有機肥料國家標準及各個指標的檢測方法

1、有機肥料的國家標準及各個指標的檢測方法 簡介：本文介紹了生物有機肥肥料的國家標準，以及各個指標的檢測方法。具體包括：有效活菌數(shù)，有機質(zhì)，水分，PH，糞類大腸菌群數(shù)，蛔蟲卵死亡率，N，P5O2，K2O,重金屬等指標的測定方法和流程。可供同行人士參考，可大大縮減您查閱資料的時間，本文采用word文字編輯，下載后可以直接復(fù)制粘貼。1 各個指標的標準1. 各個技術(shù)指標項目指標要求有效活菌數(shù)0.2億/g有機質(zhì)（以干計）45%水分30%PH5.5-8.5糞大腸菌群數(shù)100個/g蛔蟲卵死亡率95%總養(yǎng)分質(zhì)量分數(shù)（N+P5O2+K2O，以烘干計）5%2. 重金屬指標項目指標要求總AS15mg/kg總Cd3mg

2、/kg總Pb50mg/kg總Cr150mg/kg總Hg2mg/kg2 各個指標檢測方法1. 有效活菌數(shù)的測定（1）稀釋稱取固體樣品10g，加入帶玻璃珠的100ml的無菌水中，靜置20分鐘，在旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分震蕩30分鐘，即成母液菌懸液。用5ml無菌轉(zhuǎn)液管分別吸取5ml上述母液菌懸液加入45ml無菌水中，按1比10進行系列稀釋，分別得到10-1,10-2,10-3、稀釋倍數(shù)的菌懸液。（2） 加樣及培養(yǎng) 每個樣品取3個連續(xù)適宜稀釋度，用0.5ml無菌移液管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1ml，加至預(yù)先制備好的固體培養(yǎng)基平板上，分別用無菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂布于瓊脂表面

3、。每一稀釋度重復(fù)3次，同時以無菌水作空白對照，于適宜的條件下培養(yǎng)。（3） 菌落識別 根據(jù)所檢測菌種的技術(shù)資料，每個稀釋度取不同類型代表菌落通過涂片、染色、鏡檢等技術(shù)手段確認有效菌。當空白對照培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落數(shù)時，檢測結(jié)果無效，應(yīng)該重做。（4） 菌落計數(shù) 以出現(xiàn)20-30個菌落數(shù)的稀釋度的平板為計數(shù)標準，（絲狀真菌為10-150個菌落數(shù)），分別統(tǒng)計有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當只有一個稀釋度，其有效菌平均菌落數(shù)在20-300個之間時，則以該菌落數(shù)計算。若有兩個稀釋度，其有效菌落數(shù)在20-300個之間時，應(yīng)該兩者菌落總數(shù)之比值決定，若其比值小于等于2應(yīng)該計算兩者的平均數(shù)；若大于2，則以稀釋度小的菌落數(shù)平

4、均數(shù)計算。有效活菌數(shù)按下列公式計算，同事計算雜菌數(shù)。 N1=(x*k*v1/m0*v2)*108 N2=(x*k*v1/v0*v2)*108式中：N1質(zhì)量有效活菌數(shù)，單位為億每克；N2體積有效活菌數(shù)，單位為億每毫升；x·有效菌落平均數(shù)；K稀釋倍數(shù)；V1基礎(chǔ)液體積，單位為毫升；V2菌懸液加入量，單位為毫升；V0樣品量，單位為毫升；M0樣品量，單位為克。2. 有機質(zhì)的測定(1) 方法原理 用定量的重鉻酸鉀-硫酸溶液，在加熱條件下，使有機肥料中的有機碳氧化，多余的重鉻酸鉀用硫酸亞鐵標準溶液滴定，同時以二氧化硅為添加物作空白試驗。根據(jù)氧化前后氧化劑好量，計算有機碳含量，乘以系數(shù)1.724，為

