側(cè)孢短芽孢桿菌的應(yīng)用研究進(jìn)展

1、側(cè)孢短芽孢桿菌的應(yīng)用研究進(jìn)展 摘要：側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）具有殺蟲、抗菌、抗腫瘤、生物降解轉(zhuǎn)化等多種生物學(xué)活性，在生物防治、環(huán)境保護(hù)、醫(yī)學(xué)、微生物菌劑開發(fā)等諸多方面顯示了巨大的應(yīng)用價值和潛力。本文綜述了側(cè)孢短芽孢桿菌自被發(fā)現(xiàn)以來的主要研究成果及相應(yīng)研究方法，重點關(guān)注了側(cè)孢短芽孢桿菌在生產(chǎn)上具體應(yīng)用的進(jìn)展?fàn)顩r，部分內(nèi)容系國內(nèi)首次提及。同時，還指出了在側(cè)孢短芽孢桿菌應(yīng)用中存在的問題，并對其未來的研發(fā)和應(yīng)用進(jìn)行了展望。 關(guān)鍵詞：側(cè)孢短芽孢桿菌；生物學(xué)活性；生物防治；微生物菌劑 中圖分類號：S182文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2015）0

2、2-0149-08 AbstractBrevibacillus laterosporus possesses various biological activities， such as insecticidal activity， antimicrobial effect， antitumor function， biodegradation as well as biotransformation，so it shows great application value and potential in fields of biological control， environmental

3、protection， medicine and microbial agents development. In this article， the main research results and relevant study methods were summarized since B. laterosporus was found. And the progress of its specific application in production was focused. Some were first mentioned in domestic. In addition， th

4、e existing problems in application of B. laterosporus were pointed out， and the future development and application were prospected. Key wordsBrevibacillus laterosporus； Biological activity； Biocontrol； Microbial agent 側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）在分類學(xué)中屬細(xì)胞生物（Cellular organisms）、細(xì)菌域（Bacteria）、厚壁

5、菌門（Firmicutes）、芽孢桿菌綱（Bacilli）、芽孢桿菌目（Bacillales）、類芽孢桿菌科（Paenibacillaceae）、短芽孢桿菌屬（Brevibacillus）。在自然界中分布較廣，在土壤、火山泥流、淡水、海水、昆蟲體內(nèi)、葉表、槐豆、堆肥、牛奶、奶酪、蜂蜜、淀粉類食物、膠制品工廠廢水、動物皮毛和鵪鶉等材料中均已分離到。20世紀(jì)初，White1研究歐洲幼蟲腐臭病的致病菌時，在其繼發(fā)性感染源中，分離到側(cè)孢短芽孢桿菌，至此人們開始關(guān)注它與昆蟲之間的關(guān)系。1916年Laubach2從淡水中分離到一個新種，把它命名為Bacillus laterosporus，并對它的形態(tài)及生

6、理生化特性進(jìn)行了詳細(xì)描述。1996年Shida等3根據(jù)16S rRNA序列分析及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，按近代生物分類學(xué)把側(cè)孢短芽孢桿菌定位為包含短短芽孢桿菌在內(nèi)的新屬短芽孢桿菌屬。Ruiu4從形態(tài)特征、對無脊椎動物的殺傷作用、抗菌作用以及其他性能等諸多方面回顧了側(cè)孢短芽孢桿菌的研究歷史。本文將國內(nèi)外對側(cè)孢短芽孢桿菌的主要研究和突破性進(jìn)展進(jìn)行了較為全面的綜述，對側(cè)孢短芽孢桿菌從早期發(fā)現(xiàn)到目前在生產(chǎn)上的應(yīng)用概況進(jìn)行了系統(tǒng)總結(jié)。 1側(cè)孢短芽孢桿菌的形態(tài)學(xué)特征 側(cè)孢短芽孢桿菌是一種桿狀的、產(chǎn)內(nèi)生孢子的兼性厭氧細(xì)菌，能夠產(chǎn)生其特有的獨木舟狀伴孢體（CSPB），緊緊地依附于芽孢一側(cè)，從而使其芽孢側(cè)生，用甲苯胺藍(lán)

