芹菜降脂膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、芹菜降脂膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究                             作者：孟青，郭曉玲，姜笑寒，馮毅凡【摘要】  目的 建立芹菜降脂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法鑒別芹菜膠囊中的芹菜甲素、芹菜素；采用高效液相色譜法測(cè)定膠囊中二者的含量。結(jié)果 在薄層色譜中檢出了芹菜甲素、芹菜素；芹菜甲素平均回收率為9

2、8.90（n=6）,RSD=1.9；芹菜素平均回收率為97.97（n=6）,RSD=1.8。結(jié)論 所建立的方法可靠、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可有效控制芹菜降脂膠囊的質(zhì)量。 【關(guān)鍵詞】  芹菜降脂膠囊；芹菜甲素；芹菜素；薄層色譜法；高效液相色譜法Abstract:Objective To establish the quality standard for Qincaijiangzhi capsules. Methods Thin Layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) were

3、used to identify and determine butylphthalide and apigenin in Qincaijiangzhi capsules. Results Average recovery rate for butylphthalide：98.90（n=6）,RSD=1.9; and average recovery rate for apigenin:97.97（n=6）, RSD=1.8. Conclusion The method was reliable, accurate and specific, and could be used in qual

4、ity control of Qincaijiangzhi capsules.Key words:Qincaijiangzhi capsules; butylphthalide; apigenin ;TLC;HPLC芹菜籽為傘形科植物旱芹的干燥成熟果實(shí)，具有降血壓、抗腦缺血、健腦益智、鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥作用13 。常用于治療高血壓癥，腦卒中、老年性、血管性癡呆癥。其主要含有黃酮及其苷類(lèi)成分、苯酞類(lèi)衍生物、揮發(fā)油、香豆精類(lèi)成分 4,5。其中黃酮類(lèi)、苯酞類(lèi)成分顯主要藥理活性2，3，而黃酮類(lèi)成分主要為芹菜素，苯酞類(lèi)成分主要為芹菜甲素、乙素。芹菜降脂膠囊是由芹菜籽超臨界CO2提取物(芹菜油)和芹菜籽黃酮

5、提取物加輔料按一定配比混勻制成，是一種新的預(yù)防動(dòng)脈硬化的天然植物保健品。本文建立了制劑中芹菜甲素及芹菜素的TLC鑒別及HPLC含量測(cè)定方法。1  儀器與試藥1.1  儀器      Waters2695?2996高效液相色譜儀；BP210 D型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。1.2 試藥       芹菜甲素對(duì)照品（自制 ，批號(hào)20051025，含量98.5%）、芹菜素對(duì)照品（上海友思生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20050921，含量98.5%）；薄層層

6、析用硅膠G（青島海洋生物制品廠）；甲醇、乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。芹菜降脂膠囊(自制，批號(hào):070305、070306、070307)。2  薄層鑒別2.1  芹菜甲素的鑒別    取本品內(nèi)容物1 g，加石油醚50 mL,超聲(功率360 W，頻率40 kHz)30 min，過(guò)濾，蒸干殘?jiān)?加甲醇制成200 mg/mL的溶液,作為供試品溶液。按處方取缺芹菜油提取物的陰性樣品1 g，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取芹菜甲素對(duì)照品適量，加甲醇制成1 mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 L，分別點(diǎn)于同一硅膠G254板上，以石油醚?

7、慘宜嵋陰寤?比91）為展開(kāi)劑，置預(yù)飽和15 min的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干。在熒光254 nm下檢視，供試品色譜中在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。2.2 芹菜素的鑒別    取本品內(nèi)容物1 g，加甲醇140 mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)25鹽酸20 mL，回流提取1 h，濾過(guò)，蒸干殘?jiān)?，加甲醇制?00 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。按處方取缺芹菜黃酮提取物的陰性樣品1 g，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取芹菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 L，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以苯?踩?氯甲烷?參匏?

8、乙醇?脖?醋酸?菜?（體積比25.510.51）的下層溶液為展開(kāi)劑，置預(yù)飽和15 min的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.8AlCl3溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。3 芹菜甲素的含量測(cè)定3.1  色譜條件    色譜柱：Waters X Bbridge C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 m），流動(dòng)相：甲醇?菜?(體積比5545)； 流速：1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30 ；進(jìn)樣量：20 L。理論塔板數(shù)以芹菜甲素峰計(jì)不低于3 000。3

9、.2  溶液的制備3.2.1  對(duì)照品溶液的制備    精密稱(chēng)取芹菜甲素對(duì)照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.890 2 mg/mL的對(duì)照品溶液。3.2.2  供試品溶液的制備精密稱(chēng)取膠囊內(nèi)容物50 mg，置10 mL的量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲30 min，加甲醇定容至刻度，濾過(guò)，即得。3.2.3  陰性對(duì)照溶液的制備    取缺芹菜油提取物的陰性樣品，按“3.2.2”項(xiàng)下制備，即得。3.3  專(zhuān)屬性試驗(yàn)    分別吸取芹菜甲素對(duì)照品、陰性樣品及膠囊內(nèi)

10、容物供試品溶液各20 L，依法測(cè)定。在此條件下，陰性對(duì)照對(duì)芹菜甲素測(cè)定無(wú)干擾。說(shuō)明本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，且芹菜甲素與其相鄰組分峰達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)以芹菜甲素計(jì)不低于3 000。見(jiàn)圖3。3.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備      精密量取上述對(duì)照品貯備液分別用甲醇稀釋制成質(zhì)量濃度為8.902、35.61、89.02、106.8、142.4、178.0 g/mL的溶液,分別進(jìn)樣，以峰面積 (A)對(duì)質(zhì)量濃度()進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:A=31520 -18130,結(jié)果表明芹菜甲素在8.902178.0 g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999

