腰痛寧膠囊的毒理學(xué)研究

1、腰痛寧膠囊的毒理學(xué)研究               作者：李蘭芳，李國風，解麗君，張建新【關(guān)鍵詞】  腰痛寧膠囊摘要: 目的: 觀察大鼠口服腰痛寧膠囊的急性毒性和長期毒性作用。 方法: 以SD大鼠為受試對象，采Bliss法測定口服腰痛寧膠囊的LD50 ;采用4個劑量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，連續(xù)180d，觀察給藥90，180d時大鼠的生長發(fā)育、血液學(xué)、血液生化學(xué)、組織病理變化及停藥30d時上述指標的變化。 結(jié)果:

2、 雄性和雌性SD大鼠口服腰痛寧膠囊的LD50 為6158.95mg/kg和803.85mg/kg。大鼠連續(xù)給藥90d時，300mg/kg劑量組堿性磷酸酶、肌酐比空白對照組升高（P<0.01）:白蛋白降低（P<0.01）;5只大鼠肝細胞脂肪變性;2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。150mg/kg劑量組堿性磷酸酶升高（P<0.05），總蛋白和白蛋白降低（P<0.01），3只大鼠肝細胞脂肪變性。給藥180d時，對大鼠體重、攝食量、活動、外周血象、主要臟器的重量系數(shù)檢查未見明顯影響。300mg/kg劑量組

3、白蛋白降低（P<0.01），總蛋白、肌酐升高（P<0.0l和P<0.001）;150mg/kg劑量組白蛋白降低（P<0.001），總蛋白、肌酐升高（P<0.05和<0.001）;75mg/kg劑量組白蛋白降低，（P<0.001），肌酐升高（P<0.001），2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性;37.5mg/kg劑量組白蛋白降低（P<0.001），總蛋白和肌酐升高（P<0.0l和<0.001）。停藥30d后，大鼠體重、攝食量、活動、外周血象、重要器官臟器系數(shù)均正常。生化指標檢查，各給藥組同空白對照組比較肌酐升高（P<0.001）。病

4、理學(xué)檢查各組各臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯改變。 結(jié)論: 不同性別的SD大鼠對腰痛寧膠囊的急性毒性反應(yīng)有非常著性差異，雄性大鼠LD50 比雌性高7.66倍。長期毒性研究表明，長期大劑量服用腰痛寧膠囊，對腎功能有一定影響并且恢復(fù)較慢，建議腎功能不好的患者慎用。通過對腰痛寧膠囊180d用藥過程中各項指標反應(yīng)的觀察，未見性別差異。綜合分析認為，腰痛寧膠囊在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。 關(guān)鍵詞: 腰痛寧膠囊; 急性毒性; 馬錢子; 士的寧; 大鼠; 長期毒性     Toxicologic Study on Yaotongning Capsule Abstract

5、: Objective:To observe the acute toxicity and the long-period toxicity of Yaotongning Capsule（YTNC）in rats.Methods:LD50 were tested of YTNC in rats by Bliss methods.Four groups of rats（300.0，150.0，75.0，37.5mg/kg of YTNC）were administered with repeated gastric infusion of YTNC for180days.Body weight，

6、hematological and hematobiochemical parameters，coefficient and histomorphological figure of organs（the heart，1iver，Spleen，1ungs，kidneys，adrenals，testes，prostate，uterus and ovary，brain，thymus）were exmined in90days，180days and30days after the cessation of YTNC.Results:The LD50 of female and male were（

7、803.85±163.94）mg/kg and（6158.95±1021.70）mg/kg in SD rats respectively.In the long-period toxicity test，after administered repeatedly for90days，the ALP and Crea were increased，ALB were decreased，the fat in liver cells were degenerated in five rats，the epithelium cells edema of proximal conv

8、oluted tubule in two，fatly degenerated，lumens broadend and few red cells in renal tubule were observed in300mg/kg dose group.In the150mg/kg dose group，ALP were increased，TP and ALB were decreased，fat in liver cells were degenerated in three rats.After administerd repeatedly for180days，in the300mg/kg

