兩種蚯蚓及其不同部位的酶譜研究

1、    兩種蚯蚓及其不同部位的酶譜研究        摘要采用聚丙烯酰胺凝膠電泳分析赤子愛勝蚓(Eisenia foetida)和秉代環(huán)毛蚓(Pheretima carnosa)不同部位的纖溶酶、酯酶及乳酸脫氫酶酶譜。纖溶酶主要存在于蚯蚓的體腔內(nèi)。不同蚯蚓的纖溶酶酶譜不同。酯酶酶譜在兩種蚯蚓及不同部位差異很大。蚯蚓的乳酸脫氫酶較弱。關(guān)鍵詞蚯蚓；電泳；纖溶酶；酯酶；乳酸脫氫酶 Studies on the Enzymes from Different SpeciesEarthw

2、orm and Different Parts of the EarthwormYi Baxian?, Xu Lishan1，Zeng Yiqing2，Li Guofeng，He Z hizhong(Department of Biochemistry China Pharmaceutical University, Nanjing 210009,1Department of Biology,Zhejiang Normal University Jinhua， 321004，2Freshwater Fisheries Research institute of Jiangsu Province

3、，Nanjing 210 017)Abstract The paper reports the analysis of three enzymes(EST,LDH ,Fibrinolytic Enzyme) fro m two species earthworm and two parts of the earthworm by means of discontinuou s polyacrylamide gelelectrophoresis.The results showed that fibrinolytic enzyme exists in the earthworm body cav

4、ity,furthermore can reflect the specificity of species.The EST is different in the two species and two parts of the species.The LDH activity is lower in the earthworm.Key Words Earthworm, Isoenzyme, Fibrinolytic enzyme, Esterase(EST), Lactate dehydrogenase(LDH), Electrophoresis蚯蚓俗稱地龍，自古為常用中藥。近年來，特別是

5、發(fā)現(xiàn)了它具有纖溶活性后，對蚯蚓的實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究愈來愈廣泛、深入14。蚯蚓的纖溶作用受到人們的高度重視。關(guān)于該酶的分離純化及性質(zhì)研究報(bào)道很多。也有人用寡毛綱部分動物的酯酶(EST)、乳酸脫氫酶(LDH)、蘋果酸脫氫酶(MDH)同工酶來鑒定物種、研究其系統(tǒng)發(fā)生。本文研究了兩種蚯蚓及其兩個部位的蛋白電泳譜、纖溶酶譜、酯酶譜及乳酸脫氫酶譜57。1材料與儀器正蚓科愛勝蚓屬赤子愛勝蚓(Eiseniafoetida)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)飼養(yǎng)場；巨蚓科環(huán)毛蚓屬秉氏環(huán)毛蚓(Pheretima carnosa)中國藥科大學(xué)校園野生；垂直板電泳儀(Dyy-型)，北京六一儀器廠。2方法2.1樣品制備分別取成熟的赤子愛勝蚓

6、和秉氏環(huán)毛蚓洗凈、拭干，分離體壁及內(nèi)容物。內(nèi)容物加適量冷生理鹽水研磨后離心，上清液稀釋10倍備用。體壁用水洗凈后，加2倍冷生理鹽水研磨，離心取上清液備用。2.2電泳及顯色采用PAGE垂直板電泳方式，高pH不連續(xù)系統(tǒng)。分離膠濃度為10%，交聯(lián)度2.5%，電極液為pH8.7的Tris-甘氨酸緩沖液，加樣25l/孔，電壓280V，電流10mA，電泳時間3h。蛋白質(zhì)染色，EST顯色，LDH顯色方法參照文獻(xiàn)8。纖溶酶酶譜參照文獻(xiàn)9。3結(jié)果3.1蛋白電泳。蛋白電泳譜見1。1顯示樣1、樣3各有20多條帶，且多分布在偏正極一側(cè)，提示蚯蚓體腔內(nèi)容物含可溶性蛋白種類多，相對分子質(zhì)量較小，泳動快。而樣3、樣4各有1