7、或結(jié)晶紫染料可使其著色5。側(cè)孢短芽孢桿菌細(xì)胞大小約為 （0.50.8）m×（2.55.0）m，生長溫度范圍1545，適宜pH值范圍69。一直以來，側(cè)孢短芽孢桿菌特殊的形態(tài)學(xué)特征引起了眾多科研人員的關(guān)注。在20世紀(jì)中期，Hannay6利用光學(xué)和電子顯微鏡觀察到了固定的、芽孢內(nèi)嵌式的細(xì)胞和芽孢，并得出了如下結(jié)論：伴孢體形成于芽孢形成之前，并在芽孢形成之后一直附著于芽孢的一側(cè)，它是芽孢的一部分。對于伴孢體的功能，人們提出了各種假設(shè)，伴孢體可能有助于芽孢萌發(fā)，它們或是附屬的壁，又或是芽孢壁的變形等。然而，到目前為止還不能確定其特殊功能。1958年Fitz-James等7發(fā)明了一種從芽孢原生質(zhì)

8、體中分離獨木舟狀芽孢體的方法，并分析了這種結(jié)構(gòu)的化學(xué)組成。除了獨木舟狀的伴孢體，1990年Montaldi等8在芽孢囊內(nèi)還發(fā)現(xiàn)了有棱角的球狀伴孢體和有交叉平行帶條紋的伴孢體。這些結(jié)構(gòu)的功能還不清楚，但之后人們發(fā)現(xiàn)側(cè)孢短芽孢桿菌不同形狀和大小的伴孢體與殺雙翅目昆蟲活性有關(guān)。 2側(cè)孢短芽孢桿菌的生物學(xué)活性 側(cè)孢短芽孢桿菌是既能抗菌殺蟲又有醫(yī)用價值的微生物資源。早期研究主要集中在殺蟲活性上，國外研究較多，已有生物殺蟲劑成品上市。近年來，人們越來越關(guān)注關(guān)于側(cè)孢短芽孢桿菌能夠產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)的特性。 側(cè)孢短芽孢桿菌具有多種生物活性，且表現(xiàn)出廣譜抗菌活性，尤其是對細(xì)菌和真菌。近期的全基因組測序結(jié)果表明，側(cè)

9、孢短芽孢桿菌還具有產(chǎn)生聚酮化合物、非核糖體肽和毒素等物質(zhì)的潛力9，10。它還能夠產(chǎn)生氨基肽酶抑制劑、戊二?；?-ACA酰基轉(zhuǎn)移酶、凝血酶抑制劑、賴氨酸等活性物質(zhì)，顯示了良好的應(yīng)用前景。此外，側(cè)孢短芽孢桿菌也是哺乳動物和鳥類的益生菌11，它所產(chǎn)生的特有抗生素已應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。 2.1側(cè)孢短芽孢桿菌的殺蟲活性 對于側(cè)孢短芽孢桿菌殺蟲活性的研究比較多。研究證明，多種側(cè)孢短芽孢桿菌對不同的無脊椎動物如昆蟲、線蟲和軟體動物都具有致病性12。其殺蟲活性主要是由于伴孢體中所含蛋白質(zhì)對多種昆蟲具有毒性作用，接觸或入侵靶標(biāo)后，在細(xì)胞生長周期不同階段產(chǎn)生不同物質(zhì)，從而起到毒性作用。研究人員對一些特定的毒素蛋白及其