9、 and150mg/kg dose groups，the TP and grea were increased，the ALB were decreased.In the75mg/kg dose group ALB were decreased，the crea were increased，the fat in liver cells were degenerated lightly in two rats.In the37.5mg/kg dose groups，the ALB were decreased，the TP ang crea were increased.In30days af

10、ter stopping the drug，the changes of hematobiochemical，pathological and coefficient of organs could completely recover，only the crea were increased in all of the rats.Conclusion:The LD 50 of ying in male were significantly different from female in SD rats.LD 50 in male rats was7.66times as much as i

11、n female rats.YTNC administration by long-period and large dose slightly injury the renal function in rats，but the injury was slowly reversible.It is proposed that the patients suffer from renal function harmful trends would administrate carefully.It is safe to administrate the prescribed dose of YT

12、NC.     Key words: Yaotongning Capsule; Acute toxicity; Long-period toxicity; Rat; Strychnos nux-vomica L.;Strychnine腰痛寧膠囊為常用中成藥，是國家中藥保護品種。具有消腫止痛、疏散寒邪、通經(jīng)活絡(luò)的作用，在治療腰椎間盤突出、腰椎增生、坐骨神經(jīng)痛、腰肌纖維炎、慢性風濕性關(guān)節(jié)炎等疾病時具有獨特的療效 1 。因處方中含有馬錢子等毒性中藥，為給臨床用藥提供安全的實驗依據(jù)，本文對腰痛寧膠囊進行了毒理學(xué)研究。 1 材料和方法 1.1 實驗材料1

13、.1.1 動物 SD大鼠120150g，180220g由河北省實驗動物中心提供，合格證號:第04036。     1.1.2 藥物 腰痛寧膠囊，由承德中藥集團提供，批號:20000920。實驗前用蒸餾水配成不同濃度的混懸液灌胃使用。 1.2 實驗方法1.2.1 大鼠LD50 的測定 選用SD大鼠，經(jīng)過預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)雌、雄大鼠口服腰痛寧膠囊的急性毒性反應(yīng)差異很大，因此將雌、雄大鼠分別分組實驗。將雌性SD大鼠分1150.00，977.50，830.90，706.20，600.30，510.03及433.707個組，組間劑量比為10.85;將雄性SD大鼠分成829

14、0.00，6800.00，5580.00和4570.00mg/kg4組，組間劑量比為10.82，每組10只，體重180220g;禁食不禁水12h，根據(jù)預(yù)先設(shè)計的劑量，按體重灌胃給藥1次，給藥體積為20ml/kg，給藥后觀察即刻及每日動物存活情況及一般表現(xiàn)，連續(xù)2周。記錄動物死亡數(shù)，死亡動物立即尸檢，如發(fā)現(xiàn)有肉眼可見的病理改變時，做病理檢查。用DAS軟件，按Bliss法計算LD50 。     1.2.2 SD大鼠的長期毒性實驗 將大鼠按性別和體重隨機分成5組，空白對照組和A、B、C、D腰痛寧膠囊組，A組（300mg/kg）和B組（150mg/kg）每組4

15、0只大鼠，C組（75mg/kg）和D組（37.5mg/kg）每組30只大鼠，雌雄各半，給藥體積為l ml/100g體重，各組均灌胃給藥，每周灌胃6d，對照組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)給藥180d，給藥前及給藥期間每周稱動物體重1次，并按平均體重調(diào)整給藥劑量。實驗期間每天觀察大鼠一般狀態(tài)、體征、攝食量、飲水及糞便狀況。每周稱體重、攝食量1次，了解對動物體重和進食的影響。給藥90d，于末次給藥后24h，空白對照組、A組和B組各抽取大鼠10只（雌、雄各5只）、給藥180d，于末次給藥后24h空白對照組和各給藥組各抽取14只大鼠（雌、雄各7只）、停藥后30d各組抽取6只大鼠（雌、雄各3只），用烏拉坦麻醉，