5、有機質(zhì)含量。（2）試劑及制備 重鉻酸鉀標準溶液0.1mol/L：稱取經(jīng)過130攝氏度烘3-4小時的重鉻酸鉀4.9031g，先用少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移入1L容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻別用。 重鉻酸鉀溶液0.8mol/L：稱取重鉻酸鉀39.23g，先用少量水溶解，然后轉(zhuǎn)入1L的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻備用。 硫酸亞鐵0.2mol/L：稱取七水硫酸亞鐵55.6g，溶于900ml水中，加硫酸20ml溶解，稀釋定容至1L，搖勻備用，此溶液的準確濃度以0.1mol/L重鉻酸鉀標準液標定，現(xiàn)用現(xiàn)標定。 0.2mol/L的硫酸亞鐵標準溶液的標定：吸取重鉻酸鉀標準溶液20ml，加入150ml三角瓶中，加硫酸

6、3-5ml和2-3滴鄰啡啰啉指示劑，用硫酸亞鐵標準液滴定，根據(jù)硫酸亞鐵標準液滴定時的消耗量按下式計算其準確濃度。C=c1*v1/V2C1重鉻酸鉀標準溶液的濃度，單位為摩爾每升；V1吸取標準重鉻酸鉀的體積，單位為毫升；V2滴定時消耗硫酸亞鐵標準溶液的體積，單位為毫升。 鄰啡啰啉指示劑：稱取硫酸亞鐵（分析純）0.695g和鄰啡啰啉1.485g溶液100ml水中，搖勻備用，指示劑易變質(zhì)，應(yīng)該密閉保存于棕色瓶中。（3） 測定步驟 稱取試樣0.2-0.5g，置于500ml的試劑瓶中，準確加入0.8mol/L重鉻酸鉀溶液50ml，再加入50ml濃硫酸，加一彎頸小漏斗，置于沸水中，待水浴沸騰后保持三十分鐘。

7、取出冷卻至室溫，用水沖洗小漏斗，洗液承接于三角瓶中。取下三角瓶，將反應(yīng)物無損轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，冷卻至室溫，定容，吸取50ml溶液于250ml三角瓶內(nèi)，加水至約100ml，加2-3滴鄰啡啰啉指示劑，用02.mol/l硫酸亞鐵標準溶液滴定近終點時，溶液由綠色變成暗綠色，再逐滴加入硫酸亞鐵標準溶液直至生成磚紅色為止。同時稱取02.g二氧化硅代替試樣，按照相同分析步驟，使用同樣的試劑，進行空白試驗。 如果滴定試樣所用硫酸亞鐵標準溶液用量不到空白試樣所用硫酸亞鐵標準液用量的三分之一時，則應(yīng)減少稱取量，重新測定。（4） 分析結(jié)果有機質(zhì)的含量以肥料的質(zhì)量分數(shù)表示W(wǎng)（%）=c（v0-v）*0.003*1

8、00*1.5*1.724*D/（m（1-x0）式中：C指定標準溶液的摩爾濃度，單位為摩爾每升；V0空白試驗時，消耗標定標準溶液的體積，單位為毫升；V樣品測定時，消耗指定標準溶液的體積，單位為毫升；0.003四分之一碳原子的摩爾質(zhì)量；1.724有機碳換算成有機質(zhì)的系數(shù)；1.5氧化校正系數(shù)；m風干樣質(zhì)量，單位為g；x0風干樣含水量；D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，250/50。3.水分含量測定將空鋁合置于干燥箱中105攝氏度烘干0.5小時，冷卻后稱量記錄空鋁合的質(zhì)量，然后稱取2份平行樣品，每份20g，分別加入鋁合中并記錄質(zhì)量，將裝好樣品的鋁合置于干燥箱中105攝氏度下烘干4-6小時，取出置于干燥器