10、作用方式已進(jìn)行了探究，但還有許多問題需要進(jìn)一步的分析和闡明。 2.1.1殺昆蟲作用早期研究發(fā)現(xiàn)，有些側(cè)孢短芽孢桿菌菌株對馬鈴薯甲蟲和煙草甲幼蟲有毒性作用13。Du Rand等14研究發(fā)現(xiàn)，一株側(cè)孢短芽孢桿菌與相同生物量的蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）相比，對黃粉蟲幼蟲的毒性更高，并確定其半致死濃度為3.388×106芽孢/mL。Boets等15發(fā)現(xiàn)，側(cè)孢短芽孢桿菌分泌的毒素具有蛋白質(zhì)特征，把新型殺蟲分泌蛋白命名為ISP1A和ISP2A，并確定了其DNA編碼序列。只有當(dāng)主要的殺蟲分泌蛋白和互補殺蟲分泌蛋白同時被昆蟲攝入體內(nèi)時，才表現(xiàn)出毒性，而當(dāng)單獨攝入一

11、種殺蟲蛋白時則沒有毒性。不同側(cè)孢短芽孢桿菌菌株之間的差異導(dǎo)致其對鱗翅目昆蟲的抗性作用存在爭議。側(cè)孢短芽孢桿菌菌株對大豆夜蛾表現(xiàn)出不同的毒性水平，而同樣的菌株對草地貪夜蛾卻沒有殺蟲活性16。 最早關(guān)于側(cè)孢短芽孢桿菌潛在殺蟲作用的報道源于對蚊子的研究。對蚊子的致病性與培養(yǎng)上清液無關(guān)，而是受菌體細(xì)胞影響。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，側(cè)孢短芽孢桿菌的芽孢和獨木舟形伴孢體結(jié)構(gòu)起主要的殺蚊作用17。從俄羅斯分離得到B. laterosporus 615和921，能產(chǎn)生不同形狀和大小的細(xì)胞質(zhì)晶體內(nèi)含物，并報道了它們的殺蚊活性18。 最近研究發(fā)現(xiàn)，一種產(chǎn)晶體的側(cè)孢短芽孢桿菌中同時存在芽孢和晶體時，對梨形四膜蟲有殺蟲作用

12、。然而，芽孢-晶體前體對原生動物細(xì)胞無毒害作用19。 Ruiu等20在2006年首次發(fā)現(xiàn)了已形成芽孢的側(cè)孢短芽孢桿菌對家蠅具有感染性。對家蠅的毒性作用主要來源于芽孢。B. laterosporus這類細(xì)菌通過把毒素緊緊地依附在活的芽孢上而產(chǎn)生殺蟲作用。在之后的組織病理學(xué)研究中，對側(cè)孢短芽孢桿菌的致病因素和作用方式進(jìn)行了深入研究。側(cè)孢短芽孢桿菌作為防治蒼蠅的生物藥劑，其價值還體現(xiàn)在另一方面：安全性評價結(jié)果表明，它對非靶標(biāo)生物無毒性，而只作用于膜翅目的家蠅蛹寄生蜂以及蜜蜂。 2.1.2殺線蟲作用某些側(cè)孢短芽孢桿菌菌株的芽孢中含有殺線蟲化合物，能夠抑制線蟲的卵孵化和幼蟲發(fā)育，因此，側(cè)孢短芽孢桿菌已成

13、為寄生性線蟲的生物防治藥劑。通過高效液相分離得到的殺蟲毒素是一種耐高溫、分子量低（大約為2.9 kD）的蛋白質(zhì)，紫外吸收波長為205、220、268 nm21。對動物寄生性線蟲和植物寄生性線蟲都有殺蟲活性13。 已經(jīng)確定側(cè)孢短芽孢桿菌G4產(chǎn)生的胞外蛋白對線蟲有毒性22，從該菌的發(fā)酵上清液中分離純化出的堿性蛋白酶BLG4，對獨立生存的線蟲和植物寄生線蟲Bursaphelenchus xylophilus Nickle有殺蟲活性。在掃描電子顯微鏡下觀察到，這些蛋白質(zhì)嚴(yán)重破壞了線蟲的角質(zhì)層，使其外層表皮脫落并形成很多裂痕。這種作用方式和食線蟲真菌類似，食線蟲真菌入侵線蟲體內(nèi)，通過胞外蛋白酶降解外表皮

