第九章 革蘭陽性需氧和兼性厭氧桿菌鑒定

1、微生物學檢驗微生物學檢驗微生物學檢驗微生物學檢驗國家衛(wèi)生和計劃生育委員會規(guī)劃教材國家衛(wèi)生和計劃生育委員會規(guī)劃教材 第九章 革蘭陽性需氧和兼性厭氧桿菌鑒定返回總目錄返回總目錄本 章 內 容第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌1第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬2學習目標及重點學習目標： 1掌握：白喉棒狀桿菌、炭疽芽胞桿菌和產單核李斯特菌的生物學特性及臨床意義。2熟悉：白喉棒狀桿菌異染顆粒的染色方法和鑒定；炭疽芽胞桿菌與蠟樣芽胞桿菌的鑒別。3了解：紅斑丹毒絲菌的特點，與其他細菌的區(qū)別。本章重點： 白喉棒狀桿菌鑒定要點。 炭疽芽胞桿菌的致病特點及鑒定要點 產單核李斯特菌的生物學特性第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌革蘭陽

2、性無芽胞桿菌 主要包括棒狀桿菌屬（Corynebacterium）中的白喉棒狀桿菌，李斯特菌屬（Listeria）中產單核李斯特菌，丹毒絲菌屬（Erysipelothrix）中紅斑丹毒絲菌一、白喉棒狀桿菌（一）生物學特性1.形態(tài)與染色：G+，菌體細長彎曲 ，柵欄狀，異染顆粒2.培養(yǎng)特性含 有 凝 固 血 清 的 呂 氏 培 養(yǎng) 基（Loeffler medium）：細小、灰白色濕潤、圓形突起的菌落含有亞碲酸鉀血瓊脂平板：黑色菌落亞碲酸鹽血平板上菌落第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌一、白喉棒狀桿菌3.變異： 白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異4.生化反應無毒株溶原性細菌棒狀噬菌體（產生外毒素）觸

3、酶硝酸鹽還原氧化酶尿素分解吲哚試驗 葡萄糖麥芽糖+5.抵抗力：對干燥、寒冷和日光的抵抗力較其他無芽胞細菌強。在衣物、床單、兒童玩具等各種物品中生存數(shù)日至數(shù)周。在干燥的假膜中能存在3個月以上。第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌一、白喉棒狀桿菌(二) 微生物學檢驗1. 檢驗程序咽拭標本亞碲酸鉀 血平板觀察菌落特征 直接涂片 革蘭染色異染顆粒染色血平板 呂氏血清斜面 直接涂片 革蘭染色異染顆粒染色涂片染色鏡檢生化反應 毒力試驗結果報告第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌一、白喉棒狀桿菌2. 標本：咽拭子取分泌物。不能及時檢驗時，可將標本浸于生理鹽水或15甘油鹽水中保存3.鑒定（1）標本直接涂片 革蘭染色：觀察形態(tài)、染

4、色性 異染顆粒染色：觀察異染顆粒（2）分離培養(yǎng) 呂氏斜面：生長迅速，涂片鏡檢異染顆粒明顯 亞碲酸鉀血平板：黑色菌落第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌一、白喉棒狀桿菌（3）毒力測定1）體外法：可用Eleks瓊脂擴散法、SPA協(xié)同凝集、對流電泳等檢測外毒素2）體內法：用實驗動物(豚鼠、家兔)體內毒力測定（毒素抗毒素中和試驗）Elek平板第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌一、白喉棒狀桿菌(三) 臨床意義1. 致病因子：外毒素2. 所致疾?。喊缀恚毙院粑纻魅静?，乙類傳染病鼻、咽黏膜繁殖(產毒)假膜假膜脫落堵塞呼吸道 窒息炎性細胞壞死組織白喉桿菌毒素入血:全身中毒、心肌炎等3.治療：可選用青霉素等白喉病人第一節(jié) 革

5、蘭陽性無芽胞桿菌二、二、產單核李斯特菌李斯特菌屬包括產單核李斯特菌(L.monocytogenes) 此菌對人致病綿羊李斯特菌(L.ivanovii)英諾克李斯特菌(L.innocua)威爾斯李斯特菌(L.welshimeri)西爾李斯特菌(L.seeligeri)格氏李斯特菌(L.grayi)默氏李斯特菌(L.murrayi) 第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌二、產單核李斯特菌(一) 生物學特性1.形態(tài)與染色 G+球桿菌, 2025形成周鞭毛，37時鞭毛很少或無；無芽胞2.培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌、345均能生長（4冷增菌），最適3037營養(yǎng)要求不高，在含血液、血清、腹水的培養(yǎng)基生長更好。耐鹽（200

6、g/LNaCl）。血瓊脂平板：形成較小、圓形、光滑而有狹窄溶血環(huán)的菌落產單核李斯特菌血平板上菌落第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌二、產單核李斯特菌3. 生化反應：觸酶試驗（+）、氧化酶（-）、CAMP（+）、葡萄糖（+） 、麥芽糖（+） 、果糖（+）；VP （+）、MR （+）、七葉苷（+）4.抵抗力：耐鹽、耐堿、耐冷、不耐酸；對氨芐青霉素，青霉素、鏈霉素、紅霉素等敏感，對桿菌肽、多黏菌素耐藥第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌二、產單核李斯特菌(二)微生物學檢驗1.標本：血液、腦脊液、分泌物及病變組織2.染色：G+球桿菌（細胞內、外）3.分離培養(yǎng)：血液瓊脂、5%-10%CO2 、354 .診斷要點：G+球桿

7、菌、（濕片）翻筋斗樣運動、觸酶陽性、七葉苷陽性、葡萄糖（+）、MR （+）、 VP（+）第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌二、產單核李斯特菌(三) 臨床意義1.傳播途徑：糞-口傳播；垂直感染2.致病物質：溶血素O、磷脂酰肌醇-特異性磷脂酶C（PI-PLC）3.所致疾?。嚎梢鹗澄镏卸荆∷缆矢哌_30 70 該病的臨床表現(xiàn)，健康成人個體出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，新生兒、孕婦、免疫缺陷患者表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產、腦膜炎、敗血癥直至死亡第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌三、紅斑丹毒絲菌丹毒絲菌屬代表菌種紅斑丹毒絲菌(E. rhusiopathiae產單核丹毒絲菌（E.