9、中冷去20min，后進行稱量，水分含量按照下式計算，結(jié)果為兩次測量的平均值。W（%）=(（m1-m2）/(m1-m0)*100式中：W樣品水分含量，單位為百分率；M0空鋁合的質(zhì)量，單位為gM1樣品盒鋁合的質(zhì)量，單位為g；M2烘干后樣品盒鋁合的質(zhì)量，單位為g；4.PH的測定 打開酸度計電源預(yù)熱30min，用標準溶液校準。 PH的測定，每個樣品重復(fù)3次，計算三次的平均值。 測定步驟：稱取樣品15g，放入50ml的燒杯中，按1:2的比例將無離子水加到燒杯中，攪拌均勻。然后靜置30min，測樣品懸液的PH，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。5.糞大腸菌群數(shù)的測定（1）樣品稀釋 在無菌操作下稱取樣品10g或吸取樣品1

10、0ml，加入到帶玻璃珠的90ml無菌水中，置于搖床上200r/min充分震蕩30min，即成10-1稀釋液。（2）乳糖發(fā)酵試驗 選取三個連續(xù)適宜稀釋液，分別吸取不同稀釋液1ml加入到乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種3支發(fā)酵管，置44.5攝氏度恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時。如果所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸，則為糞大腸菌群陰性，如果有產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只有產(chǎn)酸的發(fā)酵管，則按分離培養(yǎng)步驟進行。（3）分離培養(yǎng) 從產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管中分別挑取發(fā)酵液在伊紅美藍瓊脂平板上劃線，置于36攝氏度條件下培養(yǎng)18-24小時。（4）證實試驗 從（3）中分離平板上挑取可疑菌落，進行革蘭氏染色，染色反應(yīng)陽性為

11、糞大腸菌群陰性；如果為革蘭氏陰性無芽孢桿菌則挑取同樣菌落接種在乳糖發(fā)酵管中，置44.5攝氏度條件下培養(yǎng)24小時。觀察產(chǎn)氣情況，不產(chǎn)氣為糞大腸菌群陰性，產(chǎn)氣為糞大腸菌群陽性。（5） 結(jié)果 證實試驗為糞大腸菌群陽性的，根據(jù)糞大腸菌群陽性發(fā)酵管數(shù)，查MPN檢索表，得出每克肥料樣品中的糞大腸菌群數(shù)。6.蛔蟲卵死亡率的測定（1） 測定方法原理 將堿性溶液與肥料樣品充分混合，分離蛔蟲卵，然后用密度較蛔蟲卵密度大的溶液為漂浮液，使蛔蟲卵漂浮在溶液的表面，從而收集檢驗。（2） 試驗方法 蛔蟲卵分離 稱取5.010.0g樣品（顆粒較大的樣品應(yīng)先進行研磨），放于容量為50mL離心管中，注入NaOH溶液2530mL

12、,另加玻璃珠約10粒，用橡皮塞塞緊管口，放置在振蕩器上，靜置30min后，以200300r/min頻率振蕩1015min。振蕩完畢，取下離心管上的橡皮塞，用玻璃棒將離心管中的樣品充分攪勻，再次用橡皮塞塞緊管口，靜置1530min 后，振蕩1015min。離心沉淀 從振蕩器上取下離心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸餾水，將附著于橡皮塞上和管口內(nèi)壁的樣品沖入管中，以20002500r/min速度離心35min后，棄去上清液。然后加適量蒸餾水，并用玻璃棒將沉淀物攪起，按上述方法重復(fù)洗滌三次。離心漂浮 往離心管中加入少量飽和NaNO3溶液，用玻璃棒將沉淀物攪成糊狀后，再徐徐添加飽和NaNO3溶液，隨加隨攪