14、的蛋白質(zhì)角質(zhì)膜和連接線蟲幾丁質(zhì)纖維的基質(zhì)實現(xiàn)。使用重組體的純培養(yǎng)物，體外驗證了BLG4的殺蟲活性。在枯草芽孢桿菌中克隆表達(dá)的BLG4編碼基因，與絲氨酸蛋白酶類中的枯草桿菌蛋白酶家族以及其他角質(zhì)層降解蛋白酶的編碼基因具有高度的同源性。缺少BLG4基因的突變體，檢測時致病性顯著降低。在線蟲角質(zhì)層的降解過程中，利用熒光免疫定位法，證明了蛋白酶參與細(xì)菌感染作用，該研究成果已得到應(yīng)用23。 2.1.3殺軟體動物作用據(jù)報道，短短芽孢桿菌（B. brevis）相近種對水生蝸牛、光滑雙臍螺和斑馬貽貝等有殺蟲活性。細(xì)菌培養(yǎng)物的全部成分都與其對軟體動物的致病性有關(guān)，其中產(chǎn)生的細(xì)菌抗生素，如短桿菌肽S和D，起到了主

15、要作用24。側(cè)孢短芽孢桿菌對生命周期較短的動物的感染性更強，對面盤幼蟲期的斑馬貽貝的致病力與蘇云金芽孢桿菌相當(dāng)。 上述研究表明，側(cè)孢短芽孢桿菌不同菌株之間以及同一菌株對不同靶標(biāo)的作用機制可能有所不同。 2.2側(cè)孢短芽孢桿菌的抗菌活性 側(cè)孢短芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)種類豐富，對各類真菌和細(xì)菌都表現(xiàn)出廣譜的抑菌活性。短芽孢桿菌屬中很多可以產(chǎn)生蛋白酶和抗生素的物種都具有這種生物學(xué)特性。這方面國外的報道較多，已確定的抗菌物質(zhì)有非肽類的芽孢菌胺、肽類抗生素、聚酮化合物以及幾丁質(zhì)酶等。 2.2.1抑制植物病原真菌從我國蘋果根際土壤中分離到的B. laterosporus ZQ2對蘋果樹致病菌具有廣譜抗性，如

16、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）、尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）、茄病鐮刀菌（F. solani）、煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus）、煙草赤星病菌（Alternaria alternata）、楊樹爛皮病菌（Valsa sordida ）、蘋果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、灰霉病菌（Botrytis cinerea）和蘋果輪紋病菌（Physalospora piricola）等。在120高溫處理30 min、紫外照射和pH值111的條件下，該細(xì)菌培養(yǎng)上清液中抗真菌活性仍然能達(dá)到80%的抑菌率25。在印度的

17、泥漿中分離到側(cè)孢短芽孢桿菌BPM3，能夠抑制植物致病真菌如F. oxysporum、F. semitectum、Magnaporthe grisear、Rhizoctonia oryzae以及革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的生長。將起抑菌作用的化合物進(jìn)行分離鑒定，通過光譜分析，初步發(fā)現(xiàn)最高活性部位的化學(xué)組成包括C-H、羰基、二甲基、-CH2和甲基26。 有些側(cè)孢短芽孢桿菌菌株通過產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶來降解真菌細(xì)胞壁，從而抑制真菌生長。趙秋敏等27從524株芽孢桿菌中篩選出1株幾丁質(zhì)酶活力較高的側(cè)孢短芽孢桿菌1?864，研究表明該菌對小麥赤霉菌等6種病原菌具有明

