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1、v目的要求v實驗原理v實驗用品v方法與步驟v實驗報告 掌握小鼠骨髓細胞染色體的制備方法,識別小鼠染色體的數(shù)目及特點。v骨髓細胞具有高度的分裂活性,經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后,使分裂細胞阻斷在有絲分裂中期,再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟,可制作較好的骨髓細胞的染色體標本。1器材:解剖器具、注射器、離心機、離心管、恒溫水浴箱、載玻片、酒精燈等;2試劑 0.1%秋水仙素溶液、Carnoys固定液(甲醇:冰醋酸3:1)、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 3材料:小鼠方法與步驟v取材前34 h,向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂
2、細胞阻斷在有絲分裂中期,增加中期分裂相的比例。 腹腔內(nèi)注射秋水仙素34小時后,斷頭處死小鼠。取出小鼠的后肢骨,注意不要將股骨剪斷,否則容易造成骨髓細胞的流失。滴加適量生理鹽水進行沖洗,并仔細地將皮膚、肌肉等組織清除干凈。加入適量低滲液,用剪刀將骨充分剪碎,并用吸管吹打,使骨髓細胞全部釋放出來。用濾網(wǎng)將獲得的液體過濾到離心管中,加低滲液至8ml左右,室溫下靜置2030分鐘,進行低滲。低滲結(jié)束后,加入1ml左右的Carnoys固定液進行預(yù)固定,輕輕混勻后,離心。1200轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,棄上清,加入固定液,混勻后,室溫放置30分鐘,再次離心去上清,重復(fù)固定一次,離心后,向沉淀中加入1ml預(yù)冷的固定液,將細胞重懸。預(yù)冷的玻片預(yù)冷的玻片v繪圖表示動物
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