食管鱗癌組織和淋巴結(jié)中Paxillin和survivin的表達(dá)及其意義

1、食管鱗癌組織和淋巴結(jié)中Paxillin和survivin的表達(dá)及其意義          作者：王雷，平育敏，孟憲利，何明，白世祥，杜媛鯤【摘要】  目的研究Paxillin和survivin在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其與食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測24例正常食管黏膜、94例食管鱗癌和83例淋巴結(jié)組織中survivin和Paxillin的表達(dá)情況。結(jié)果原發(fā)癌組織中Paxillin表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)、浸潤深度(P<0.01)和臨床分期(P&

2、lt;0.01)等因素有關(guān)；原發(fā)癌組織中survivin與浸潤深度有關(guān)(P<0.01)；原發(fā)癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中Paxillin和survivin表達(dá)率均高于無轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織(P<0.05)； Paxillin和survivin在淋巴結(jié)中表達(dá)成正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論P(yáng)axillin和survivin在食管鱗癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中高表達(dá)，在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用，可作為評(píng)價(jià)食管鱗癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】  食管鱗癌；Paxillin；survivin；免疫組織化學(xué)Abstract：ObjectiveThe expression of P

3、axillin and survivin in esophageal carcinoma and to investigate the relationship between the expression of Paxillin， survivin and carcinogenesis and progression of esophageal carcinoma.MethodsPaxillin and Survivin expression were detected in 24 normal esophageal mucosa, 94 primary tumor tissues and

4、83 lymph nodes with SP immunohistochemistal method.ResultsThe positive expression rate of Paxillin had the relationship with invasive depth, clinical staging and metastasis of lymph node (P<0.05). survivin had the relationship with invasive depth (P<0.05) .The expression of Paxillin，survivin i

5、n positive lymph node was much higher than that in negative lymph node respectively(P<0.05). There was a positive relationship between Paxillin and survivin expression in this study (P<0.05).ConclusionPaxillin and survivin are over expressed in esophageal carcinoma.They play important roles in

6、 carcinogenesis and progression of esophageal carcinoma and can be used as valuable biomakers to evaluate biological characteristics in esophageal squamous cell carcinoma.Key words：Esophageal squamous cell carcinoma; Paxillin; survivin;Immunohistochemisty0引言樁蛋白(Paxillin)是最近發(fā)現(xiàn)的一種在局部黏附中起重要作用的細(xì)胞黏附分子，Pa

7、xillin表達(dá)的異常與腫瘤的發(fā)生有一定關(guān)系，陽性表達(dá)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)1。survivin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族的成員,近年來研究表明,survivin具有強(qiáng)大的抗細(xì)胞凋亡以及促有絲分裂作用，與腫瘤的發(fā)生演變密切相關(guān) 2,3。Paxillin在食管鱗癌中的表達(dá)的研究未見報(bào)道。有關(guān)survivin蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)，國內(nèi)外研究較少且集中在癌組織中，對(duì)淋巴結(jié)中的研究未見報(bào)道。本文采用免疫組化SP法檢測了survivin和Paxillin在食管鱗癌組織和淋巴結(jié)組織中的表達(dá)，分析兩者對(duì)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及兩者

8、的相關(guān)性。1資料與方法1.1臨床資料選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科2002年3月2004年10月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的食管鱗癌患者94例，術(shù)前均未行化、放療或其他治療。男60例，女34例，年齡3671歲，平均年齡53歲。根據(jù)UICC食管鱗癌國際TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(1997年)：0期4例，期8例，期38例，期40例，期4例； T 分級(jí)：Tis4例，T110例，T231例，T340例，T49例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組50例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組44例，術(shù)中取淋巴結(jié)組織83例，其中轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)40例，無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)43例，選擇24例正常食管黏膜組織作為正常對(duì)照組。1.2試劑與儀器Paxillin：鼠抗人單克隆抗體(5H