7、0多條帶，密集分布于負(fù)極一側(cè)，提示蚯蚓體壁所含可溶性蛋白相對較少，相對分子質(zhì)量較體腔內(nèi)容物者大。1，2.Eisenia foetida body wall and body cavity3，4.Pheretima carnosa body wall and body cavityFig 1 The protein electropheregram of two species earthworm3.2纖溶酶酶譜纖溶酶酶譜見2。2樣2、樣4不顯纖溶酶帶。提示蚯蚓體壁不含纖溶酶。樣1含6條纖溶酶帶。樣3除含與樣1相似的6條酶帶外。增加了2條酶帶。其中1條相當(dāng)在樣1全部酶帶的正極一側(cè)，可見相對分子質(zhì)

8、量偏小。另一條相當(dāng)在樣1之第4與第5酶帶之間。1,2.Eisenia foetida body wall and body cavity3,4.Pheretima carnosa body wall and body cavityFig 2The fibrinolytic enzyme isoenzymeelectropheregram of two species earthw orm3.3酯酶酶譜酯酶酶譜見3。其中樣1的酶帶最多，以遷移率最高者為先，依次有A、B、C、D、E、F6條色帶。而樣2只有對應(yīng)的B、C、D及泳動略快于F的F1共4條色帶。樣3除含有對應(yīng)的C、F帶外還具有略慢于A的A1

9、帶和略快于F的F2帶共4條酶帶。樣4則僅含有對應(yīng)的B帶及略慢于F的F3帶，只2條酶帶?？梢姵嘧訍蹌衮九c秉氏環(huán)毛蚓酯酶酶譜差異較大。前者酯酶相對較豐富，提示二者親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。蚯蚓體壁中酯酶也不及體腔內(nèi)容物豐富。1,2.Eisenia foetida body wall and body cavity3,4.Pheretima carnosa body wall and body cavityFig 3 The EST isoenzyme electropheregram of two species earthworm3.4乳酸脫氫酶電泳后顯色，僅樣2和樣4各顯1條很弱的色帶。樣1和樣3則不顯色

10、。這與文獻(xiàn)報(bào)道相符。LDH多存在于肌肉組織中，體腔內(nèi)容物中幾乎不存在。脊椎動物之LDH研究報(bào)道較多，而無脊椎動物之LDH研究較少6，7。4討論蚯蚓纖溶酶的研究報(bào)道很多，但到目前為止尚未見有纖溶酶譜的描述。本文試驗(yàn)結(jié)果顯示赤子愛勝蚓有6種纖溶酶組分，這與多數(shù)文獻(xiàn)的有關(guān)描述相似，秉氏環(huán)毛蚓所含的纖溶酶組分達(dá)8種之多，有可能成為該類酶產(chǎn)品的新資源。此外，結(jié)果還提示：蚯蚓纖溶酶僅存在于蚯蚓體腔內(nèi)容物中，所以在提取時可先分離出內(nèi)容物。這樣做不但可避免多量雜蛋白被帶入，從而簡化分離純化過程，而且便于蚯蚓資源的綜合利用。由于秉氏環(huán)毛蚓個體比赤子愛勝蚓大許多倍，體壁的利用較方便也更有價值。作者簡介：易八賢，中

11、國藥科大學(xué)1989屆畢業(yè)生作者單位：易八賢李國風(fēng)何執(zhí)中（中國藥科大學(xué)，南京210009）；徐麗姍（浙江師范大學(xué)，金華321004）；曾漪青（江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，南京210017）參考文獻(xiàn)1金鳴.蚯蚓溶栓作用研究進(jìn)展.中草藥，1994，25(1)：452路英華，金汝成，吳應(yīng)文，等.鉅齒遠(yuǎn)蚓纖溶酶的分離純化及其若干性質(zhì).生物化學(xué)雜志，1988，4(2)：1663徐建民，張國楨，陳松鶴，等.赤子愛勝蚓纖維蛋白溶解酶的親和層析純化和生化特性.上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，18(4)：2524Nakajima N,Mihara H，Sumi H.Characterization of potent fibrinolytic enzymes in earthworm Lumbricus rubellus.Biosci Biotech Biochem，1993，57(10)17265 尚雅珍，許文娜.酯酶同工酶在分析亞洲玉米螺抗藥性中的應(yīng)用.生物化學(xué)與生 物物理進(jìn)展，1990，17(2)：1316譚竹鈞，韓雅莉.正蚓科三屬七種動物同工酶研究.內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué) 版)，1996，27(1)：1117許智芳.三種水棲寡毛綱EST、LDH和MDH同工酶電泳的研究.南京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然