8、 monocytogenes）扁桃體丹毒絲菌（E. tonsillarum）1.形態(tài)與染色：革蘭陽性短小桿菌，無鞭毛，無芽胞，無莢膜2.培養(yǎng)：厭氧或微需氧，血平板上形成兩種菌落：S菌落：細小、圓形、凸起有光澤（較小，毒力強）；R菌落：較大，顆粒狀、扁平、邊緣不齊（較大，毒力弱）紅斑丹毒絲菌形態(tài)血平板上菌落第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌三、紅斑丹毒絲菌3.生化反應觸酶陰性；分解乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖三糖鐵培養(yǎng)基上產H2S（突出特點）4.鑒定：通過形態(tài)染色、生化反應，特別是TSI上產生H2S，可初步鑒定是紅斑丹毒絲菌，但要與產單核李斯特菌鑒別5.臨床意義：紅丹毒絲菌病是一種急性傳染病，主要發(fā)生在魚類、

9、家畜、家禽和兔類，人類也因接觸引起感染。也可引起敗血癥和心內膜炎。近年在發(fā)達國家因污染奶制品而引起食物中毒。青霉素是治療該病的首選抗菌藥物返回章內容返回章內容第一節(jié) 革蘭陽性無芽胞桿菌芽胞桿菌屬（Bacillus）中5種與醫(yī)學相關炭疽芽胞桿菌（B. anthracis）蠟樣芽胞桿菌(B. cereus)蕈狀芽胞桿菌(B. . mycoides)巨大芽胞桿菌(B. megaterium)蘇云金芽胞桿菌(B. thuringiensis)第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬一、炭疽芽胞桿菌(一) 生物學特性1.形態(tài)與染色致病菌中最大的G+粗大桿菌，兩端平切、排列呈竹節(jié)狀、有莢膜，無鞭毛芽胞在有氧條件下形

10、成，呈橢圓形，位于菌體中央（抵抗力強）2.培養(yǎng)特性 專性需氧，營養(yǎng)要求不高普通平板：扁平、粗糙、不透明、灰白色、無光澤，邊緣不整齊的菌落(卷發(fā)狀菌落) 血平板：毛玻璃樣，無溶血或微溶血 （24h后）。有毒株形成莢膜，為M型菌落（可有拉絲現(xiàn)象）炭疽芽胞桿菌第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬一、炭疽芽胞桿菌3.生化反應葡萄糖（+）、麥芽糖（+）、海藻糖（+）、硝酸鹽還原（+）、H2S （） 、Indol （） 、C （） 、URE（）能液化明膠，沿穿刺線向四周呈放射狀生長，如倒松樹狀4.抵抗力（芽胞）很強5%石炭酸5天; 干燥土壤、皮毛中存活數(shù)年至幾十年對青霉素、紅霉素、慶大霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星等敏

11、感，頭孢菌素耐藥第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬一、炭疽芽胞桿菌(二) 微生物學檢驗1.標本 血液、嘔吐物、痰液、腦脊液、動物尸體、肉類、毛皮 注意生物安全防護！嚴禁在室外剖檢病體!2.鑒定形態(tài)和菌落特征：莢膜、竹節(jié)狀初步報告生化試驗串珠試驗核酸檢測：核酸雜交第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬炭疽芽胞桿菌檢驗程序已處理標本直接涂片增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)Ascoli試驗革蘭染色莢膜染色初步報告血平板戊烷脒瓊脂平板可疑菌落菌落涂片染色鏡檢鑒定試驗肉湯培養(yǎng)動物實驗動物死亡分離培養(yǎng)噬菌體裂解串珠試驗青霉素抑制試驗結果報告第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬一、炭疽芽胞桿菌 (三) 臨床意義1.傳染源：病畜及其制品或被污

12、染物2.傳播途徑:接觸、消化道、呼吸道3.致病因子（1）莢膜：抗吞噬，利于細菌擴散（2）炭疽毒素：主要致病和死亡原因（3）保護性抗原、致死因子、水腫因子三種蛋白復合物 損傷微血管內皮細胞，增加血管通透性水腫第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬一、炭疽芽胞桿菌 (三) 臨床意義4.所致疾病-炭疽?。ˋnthrax）皮膚炭疽：接觸感染腸炭疽：消化道感染肺炭疽：呼吸道感染5.防治措施病畜處理疫苗抗生素皮膚炭疽第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬二、蠟樣芽胞桿菌(一) 生物學特性1.形態(tài)與染革蘭陽性大桿菌，兩端鈍圓，周鞭毛，無莢膜，形成芽胞2.培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧普通平板：乳白色不透明菌落，形似“白蠟” 血平板：毛玻璃樣液體：混濁，有菌膜血平板上菌落第二節(jié) 革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬二、蠟樣芽胞桿菌(一) 生物學特性3.生化反應 葡萄糖（+）、麥芽糖（+） 、海藻糖（+） 、蔗糖（+） 、水楊素（+） 、VP （+） 、H2S （） 、Indol （） 、C （+） 、URE（）4.抵抗力：芽胞耐受10030min、干熱12060min才能殺死對氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感對