18、顯的抑制作用。從印度的紅樹林濕地土壤中，分離到一株側(cè)孢短芽孢桿菌Lak210，在含膠體幾丁質(zhì)的培養(yǎng)基上，可以產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶，釋放到培養(yǎng)液中。這些抗菌蛋白對鐮刀菌屬植物致病真菌具有抑制作用，與由B. laterosporus LMG15441基因編碼的89.4 kD的四結(jié)構(gòu)域幾丁質(zhì)酶，以及69.4 kD的二結(jié)構(gòu)域幾丁質(zhì)酶（ChiA 1）具有高度的同源性28。 2.2.2抑制植物病原細(xì)菌側(cè)孢短芽孢桿菌的抗菌性能與其產(chǎn)生的抗菌肽有關(guān)，現(xiàn)已研究出一種利用瓊脂擴散定量檢測其生物活性的方法29。李偉杰等30將番茄青枯病拮抗菌X10鑒定為側(cè)孢短芽孢桿菌，并制備了X10的固體菌劑，對其田間應(yīng)用效果的測定表明，該

19、菌劑對番茄青枯病的防治效果較好，同時還能促進(jìn)番茄植株生長和增加產(chǎn)量。另外，X10發(fā)酵液中的蛋白粗提液具有抑制茄科勞爾氏菌生長的效果。最近，從側(cè)孢短芽孢桿菌A60的發(fā)酵液中，分離鑒定到一種分子質(zhì)量大約為1.6 kD的新型短序列線性抗菌肽，命名為BL-A60，并證明其對多種植物致病菌具有抑制作用。抗菌活性物質(zhì)熱穩(wěn)定性好，100處理15 min后仍保持活性，在pH值311范圍內(nèi)抗菌活性不受影響，蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶處理也不影響其活性31。抗菌肽對微生物的抑制作用顯示它通過破壞細(xì)胞膜，造成細(xì)胞破碎和裂解。這些抗菌肽通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞并隨細(xì)胞質(zhì)的流動而轉(zhuǎn)移，它們通過干擾DNA和RNA，最終破壞蛋

20、白質(zhì)的合成。BL-A60可能也是通過這種方式起作用的，但目前這些機理還未研究清楚。黎定軍等32對側(cè)孢短芽孢桿菌2-Q-9研究時發(fā)現(xiàn)它分泌的抑菌物質(zhì)能強烈抑制3個青枯病菌生理小種的正常生長，進(jìn)一步對該抑菌物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行研究后表明，該抑菌物質(zhì)可能是蛋白或多肽類。陳武等33分離并純化出側(cè)孢短芽孢桿菌2-Q-9外泌抗菌肽BL2Q9。任召珍等34得到了側(cè)孢短芽孢桿菌Lh-1的抗菌活性物質(zhì)R21，抑菌試驗證明R21對致病性革蘭氏陰性和陽性菌、食品腐敗菌及少數(shù)真菌均有抑菌作用。趙秀香等35從煙草根際土壤中分離到一株生防菌側(cè)孢短芽孢桿菌B8，它的發(fā)酵液對煙草黑脛病菌的抑菌圈直徑達(dá)到63 mm，試驗推斷該抑菌物

21、質(zhì)可能為蛋白或多肽類。 2.3側(cè)孢短芽孢桿菌的解磷功能 側(cè)孢短芽孢桿菌具有解磷、解鉀等功能。石磊36研究了側(cè)孢短芽孢桿菌菌株BL-21的解磷能力，表明它適合開發(fā)應(yīng)用于旱田農(nóng)作物的菌肥，且能在一定程度上提高土壤中有效磷的含量和農(nóng)作物的產(chǎn)量。研究發(fā)現(xiàn)側(cè)孢短芽孢桿菌能夠降解水胺硫磷。杜春梅等37在研究側(cè)孢短芽孢桿菌解磷過程中，發(fā)現(xiàn)它具有降解氧化樂果、水胺硫磷等有機磷農(nóng)藥的作用，分析了側(cè)孢短芽孢桿菌菌株BL-2l降解水胺硫磷的條件和途徑，并得到了降解水胺硫磷的最佳培養(yǎng)基配方和降解條件。 2.4側(cè)孢短芽孢桿菌對有機污染物的降解 利用微生物進(jìn)行生物修復(fù)已成為新的研究熱點。利用生物方法處理污染場地以達(dá)到降解

