分光光度法定量測(cè)定食品中硼砂

1、分光光度法定量測(cè)定食品中硼砂硼砂屬于有毒有害物質(zhì)，是食品禁用防腐劑。而一些不法生產(chǎn)商為增加食物韌性、脆度、改善食物保水性及保鮮度等，常在一些食物制品中如腐竹、牛肉丸、米粉、河粉、面條等作為膨松劑、防腐劑使用。目前國家食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中沒有硼砂定量檢驗(yàn)方法，曾有食品中硼砂的反相高效液相色譜測(cè)定方法等，但液相色譜法儀器昂貴，不易普及1。本法利用灰化-姜黃素分光光度法測(cè)定食品中硼砂含量，為建立食品中硼砂的定量分析方法提供科學(xué)依據(jù)。資料與方法原理：在酸性溶液中硼砂轉(zhuǎn)化為硼酸，與姜黃素生成紅色化合物（稱為玫瑰紅花青），分光光度法比色定量。儀器：723型分光光度計(jì)；馬弗爐；恒溫水浴鍋（55±2C）;

2、恒溫干燥箱；可調(diào)電熱板。試劑：姜黃素-草酸溶液：稱取0.04g姜黃素和5.0g草酸，溶于95%乙醇稀釋至100ml，如果試劑渾濁，應(yīng)過濾儲(chǔ)存于聚乙烯塑料瓶中，保存于冰箱中；95%乙醇溶液；碳酸鈉溶液（40g/L）；硼酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（600.0mg/L）：稱取0.3000g干燥無水硼酸溶于純水，并定容至500ml,儲(chǔ)存于聚乙烯塑料瓶中，此溶液每毫升相當(dāng)于600.0Pg硼酸；硼酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（6.0mg/L）:吸取10.00ml硼酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于1000ml聚乙烯塑料瓶中，加水方法：樣品預(yù)處理：在采樣和制備過程中，應(yīng)注意不使試樣污染；面條、米粉、米皮、肉丸等水分含量較高的樣品，用食品勻漿機(jī)打成勻漿

3、，儲(chǔ)存于聚乙烯塑料瓶中，保存?zhèn)溆?。樣品消解：稱取樣品3?5g于瓷坩堝中，加入40g/L碳酸鈉溶液4?5ml，若試樣為酸性，繼續(xù)加入碳酸鈉溶液至堿性，置于水浴鍋上蒸干，將瓷坩堝置于電熱板上炭化至無煙后，再置入馬弗爐中，升溫至600C灰化6?8小時(shí)，冷卻。如試樣灰化不徹底，再加入碳酸鈉溶液1ml繼續(xù)進(jìn)行灰化直至灰化完全，冷卻至室溫。加入少量水和10%HCl5ml攪拌使殘?jiān)芙?，移?00ml聚乙烯塑料容量瓶中定容。測(cè)定：吸取1.00ml樣液，再分別吸取0.00,0.25,0.50,0.75,100ml硼酸標(biāo)準(zhǔn)使用液于同一類型、同一形狀和大小的瓷蒸發(fā)皿上，各加純水至1.00ml。分別向盛有樣液和標(biāo)準(zhǔn)

4、溶液的蒸發(fā)皿中各加入1.00ml姜黃素-草酸溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)皿使之混合均勻。置蒸發(fā)皿于55C恒溫水浴鍋上，蒸干后立即取出移至60C恒溫干燥箱中繼續(xù)維持20分鐘，取出置于干燥器中冷卻。用95%乙醇溶解蒸發(fā)皿內(nèi)固體物，并完全移入25ml聚乙烯塑料塑料比色管內(nèi)，用95%乙醇溶液定容至25ml，混勻，用1cm比色皿，以零管調(diào)零，于550nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，同時(shí)做試劑空白。計(jì)算：X=1.54mV1/MV2式中：X-樣品中硼砂含量（mg/kg）;m-從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得樣品中硼酸的含量（Pg）；M-樣品質(zhì)量（g）;V1-樣品定容量（ml）；V2-樣品測(cè)定量（ml）;1.54-硼酸與硼砂轉(zhuǎn)

5、換系數(shù)。結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)的選擇：按試驗(yàn)操作方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品進(jìn)行顯色反應(yīng)后分別作吸收曲線，兩者均在550mn波長(zhǎng)處有最大吸收峰，故選擇550mn為測(cè)定波長(zhǎng)。脫水溫度的選擇：按試驗(yàn)操作方法用含有3.0、4.0、5.0Pg硼酸標(biāo)準(zhǔn)分別在30C、40C、50C、60C、70C脫水并與顯色劑反應(yīng)，測(cè)定溶液吸光度，在50?60C時(shí)反應(yīng)的吸光度穩(wěn)定，故選擇在55C水浴上蒸干和60C干燥箱內(nèi)脫水。線性范圍：試驗(yàn)表明，本方法在0?6.0Pg范圍內(nèi)有良好的的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.9995。最低檢出濃度：本法最低檢出濃度1.56mg/kg。回收率試驗(yàn)，見表1。精密度試驗(yàn)，見表2。討論實(shí)驗(yàn)器皿的影響實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量避免使用玻璃器皿，防止玻璃中硼溶出而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可采用聚四氟乙烯、聚乙烯、粕金等材料的器皿。樣品灰化的影響樣品進(jìn)行灰化前必須確保檢樣為堿性，防止硼砂轉(zhuǎn)化為硼酸在高溫條件下與水蒸氣一同蒸發(fā)，影響結(jié)果的準(zhǔn)確度。本法采用40g/L碳酸鈉溶液堿化樣品，取得了滿意的效果。測(cè)定波長(zhǎng)的選擇有文獻(xiàn)報(bào)道540mn2，本試驗(yàn)操作方法表明標(biāo)準(zhǔn)和樣品在550mn波長(zhǎng)處有最大吸收峰，且吸光度較穩(wěn)定，故選擇550mn為測(cè)定波長(zhǎng)。測(cè)定時(shí)比色速度的影響由于本法反應(yīng)后用95%乙醇溶液溶解和定容的，因此在比色過程中應(yīng)盡量提高比色速度，防止測(cè)定過程中乙醇揮發(fā)損失，提高實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。本法