色深：10-210-310-4五、思考題1、涂布之前稀釋的目的？答：稀釋涂布平板的目的是降低菌的濃度.濃度過高的菌會(huì)在培養(yǎng)基上長(zhǎng)出過多的菌落,以至于沒法挑出單菌落,那樣就無法獲得單一種類的菌,或者無法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)來計(jì)算菌液濃度了.2、 如何獲得純化的微生物菌株？答：1）劃線分離法2）稀釋分離法3）組織分離法3、 酵母菌TTC篩選的原理是什么？答：TTC（2，3，5一氯化苯基四氮哇）是一種顯示劑。它對(duì)酵母的代謝產(chǎn)物發(fā)生呈色反應(yīng)，通過它可以判斷酵母中呼吸酶活力的大小，即酵母產(chǎn)酒精能力的高低