13、，直加到離管口約1cm為止，用飽和NaNO3溶液沖洗玻璃棒，洗液并入離心管中，以20002500r/min速度離心35min。 用金屬絲圈不斷將離心管表層液膜移于盛有半杯蒸餾水的燒杯中，約30次后，適當增加一些飽和NaNO3溶液于離心管中，再次攪拌、離心及移置液膜，如此反復(fù)操作次，直到液膜涂片觀察不到蛔蟲卵為止。抽濾鏡檢 將燒杯中混合懸液，通過覆以微孔火棉膠濾膜的高爾特曼氏漏斗抽濾。若混合懸液的渾濁度大，可更換濾膜。 抽濾完畢，用彎頭鑷子將濾膜從漏斗的濾臺上小心取下，置于載玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍顯微鏡下對整張濾膜進行觀察和蛔蟲卵計數(shù)。當觀察有蛔蟲卵時，將含有蛔蟲卵的濾膜進行培養(yǎng)。

14、培養(yǎng) 在培養(yǎng)皿的底部平鋪一層厚約1cm的脫脂棉，脫脂棉上鋪一張直徑與培養(yǎng)皿相適的普通濾紙。為防止霉菌和原生動物的繁殖，可加入甲醛溶液或甲醛生理鹽水，以浸透濾紙和脫脂棉為宜。 將含蛔蟲卵的濾膜平鋪在濾紙上，培養(yǎng)皿加蓋后置于恒溫培養(yǎng)箱中，在2830條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中經(jīng)常滴加蒸餾水或甲醛溶液，使濾膜保持潮濕狀態(tài)。鏡檢 培養(yǎng)1015d，自培養(yǎng)皿中取出濾膜置于載玻片上，滴加甘油溶液，使其透明后，在低倍鏡下查找蛔蟲卵，然后在高倍鏡下根據(jù)形態(tài)，鑒定卵的死活，并加以計數(shù)。鏡檢時若感覺視野的亮度和膜的透明度不夠，可在載玻片上滴一滴蒸餾水，用蓋玻片從濾膜上刮下少許含卵濾渣，與水混合均勻，蓋上蓋玻片進行鏡檢。判

15、定 凡含有幼蟲的，都認為是活卵，未孵化或單細胞的都判為死卵。結(jié)果計算K=100(N1-N2)/ N1式中：K蛔蟲卵死亡率（%）N1鏡檢總卵數(shù) N2培養(yǎng)后鏡檢活卵數(shù)7.總氮的測定（1）方法原理 有機肥中的有機氮經(jīng)過硫酸-過氧化氫消煮，轉(zhuǎn)化為銨態(tài)氮。堿化后蒸餾出來的氨用硼酸溶液吸收，以標準酸溶液滴定，計算樣品中總氮含量。（2）試劑 密度1.84的硫酸， 30%過氧化氫， 40%氫氧化鈉溶液， 2%硼酸溶液， 定氮混合指示劑（0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅溶液100ml的95%的乙醇中）， 硼酸-指示劑混合液：每升2%硼酸溶液加入20ml定氮混合指示劑，并用稀堿或稀酸調(diào)至紅紫色（PH約4.5）。此

16、溶液放置時間不宜過長，如在使用過程中PH有變化，需隨時用稀堿或稀酸調(diào)節(jié)。 硫酸（0.025mol/L）或鹽酸（0.05mol/L）標準溶液，（3）步驟試樣溶液制備 稱取過篩的風干試樣0.5-1g，置于凱氏燒瓶底部，用少量水沖洗沾附在瓶壁上的試樣，加5ml硫酸和1.5ml過氧化氫，小心搖勻，瓶口放一彎勁小漏斗，放置過夜。在可調(diào)電爐上緩慢升溫至硫酸冒煙，取下，稍冷加15滴過氧化氫，輕輕搖動凱斯燒瓶繼續(xù)加熱10min，除盡剩余的過氧化氫。取下稍冷，小心加水至20-30ml，加熱至沸。取下冷卻，用少量水沖洗彎勁小漏斗，洗液收入原凱斯燒瓶中。將消煮液移入100ml容量瓶中，加水定容，靜置澄清或用無磷濾紙