22、并除去污染源或污染化合物的目的。人們發(fā)現(xiàn)越來越多的物質(zhì)能被側(cè)孢短芽孢桿菌所降解，最典型的實例是把聚乙烯醇降解為乙酸鹽38，還能產(chǎn)生多種酶如木質(zhì)素過氧化酶、漆酶、氨基比林-N-脫甲基酶、NADH-DCIP還原酶和孔雀綠還原酶等。能夠?qū)崿F(xiàn)對紡織物偶氮染料的脫色處理，Kurade等39研究了側(cè)孢短芽孢桿菌MTCC 2298對不同結(jié)構(gòu)染料的優(yōu)先降解，并運用HPTLC優(yōu)化了脫色物質(zhì)的降解規(guī)律和物理化學(xué)參數(shù)。隨后又發(fā)現(xiàn)一種新型細(xì)菌-酵母微生物菌群BL-GG可以有效地對紡織工業(yè)廢水及分散染料Scarlet RR進(jìn)行脫色，并認(rèn)為細(xì)菌-真菌或酵母的結(jié)合所產(chǎn)生的聯(lián)合酶催化機制表現(xiàn)出增效作用，減少了毒性代謝物的產(chǎn)生

23、40。Waghmode等41評估了Galactomyces geotrichum MTCC 1360 （GG） 和B. laterosporus MTCC 2298 （BL）及二者的微生物菌群GG-BL對分散染料Brown 3 REL的不同降解效果，并進(jìn)行了進(jìn)一步驗證。 研究證明，側(cè)孢短芽孢桿菌能夠降解制革廠廢水中的植物單寧42，生物降解苯酚和甲苯43，生物吸附水溶液中的有毒金屬，以及對污水系統(tǒng)中的重金屬解毒等44。 2.5側(cè)孢短芽孢桿菌的醫(yī)用功能 側(cè)孢短芽孢桿菌的醫(yī)用功能早已為人們所熟知，尤其是國外在這方面的研究較深入，技術(shù)也較成熟，而且相關(guān)產(chǎn)品種類豐富，給人類健康帶來了福音。美國、英國利用

24、側(cè)孢短芽孢桿菌開發(fā)出益生菌保健類藥物BOD等，用于口服預(yù)防或治療胃腸紊亂。在歐洲市場上，該菌產(chǎn)生的生物素前體已經(jīng)開發(fā)出了很多產(chǎn)品。 某些側(cè)孢短芽孢桿菌菌株的抗真菌和抗細(xì)菌特性具有醫(yī)藥價值，因為它們產(chǎn)生的抗生素有治療作用。如抗生素側(cè)孢菌胺，在體內(nèi)和體外試驗中，均表現(xiàn)出對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的廣譜抗性45。從巴布亞新幾內(nèi)亞海岸熱帶海水中分離得到一株側(cè)孢短芽孢桿菌，能產(chǎn)生acyldipeptides tupuseleiamides和抗真菌聚酮類化合物basiliskamides，可以有效抑制E. coli和白色念珠菌46。同樣從海洋中分離的菌株P(guān)BG-276也能產(chǎn)生包括loloatins、bo

25、gorols和脂肽tauramamide的多種肽化合物47。側(cè)孢短芽孢桿菌發(fā)酵液中還含有其它抗生素，如cyclodecapeptide laterocidin48，凝血酶抑制劑bacithrocins A、B和C49，亮氨酸氨肽酶抑制劑leuhistin，以及抗癌物質(zhì)斯格埃林等。Krachkovskii等50從側(cè)孢短芽孢桿菌IGM52中分離到一種環(huán)狀十肽類抗生素，通過核磁共振分光法鑒定為loloatinA。從土壤中分離的一些側(cè)孢短芽孢桿菌菌株能產(chǎn)生重要的工業(yè)用酶頭孢菌素?；D(zhuǎn)移酶，用于頭孢菌素衍生物的工業(yè)化生產(chǎn)51。 側(cè)孢短芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種抗腫瘤活性物質(zhì)，例如精胍菌素、免疫毒素、15-脫氧