11、9）。3.5  精密度試驗(yàn)       精密吸取質(zhì)量濃度89.02 mg/mL對(duì)照品溶液10 L, 重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積的RSD為0.7，表明精密度良好。3.6  重復(fù)性試驗(yàn)       精密稱(chēng)取同一批樣品內(nèi)容物6份，按“3.2.2”項(xiàng)下制備。依法測(cè)定芹菜甲素的含量為0.901%，RSD值為1.1，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。3.7  穩(wěn)定性試驗(yàn)      取同一份“3.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，每

12、隔2 h進(jìn)樣，測(cè)定芹菜甲素的含量，計(jì)算RSD值為0.3，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。3.8  加樣回收率試驗(yàn)      精密稱(chēng)取同一批號(hào)膠囊內(nèi)容物6份，每份25 mg，分別加入質(zhì)量濃度為111.3 mg/mL芹菜甲素對(duì)照品溶液1、2、3 mL，按“3.2.2”項(xiàng)下制備，依法測(cè)定。測(cè)得芹菜甲素平均回收率為98.9（n6），RSD1.9，結(jié)果見(jiàn)表1。表1  芹菜甲素加樣回收率試驗(yàn)（略）3.9  樣品的測(cè)定      分別稱(chēng)取3批膠囊內(nèi)容物（批號(hào)：070305、07030

13、6、070307），每批3份，按“3.2.2”項(xiàng)下制備成供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果3批膠囊中芹菜甲素含量分別為：0.901%、0.909%、0.904%。4  芹菜素的含量測(cè)定4.1  色譜條件      色譜柱：Waters X Bridge C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 m），流動(dòng)相：乙腈?菜?擦姿幔?按表2條件進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；柱溫：30 ；進(jìn)樣量：20 L。理論塔板數(shù)以芹菜甲素峰計(jì)不低于3 000。表2  洗脫梯度條件（略）4.2&

14、#160; 溶液的制備4.2.1  對(duì)照品溶液的制備    精密稱(chēng)取芹菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為64.03 g/mL的對(duì)照品溶液。4.2.2  供試品溶液的制備    稱(chēng)取膠囊內(nèi)容物50 mg，精密稱(chēng)定， 置100 mL的圓底燒瓶中，加入甲醇7mL、25%鹽酸1 mL，回流1 h，水解液濾過(guò)，揮干溶劑，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，濾過(guò)，即得。4.2.3  陰性對(duì)照溶液的制備    取缺芹菜黃酮提取物的陰性樣品，按“4.2.2”項(xiàng)下制備，即得。4.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)&

15、#160;     分別吸取芹菜素對(duì)照品、陰性樣品及膠囊內(nèi)容物供試品溶液各20 L，依法測(cè)定。在此條件下，陰性對(duì)照對(duì)芹菜素測(cè)定無(wú)干擾，說(shuō)明本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)。芹菜素與其相鄰組分峰達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)以芹菜素計(jì)不低于3 000。見(jiàn)圖4。4.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備      精密吸取上述芹菜素對(duì)照品溶液1、2、2.5、4、6、8 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為6.403、12.81、16.01、25.62、38.42、51.22 g/mL的溶液,分別進(jìn)樣，以峰面積 (A)對(duì)質(zhì)量

16、濃度() 進(jìn)行回歸分析,得回歸方程: A=49523 -14689,結(jié)果表明芹菜素在6.40351.22 g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9）。4.5  精密度試驗(yàn)       精密吸取16.01 g/mL芹菜素對(duì)照品溶液10 L,重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積的RSD為0.3，表明精密度良好。4.6  重復(fù)性試驗(yàn)       精密稱(chēng)取同一批樣品內(nèi)容物6份，按“4.2.2”項(xiàng)下制備。依法測(cè)定芹菜素的含量為0.182%，RSD值為1.5，表明方法重復(fù)性

17、良好。4.7  穩(wěn)定性試驗(yàn)      取同一份“4.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，每隔2小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定芹菜素的含量，計(jì)算RSD值為1.2，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。4.8  加樣回收率試驗(yàn)      精密稱(chēng)取同一批號(hào)膠囊內(nèi)容物6份，每份25 mg，分別加入質(zhì)量濃度為25.05 mg/mL芹菜素對(duì)照品溶液1、2、3 mL，按“4.2.2”項(xiàng)下制備，依法測(cè)定。測(cè)得芹菜素平均回收率為97.97（n6），RSD1.8，結(jié)果見(jiàn)表3。表3  芹菜素加樣回收率試驗(yàn)（略）4.9

18、0; 樣品的測(cè)定      分別稱(chēng)取3批膠囊內(nèi)容物（批號(hào)：070305、070306、070307），每批3份，按“4.2.2”項(xiàng)下制備成供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果3批膠囊中芹菜素含量分別為0.182%、0.174%、0.174%。5  討 論5.1  芹菜甲素在甲醇中有很好的溶解性，本實(shí)驗(yàn)分別考察了超聲10、20、30、40 min的提取效果，結(jié)果表明超聲30 min即可提取完全。5.2  芹菜素在植物體中以多種芹菜素苷及苷元的形式存在，故需酸水解后將其轉(zhuǎn)化為芹菜素苷元方可準(zhǔn)確測(cè)定其含量。分別考察了加入不同體積比的甲醇?25%鹽酸（41、61、71、81）對(duì)芹菜素測(cè)定的影響，結(jié)果顯示甲醇?25%鹽酸（體積比71）的提取效果最佳?！緟⒖?/p>