17、干過濾到具塞三角瓶中，備用?？瞻自嚇?除不加試樣外，試劑用量和操作同上步驟。測定 蒸餾前檢查蒸餾裝置是否漏氣，并進行空蒸餾清洗管道。吸取消煮清液50ml于蒸餾瓶內(nèi)，加入200ml水。于250ml三角瓶加入10ml硼酸-指示劑混合液承接于冷凝管下端，管口插入硼酸液面中。由筒型漏斗像蒸餾瓶內(nèi)緩慢加入15ml氫氧化鈉溶液，關(guān)好活塞。加熱蒸餾，待蒸餾出體積約100ml，即可停止蒸餾。 用硫酸標準溶液或鹽酸標準溶液滴定溜出液，由藍色剛變至紫紅色為終點，記錄消耗酸標準溶液的體積?？瞻诇y定所消耗標準液的體積不得超過01.ml，否則應(yīng)重新測定。分析結(jié)果肥料中總氮含量以肥料的質(zhì)量分數(shù)表示N(%)=C(V-V0)

18、*0.014*D*100/(m(1-x0)式中：c標定標準溶液的摩爾濃度，單位為摩爾每升；v0空白試驗時，消耗標定標準溶液的體積，單位為毫升；v樣品測定時，消耗標定標準溶液的體積，單位為毫升；0.014氮的摩爾質(zhì)量除以1000；M風干樣品質(zhì)量，單位為gX0風干樣含水量D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/50; 所得結(jié)果應(yīng)表示至兩位小數(shù)。8.磷含量測定（1）方法原理 有機肥試樣采用硫酸和過氧化氫消煮，在一定酸度下，待測液中的硫酸根離子與偏釩酸和鉬酸反應(yīng)生成黃色三元雜多酸。在一定濃度范圍內(nèi)，黃色溶液的吸光度與磷含量成正比例關(guān)系，用分光光度法測定磷含量。（2）試劑 硫密度1.84的硫酸 硝酸 3

19、0%過氧化氫 釩鉬酸銨試劑：A液（稱取25g鉬酸銨溶液400ml水中）；B液（稱取1.25g偏釩酸銨溶液300ml沸水中，冷卻后加250ml硝酸），冷卻。在攪拌下將A液緩慢注入B液中，用水稀釋至1L混勻，儲于棕色瓶中。 氫氧化鈉溶液：質(zhì)量分數(shù)為百分之十。 硫酸：體積分數(shù)為5% 磷標準溶液：50ug/ml 2，4-二硝基酚指示劑，質(zhì)量濃度為0.2%的溶液。（3）步驟試樣溶液制備 與測總N含量的制備方法相同?？瞻兹芤褐苽?除不加試樣外，應(yīng)用的試樣和操作同上步。測定 吸取5ml-10ml試樣溶液，于50ml容量瓶中，加水至30ml左右，與標準溶液系列同條件顯色，比色，讀取吸光度。標準曲線繪制 吸取磷

20、標準溶液0,1,2.5,5,7.5,10,15ml，分別置于七個50ml容量瓶中，加入與吸取試樣溶液等體積的空白溶液，加水至30ml左右，加2滴2,4-二硝基酚指示劑溶液和硫酸溶液調(diào)節(jié)溶液剛呈微黃色，加10ml釩鉬酸銨試劑，搖勻，用水定容。此溶液為1ml含磷0,1,2.5,5，7.5,10,15ug的標準溶液。在室溫下放置20min后，在分光光度計波長440nm用1cm光徑比色皿，以空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點，進行比色，讀取吸光度。根據(jù)濃度和吸光度繪制標準曲線或求出直線回歸方程。分析結(jié)果 肥料中的磷含量的質(zhì)量分數(shù)，按下式計算P2O5(%)=C2*V3*D*2.29*0.0001/(m(1-x0)式中