26、精胍菌素等。15-脫氧精胍菌素（15-Deoxyspergualin，DSG）是由側(cè)孢短芽孢桿菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，對犬類、嚙齒類和靈長類動物具有免疫抑制活性。在抗癌免疫抑制方面應(yīng)用潛力巨大，可抑制單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖，抑制單核細(xì)胞釋放過氧化物酶及溶酶體酶，并能明顯減少腎移植后細(xì)胞浸潤52。Shi等53對B. laterosporus A7誘變，篩選出一株高產(chǎn)抗癌物質(zhì)且遺傳穩(wěn)定性良好的菌株A-94-7，并對其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，抗癌物質(zhì)產(chǎn)量為原始菌株的4倍。 2.6側(cè)孢短芽孢桿菌的其他功能 Crawford等54研究芽孢桿菌對4-羥基苯甲酸降解的過程中發(fā)現(xiàn)菌株B. laterospo

27、rus PHB-7a在含4-羥基苯甲酸的培養(yǎng)基中能夠產(chǎn)生高水平的龍膽酸鹽加氧酶和順丁烯二酰丙酮酸鹽水解酶，該酶能把 4-羥基苯甲酸轉(zhuǎn)變?yōu)辇埬懰猁}，龍膽酸鹽通過谷胱甘肽的作用進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為龍膽酸。Aramori等55從土壤中得到一種新型產(chǎn)戊二酰7-ACA ?；D(zhuǎn)移酶的側(cè)孢短芽孢桿菌J1。Yoshimoto等56從土壤中分離到的一株側(cè)孢短芽孢桿菌可以產(chǎn)生一種內(nèi)-N-乙酰氨基半乳糖苷酶。Umerie等57通過從土壤中分離的側(cè)孢短芽孢桿菌進(jìn)行分批發(fā)酵生產(chǎn)L-賴氨酸。側(cè)孢短芽孢桿菌產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)對多個屬的藍(lán)藻具有殺藻作用，包括顫藻、魚腥藻、微囊藻、念珠藻等有害藻類58。它阻礙了微藻類的光合作用，并導(dǎo)致

28、細(xì)胞分裂停滯、藍(lán)藻鏈破壞以及細(xì)胞溶解，可有效控制微藻類對水源的污染。所有這些活性物質(zhì)的相關(guān)研究顯示了側(cè)孢短芽孢桿菌的巨大應(yīng)用潛力。 3側(cè)孢短芽孢桿菌應(yīng)用現(xiàn)狀及存在的問題 研究證明，側(cè)孢短芽孢桿菌具備開發(fā)成為防治昆蟲、線蟲、軟體動物和植物病原菌的生防菌劑的潛力。由于側(cè)孢短芽孢桿菌對很多有害微生物具有抑制作用，已作為飼料添加劑應(yīng)用于哺乳動物的腸道調(diào)節(jié)。鑒于其益生功效，給家禽口服側(cè)孢短芽孢桿菌的孢子制劑，能夠提高飼料的利用率并增加體重59。另外，由于它具有抗菌特性并能產(chǎn)生特有的抗生素類物質(zhì)，已逐步應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)。最近的相關(guān)研究更多地傾向于其生物降解和凈化特性，并強調(diào)其在生物修復(fù)方面的應(yīng)用潛力。 印度