16、從腹主動脈取血，檢查血液學(xué)和血液生化學(xué)指標。血液學(xué)檢查項目為:血色素（Hb）、血小板（PLT）、紅細胞計數(shù)（RBC）、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)（WBC）、白細胞分類（DC）、凝血時間。血液生化學(xué)檢查項目為:天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐（Crea）、總膽固醇（T-CHO）。取血后，將各組動物處死，立即剖取動物腦、心、肝、脾、肺、腎、胸腺、甲狀腺、腎上腺、子宮卵巢、睪丸、前列腺稱重，根據(jù)體重計算器官重量系數(shù)。并取心、肝、腎、脾、肺、腦、腎上腺、甲狀

17、腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、前列腺等臟器進行肉眼觀察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作組織切片，H-E染色，光鏡下檢查組織病理學(xué)變化。 2 實驗結(jié)果     2.1 大鼠的急性毒性 SD大鼠口服腰痛寧膠囊后幾分鐘內(nèi)出現(xiàn)激惹現(xiàn)象，隨后呼吸急促，流涎，全身抽搐，四肢強直，驚厥，雌性大鼠在灌胃后5145min之間死亡，平均死亡時間為（38.28±43.47）min，LD50 為803.85mg/kg，95%置信限為726.05889.99mg/kg。雄性大鼠在灌胃后5135min內(nèi)死亡，平均死亡時間為（52.45±37.36）min，L

18、D50 為6158.95mg/kg，95%置信限為5669.256690.94mg/kg。死亡大鼠立即尸檢，未發(fā)現(xiàn)肉眼可見明顯病理改變，結(jié)果見表1。表1 雌性SD大鼠經(jīng)口急性毒性實驗（略）    2.2 SD大鼠的長期毒性實驗2.2.1 腰痛寧膠囊對大鼠一般情況的影響 在腰痛寧膠囊連續(xù)給藥期間，給藥開始3周內(nèi)，各給藥組大鼠出現(xiàn)激惹反應(yīng)，神經(jīng)高度緊張，只要有小的刺激，即可產(chǎn)生直立反應(yīng)。3周后此現(xiàn)象消失。各給藥組與對照組比較動物的活動、體重、攝食量、大便和毛發(fā)光澤等相似，未發(fā)現(xiàn)異常情況。A組給藥第一周死亡3只大鼠，給藥全程共死亡8只大鼠（死亡率20%），B組給藥第1，

19、2周大鼠各死亡1只，全程共死亡6只（死亡率15%），C組死亡1只（死亡率3.3%），D組死亡2只（死亡率6.6%），空白對照組死亡0只，肉眼尸檢未見臟器異常。  表2 雄性SD大鼠經(jīng)口急性毒性實驗（略）     2.2.2 腰痛寧膠囊對大鼠體重增長的影響 實驗結(jié)果見表36。表3 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略）表4 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略） 表5 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略）表6 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略）從表2表5可見，腰痛寧膠囊4個劑量對大鼠連續(xù)給藥不同時間的體重，與空白對照組比較，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P值均>0.0

20、5）。表明，腰痛寧膠囊連續(xù)用藥180d，對大鼠的生長發(fā)育（體重增長）無毒性影響。     2.2.3 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥對大鼠血象的影響 實驗結(jié)果見表7，表8。表7 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥3個月對大鼠血象的影響（略）表8 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥6個月對大鼠血象的影響（略）由表78可見，腰痛寧膠囊各給藥劑量組對大鼠連續(xù)給藥90d時，A組中性粒細胞升高，同空白對照組比較P<0.01，B組中性粒細胞升高，淋巴細胞降低，（P值均<0.01），其余指標均無異常;給藥180d時，A組、C組、和D組的白細胞計數(shù)降低（P<0.01、<0.001、和<

21、;0.05），但都在正常范圍內(nèi)，其它檢測均正常?；謴?fù)期各組大鼠外周血象各項檢查無異常，同空白對照組比較無明顯差異。表明連續(xù)服用腰痛寧膠囊180d，對各給藥組大鼠血象基本無明顯影響。 2.2.4 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥3個月對大鼠血液生化指標的影響 實驗結(jié)果見表912。 表9 腰痛寧膠囊恢復(fù)期對大鼠血象的影響（略）表10 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥3個月對大鼠血液生化指標的影響（略）表11 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥6個月對大鼠血液生化指標的影響（略）表12 腰痛寧膠囊恢復(fù)期大鼠血液生化指標的情況（略）從表79可知，腰痛寧膠囊連續(xù)給藥90d時，A組和B組大鼠的各項生化指標數(shù)值同空白對照組相應(yīng)指標的數(shù)值比較，堿性磷酸