9、11)，應(yīng)用濃度150。survivin:兔抗人單克隆抗體（FL?142），應(yīng)用濃度175。Paxillin購自美國Newmarker公司，survivin、免疫組化SP試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。1.3試驗(yàn)方法免疫組織染色依照SP試劑盒說明進(jìn)行1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定陽性反應(yīng)物為棕黃色顆粒。Paxillin陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞膜，高倍鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)，細(xì)胞中出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。根據(jù)Speiser的標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算每張切片陽性細(xì)胞百分率，10為陽性片4。survivin染色陽性判定標(biāo)準(zhǔn)5：以胞漿和(或)胞核出現(xiàn)黃棕色染色為陽性細(xì)

10、胞,比例5%為陽性，400倍放大的顯微鏡下計(jì)數(shù)至少5個(gè)隨機(jī)視野,取平均值。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，用2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1Paxillin和survivin在正常食管粘膜和癌組織中的表達(dá)，見圖1、2Paxillin和survivin在正常食管黏膜中的表達(dá)率為4.17(1/24)和0% (0/24)；在食管原發(fā)癌組織中表達(dá)率分別為68.09(64/94)、57.45% (54/94)。2.2Paxillin、survivin在原發(fā)癌組織中的表達(dá)與腫瘤臨床病理因素之間的關(guān)系見表1。2.2.1Paxillin、 survivin表達(dá)與浸潤深度的關(guān)

11、系Paxillin表達(dá)在組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01):T3組高于T1組(P<0.01)及T2組(P<0.05)；T4組高于T1組(P<0.01)及T2組(P<0.05)；T3組與T4組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；T2組與T1組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。survivin表達(dá)在組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01):在T3?T4組高于T1組(P<0.01)及T2組(P<0.01)；T2組與T1組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 2.2.2Paxillin、 survivin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系見圖3、4有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌組織中的

12、Paxillin表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌組織中的survivin表達(dá)率與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。2.2.3Paxillin、survivin表達(dá)與臨床分期的關(guān)系Paxillin表達(dá)在組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01): 期組表達(dá)率高于0期組 (P<0.05);     期組高于0期(P<0.05)；期組和期組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。survivin表達(dá)在組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.3Paxillin、 surviv

13、in在淋巴結(jié)組織中的表達(dá)見表2。表1Paxillin、survivn在94例食管鱗癌中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系（略）表2Paxillin、survivn在食管原發(fā)癌、轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)和未轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中的表達(dá)（略）2.3.1Paxillin在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中表達(dá)率與原發(fā)癌組織相比兩者間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；Paxillin在無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中的表達(dá)率與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和原發(fā)癌組織比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。2.3.2survivin在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)組織中的表達(dá)率與原發(fā)癌組織相比兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P>0.05)；survivin在無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)組織中表達(dá)率與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和原發(fā)

14、癌組織比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。2.4Paxillin和survivin表達(dá)的相關(guān)性Paxillin表達(dá)陽性者, survivin的陽性表達(dá)率69.77%(33/47);Paxillin表達(dá)陰性者, survivin的陽性表達(dá)率22.5%(9/40)，兩者表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，見表3。表3Paxillin和survivin在淋巴結(jié)組織中表達(dá)的關(guān)系（略）3討論P(yáng)axillin是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要的細(xì)胞黏附因子,是致瘤性酪氨酸激酶的一種底物，與整合素相關(guān)聯(lián)，構(gòu)成細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)局部黏附關(guān)鍵部位，調(diào)節(jié)細(xì)胞的移動(dòng)和播散等功能， 從而提高腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的能力6,

15、7。本研究發(fā)現(xiàn)，Paxillin的表達(dá)與浸潤深度和臨床分期有關(guān)，說明腫瘤細(xì)胞分泌的Paxillin有助于腫瘤的局部浸潤，促進(jìn)腫瘤對(duì)周圍組織的侵襲，加速腫瘤的發(fā)展。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組其原發(fā)癌組織中Paxillin表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，且Paxillin呈陽性表達(dá)的食管鱗癌組織約2/3發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而Paxillin表達(dá)陰性的食管鱗癌組織中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的只占1/4左右，說明食管鱗癌組織中Paxillin陽性表達(dá)可能使腫瘤細(xì)胞與其周圍的非腫瘤細(xì)胞之間的局部黏附作用加強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生遷移進(jìn)而形成轉(zhuǎn)移。Paxillin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中呈高表達(dá)，可能存在如下機(jī)制：（1）表達(dá)Paxillin的