29、已完成了3種側(cè)孢短芽孢桿菌菌株全基因組的測序。在美國，側(cè)孢短芽孢桿菌被成功地作為生物殺蟲劑來治療動物線蟲。我國云南大學(xué)的側(cè)孢短芽孢桿菌殺線蟲成果也已得到了生產(chǎn)上的應(yīng)用60。世界酶制劑巨頭丹麥諾維信公司生產(chǎn)的諾沃TM微生物菌劑中，也含有側(cè)孢短芽孢桿菌。自2001年以來，國內(nèi)關(guān)于側(cè)孢短芽孢桿菌的專利多達(dá)40余項，其中絕大部分涉及側(cè)孢短芽孢桿菌的復(fù)合微生物肥料的制備與應(yīng)用，也有關(guān)于側(cè)孢短芽孢桿菌處理生活垃圾，進(jìn)行抗菌蛋白發(fā)酵，生產(chǎn)抗菌肽，以及作為葉面增效劑、水質(zhì)和土壤改良劑、抑藻劑等的具體應(yīng)用。例如孫建新等61發(fā)明的一種促進(jìn)植物生長的微生物肥料及其培養(yǎng)方法，該肥料就包含由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和

30、側(cè)孢短芽孢桿菌組成的復(fù)合微生物；曹鳳明等62提供了一種快速檢測和鑒定微生物肥料中側(cè)孢短芽孢桿菌的技術(shù)，利用特異引物，根據(jù)樣品基因組DNA進(jìn)行PCR擴增，對微生物肥料中的側(cè)孢短芽孢桿菌進(jìn)行檢測和鑒定。 側(cè)孢短芽孢桿菌在實踐應(yīng)用中尚存在一些問題亟待解決。主要包括：（1）如何解決側(cè)孢短芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)量偏低的問題，用以在實際生產(chǎn)中提高其發(fā)酵產(chǎn)量，增加生產(chǎn)效益；（2）側(cè)孢短芽孢桿菌類生物菌劑投放到環(huán)境中的生物安全性問題，這需要大量的田間試驗，證明其使用后在周圍環(huán)境中所占據(jù)的生態(tài)位以及對生態(tài)平衡的影響，考察其是否可在發(fā)揮作用后短時間內(nèi)數(shù)量減少直至消失，以保持原來的生態(tài)平衡，確保生態(tài)安全；（3）如何建立一種

31、快速、準(zhǔn)確、有效的檢測環(huán)境中側(cè)孢短芽孢桿菌的含量及分布狀況的方法，以便于及時示蹤，并進(jìn)一步探索菌株在土壤乃至植物中的定植存活情況、與土著微生物的相互關(guān)系，實時監(jiān)測田間應(yīng)用效果。（4）進(jìn)一步研發(fā)側(cè)孢短芽孢桿菌相關(guān)的生物降解菌劑和酶制劑。 側(cè)孢短芽孢桿菌的多種生物學(xué)功能對生產(chǎn)實踐產(chǎn)生積極的影響，具有巨大的應(yīng)用潛力。基于其具有殺蟲、抑菌等特性，可以不斷開發(fā)出相應(yīng)的微生物菌劑、醫(yī)療保健藥物、生物防控制品及環(huán)?；ぎa(chǎn)品。隨著側(cè)孢短芽孢桿菌全基因組測序的完成，可以逐步開展對相關(guān)基因的分離、克隆以及高效表達(dá)研究，側(cè)孢短芽孢桿菌在人類生產(chǎn)生活中必將發(fā)揮越來越重大的作用。伴隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用以及側(cè)孢短芽孢桿菌

32、殺線蟲作用的深入研究，還可以進(jìn)一步開發(fā)相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因抗線蟲作物，造福社會。 參考文獻(xiàn)： 1White G F. The cause of European foulbroodJ. US Dep. Agric. Bur. Entomol.， 1912， 157： 1-15. 2Laubach C A. Studies on aerobic spore-bearing non-pathogenic bacteria part.Spore-bearing organisms in waterJ. Journal of Bacteriol.， 1916， 1（5）： 506-512. 3Shida O，

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