22、酶升高（P<0.01和P<0.05），白蛋白降低（P<0.01），A組肌酐升高（P<0.01）;其余各項檢查數(shù)值無明顯變化或在正常范圍內(nèi)。連續(xù)給藥180d時，各給藥組白蛋白降低（P<0.01和P<0.001），肌酐升高（P<0.001）;停藥恢復(fù)30d后，各給藥組肌酐測定值仍高于空白對照組（P<0.001）。其它檢測指標數(shù)值均恢復(fù)正常。表明長期服用腰痛寧膠囊對腎臟功能有一定影響。2.2.5 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥3個月對大鼠主要臟器系數(shù)的影響 實驗結(jié)果見表1315。 表13 腰痛寧膠囊連續(xù)服藥3個月對大鼠主要臟器系數(shù)的影響（略）表14 腰痛寧膠囊連續(xù)

23、服藥6個月對大鼠主要臟器系數(shù)的影響（略）表15 腰痛寧膠囊恢復(fù)期大鼠主要臟器系數(shù)的情況（略）從表1315可見，腰痛寧膠囊連續(xù)服用3個月時，A組和B組大鼠各主要臟器重量系數(shù)與空白對照組比較，腎、腎上腺重量系數(shù)降低（P<0.01和P<0.001）。連續(xù)給藥6個月和恢復(fù)期時各個劑量組臟器重量系數(shù)與空白對照組比較均無明顯差異。說明腰痛寧膠囊連續(xù)服用180d中，前90d，A組和B組大鼠的腎臟和腎上腺重量系數(shù)有一定影響，進一步的連續(xù)服用觀察180d時和恢復(fù)期，對各給藥劑量組各臟器系數(shù)無明顯影響。     2.2.6 腰痛寧膠囊對大鼠重要器官組織的肉眼觀察

24、 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥90d、180d和停藥后30d（恢復(fù)期）殺取大鼠解剖取材，肉眼觀察心、肝、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、胃、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、腦、前列腺等各臟器情況，各給藥劑量組和空白對照組動物各臟器都未見明顯病變。     2.2.7 腰痛寧膠囊對大鼠重要器官組織病理形態(tài)的影響 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥90d、180d和恢復(fù)期各殺取大鼠10，14和6只，雌雄各半，將各給藥劑量組和空白對照組大鼠的心、肝、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、腦、前列腺在相同部位取材，用10%甲醛溶液固定。切片，HE染色，進行病理學(xué)檢查。檢查結(jié)

25、論如下:給藥90d時，A組5只大鼠肝細胞脂肪變性;2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。B組3只大鼠肝細胞脂肪變性，1只大鼠腎濁腫，其余各臟器未見明顯異常改變。給藥180d時，A組、B組和D組各臟器均正常，未見明顯病理改變;C組2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性，其余臟器未見明顯病理改變，恢復(fù)期時大鼠體重、攝食量、活動、外周血象、重要器官臟器系數(shù)均正常，生化指標檢查，各給藥組同空白對照組比較肌酐升高，P值均<0.001。病理學(xué)檢查，空白對照組和各給藥劑量組大鼠各臟器未發(fā)現(xiàn)病理改變。 3 討論     3.1  本實驗選用SD大鼠對腰痛寧膠囊進行了急性毒性實驗，測定了口服該藥的LD50 值。實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠急性毒性表現(xiàn)非常明顯的性別差異，雄性大鼠口服腰痛寧膠囊的LD50 比雌性高7.66倍。大鼠在代謝和毒性反應(yīng)上與人類較為接近3 ，臨床使用中應(yīng)注意該藥急性毒性的性別差異。    腰痛寧膠囊是由馬錢子、土鱉蟲、全蝎、川牛膝等