16、癌細(xì)胞較容易侵入血管和淋巴管；（2）癌細(xì)胞進(jìn)入轉(zhuǎn)移灶后高表達(dá)Paxillin使其黏附力增加、遷移力下降從而更容易在新的部位生存和生長；（3）生存環(huán)境的改變誘發(fā)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞表達(dá)Paxillin。survivn僅在正常成人胸腺和胎盤中少量表達(dá)，而在人類多種常見腫瘤中廣泛表達(dá)，其過度表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)8。應(yīng)用RT?PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)，survivn在癌組織中的表達(dá)是一個(gè)漸進(jìn)性的過程，隨著正常細(xì)胞向癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，survivn的表達(dá)逐漸增高9。Nemoto等10研究表明survivn在食管癌的表達(dá)明顯高于正常組織，survivn mRNA的高表達(dá)可作為食管鱗癌復(fù)發(fā)的標(biāo)志。本研究發(fā)現(xiàn)，隨浸潤深度

17、的增加，survivn表達(dá)率呈上升趨勢，說明survivn的表達(dá)不僅存在于腫瘤惡性轉(zhuǎn)化的早期，而且與腫瘤的發(fā)展趨勢有關(guān)，陽性表達(dá)者可能有較強(qiáng)的侵襲性和預(yù)后不良。survivn在淋巴結(jié)中高表達(dá)，可能有以下原因：（1）轉(zhuǎn)移入淋巴結(jié)中的癌細(xì)胞通過表達(dá)survivn使其凋亡減少，促進(jìn)癌細(xì)胞增生并進(jìn)一步侵襲擴(kuò)散；（2）由于survivn的表達(dá)具有細(xì)胞周期依賴性，它主要在G2/M期表達(dá)，而G2/M期的細(xì)胞正是細(xì)胞有絲分裂快速增殖期，所以推測在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中，進(jìn)入G2/M期的細(xì)胞較多，導(dǎo)致survivn表達(dá)水平較高；（3）研究證明，VEGF可引起survivn表達(dá)量增加11，而食管鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中VEGF呈高

18、表達(dá)12，我們推測兩者可能存在正反饋調(diào)節(jié)，VEGF表達(dá)誘導(dǎo)survivn上調(diào)，survivn表達(dá)可能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移。Paxillin和survivn在食管鱗癌淋巴結(jié)中高表達(dá)，且呈正相關(guān)性，提示食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟的生物學(xué)行為改變的過程其生長和侵襲轉(zhuǎn)移過程中可能起協(xié)同作用。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是食管鱗癌主要轉(zhuǎn)移途徑之一，許多患者術(shù)前即存在著微小轉(zhuǎn)移，傳統(tǒng)病理學(xué)檢查受靈敏度限制可能無法檢出微轉(zhuǎn)移，對(duì)切除的標(biāo)本進(jìn)行Paxillin和Survivin免疫組化染色可以提高檢測的靈敏度并指導(dǎo)臨床治療。即使HE染色顯示淋巴結(jié)為陰性，而免疫組化染色顯示其為陽性表達(dá)，臨床上可

19、提示淋巴結(jié)組織中可能有微小轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)移潛能比較大。survivn和CD44v6在原發(fā)癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中高表達(dá)可能成為抑制腫瘤生長和防治腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物靶點(diǎn)，針對(duì)性開發(fā)新的抗腫瘤藥物和靶向治療將具有深遠(yuǎn)的意義?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1Schaller MD. Paxillin: a focal adhesion?associated adaptor protein J. Oncogene 2001, 20(44): 6459?6472.2Kania J,Konturek SJ,Marlicz K,et al.Expression of survivn and caspase?3 in

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