21、：C2由標準曲線查得或由回歸方程求得顯色液磷濃度，單位為微克每毫升；V2顯色體積，50毫升。D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/5或100/10。M風干樣質(zhì)量，單位為gX0風干樣含水量2.29將磷換算成五氧化二磷的因素0.0001將ug/g換算成質(zhì)量分數(shù)的因素。所得結(jié)果保留兩位小數(shù)。9.鉀含量測定（1）方法原理 有機肥料試樣經(jīng)過硫酸和過氧化氫消煮，稀釋后用火焰光度法測定。在一定濃度范圍，溶液中鉀濃度與發(fā)射強度成正比例關(guān)系。（2）試劑 密度為1.84的硫酸 30%的過氧化氫 鉀標準儲備液：1mg/ml 鉀標準溶液：吸取10ml鉀標準儲備液于100ml容量瓶匯總，用水定容，此溶液1ml含鉀10

22、0ug。（3）步驟試樣溶液制備 同測定N含量的方法步驟空白溶液制備 除了不加試樣外，應(yīng)用的試劑盒操作同上步。校準曲線繪制 吸取鉀標準溶液0,1,2.5,5,7.5,10ml分別置于6個50ml容量瓶中，加入與吸取試樣溶液等體積的空白溶液，用水定容，此溶液為1ml含鉀0,2,5,10,15,20ug的標準溶液系列。在火焰光度計上，以空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點，以標準溶液系列中最高濃度的標準溶液調(diào)節(jié)滿度至80分處。再依次由低濃度至高濃度測量其他標準溶液，記錄儀器示值。根據(jù)鉀溶液和儀器示值繪制標準曲線。測定 吸取5ml試樣溶液，于50ml容量瓶中，用水定容，與標準溶液系列同條件在火焰光度計上測定，記錄儀器

23、示值。每測定5個樣品后需用鉀標準溶液校正儀器。分析結(jié)果 肥料鉀含量以肥料的質(zhì)量分數(shù)表示，按下式計算K2O(%)=C3*V4*D*1.2*0.0001/(m(1-x0)式中：C3由校準曲線查得，單位為微克每毫升；V4測定體積，本操作為50mlD分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/5M風干質(zhì)量，單位為gX0風干樣含水量1.2將鉀換算成K2O的因數(shù)。0.0001將ug/g換算成質(zhì)量分數(shù)的因數(shù)所得結(jié)果保留兩位小數(shù)。10.重金屬含量測定（1）測定試樣溶液的制備 稱取試樣5-8g，置于400ml高型燒杯中，加入30ml鹽酸和10ml硝酸，蓋上表面皿在電熱板上徐徐加熱，等激烈反應(yīng)結(jié)束后，稍微移開表面皿繼續(xù)

24、加熱，使酸全部蒸發(fā)至近干涸，以趕盡硝酸。冷卻后加入50ml鹽酸溶液，加熱溶解，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移到250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，干過濾，棄去最初幾毫升濾液，待用。（2）空白溶液的制備 除不加試樣外，其他步驟同試樣溶液的制備。（3）重金屬含量的測定（以砷為例） 采用二乙基二硫代氨基甲酸銀分光光度法原理 在酸介質(zhì)中，五價砷通過碘化銀、氯化汞及初生態(tài)氫還原為砷化氫，用二乙基二硫代氨基甲酸銀的吡啶溶液吸收，生成紅色可溶性膠態(tài)銀，在波長540nm處測定其吸光度，吸光度的大小與砷含量成正比。試劑和材料 鹽酸，抗壞血酸，無砷金屬鋅粒，碘化鉀溶液（150g/L） 二乙基二硫代氨基甲酸銀吡啶溶液：5g/L。 氯化亞錫-鹽酸溶液：溶解40g氯化亞銀在25ml水和75ml鹽酸的混合液中；乙酸鉛棉花：溶解50g乙酸鉛于250ml水中，用此溶液將脫脂棉浸透，取出擠干以除去多余溶液，儲存在密閉容器中。 砷標準溶液：0.1mg/ml 砷標準