費(fèi)林試劑熱滴定定糖法實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告費(fèi) 林 試 劑 熱 滴 定 定 糖 法姓 名 于佳喜 學(xué) 號 2 學(xué) 院 生命科學(xué)學(xué)院 年 級 2013級生物基地班 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)并掌握動物細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。 2. 了解并掌握用組織塊貼壁培養(yǎng)法和消化細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行動物細(xì)胞原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法。 3. 熟練掌握動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法。4. 學(xué)習(xí)細(xì)胞生死狀態(tài)鑒別的方法。5. 了解細(xì)胞生死狀態(tài)鑒別的原理。 6. 熟悉和掌握各種鑒別細(xì)胞生死狀態(tài)方法的判定特征。 7. 掌握細(xì)胞技術(shù)方法，計(jì)算細(xì)胞存活率二、實(shí)驗(yàn)原理還原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的單糖和某些二

2、糖(如：乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)還原，而糖本身被氧化成各種羥酸類化合物。該特性常用于糖的定性和定量測定。實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法，費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05 g/mL的硫酸銅和次甲基藍(lán)(氧化還原指示劑)；乙液含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 g/mL的氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。當(dāng)甲、乙兩溶液混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物，該含Cu2+絡(luò)合物的溶液，被還原后得到磚紅色Cu2O的沉淀。因此，斐林試劑常用于鑒

3、定可溶性的還原性糖的存在與否。 費(fèi)林試劑熱滴定定糖法的基本原理,是在沸熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費(fèi)林試劑時, 將費(fèi)林試劑中的銅離子還原為氧化亞銅, 以亞甲基藍(lán)為指示劑, 稍過量的還原糖立即將藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無色的還原型亞甲基藍(lán), 指示滴定終點(diǎn)。三、實(shí)驗(yàn)器材1. 試劑1.1費(fèi)林試劑(定量)：費(fèi)林甲液：稱取15克硫酸銅(CuSO4·5H2O)和0.05克次甲基藍(lán)，溶于1000毫升水中。費(fèi)林乙液：稱取50克酒石酸鉀鈉、54克氫氧化鈉和4克亞鐵氰化鉀溶于1000毫升水中。1.2 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：稱取葡萄糖(預(yù)先在105烘干，

4、恒重)1克，用少量蒸餾水溶解后加入8毫升濃鹽酸(防止微生物生長)，再用蒸餾水定容至1000毫升。1.3 6N鹽酸溶液。1.4 10%氫氧化鈉溶液。1.5碘試劑：將碘化鉀20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀釋10倍。1.6 PH114試紙。2. 器材(1) 25毫升堿滴定管。 (6) 萬能夾(2) 移液管(5、10毫升) (7) 鐵架臺(3) 100毫升溶量瓶 (8) 點(diǎn)滴板(4) 100毫升錐形瓶 (9) 水浴鍋(5) 滴管 (10) 600瓦電爐 五、操作步驟1. 空白測定準(zhǔn)確吸取費(fèi)林甲、乙液各5毫升和蒸餾水5毫升放入250毫升的錐形瓶中，再用滴定管加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液，混勻后

5、放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶內(nèi)溶液在2分鐘內(nèi)達(dá)到沸騰，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色消失為止。沸騰前加入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量與沸騰后滴定時所用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量的總和，就是測定空白時耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)(V1)。全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進(jìn)行，一般應(yīng)在3分鐘內(nèi)完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗(yàn)時確定，同時練習(xí)掌握操作條件2. 總糖的測定 準(zhǔn)確稱取面粉1克，加入6N鹽酸10毫升，蒸餾水15毫升，混勻。沸水浴加熱半小時后，取出幾滴水解液用碘化鉀-碘溶液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后

6、用10%氫氧化鈉中和至中性溶液，過濾，濾液定容至100毫升。準(zhǔn)確吸取該溶液10毫升，移入100毫升容量瓶內(nèi)并定容至刻度，即為測定總糖的樣品液。準(zhǔn)確吸取樣品液5毫升放于100毫升錐形瓶內(nèi)，加入費(fèi)林甲液、乙液各5毫升，混勻，然后按測定空白同樣操作進(jìn)行滴定，記下耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。3. 計(jì)算 (V1-V2)× 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升) ×稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)%= ×100 稱取的樣品量(克)×5 式中：V1為測定空白時耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)。 V2為測定總糖時耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。六、注意事項(xiàng)1. 費(fèi)林試劑甲液和乙液應(yīng)分別貯存，用時才混合，否則

7、酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。2. 滴定必須是在沸騰條件下進(jìn)行，其原因一是加快還原糖與Cu2的反應(yīng)速度；二是亞甲基藍(lán)的變色反應(yīng)是可逆的，還原型的亞甲基藍(lán)遇空氣中的氧時會再被氧化為氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中的氧所氧化。保持反應(yīng)液沸騰可防止空氣進(jìn)入，避免亞甲基藍(lán)和氧化亞銅被氧化而增加消耗量。3. 滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進(jìn)入反應(yīng)溶液中。七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果空白滴定樣品滴定次數(shù)123平均123平均費(fèi)林甲/ml555/555/費(fèi)林乙/ml555/555/蒸餾水/ml555/樣液/ml/555/預(yù)

8、加葡萄糖/ml666/444/消耗葡萄糖/ml10.4010.4210.3810.407.1257.1007.1287.118面粉樣品質(zhì)量：1.0123g (V1-V2)× 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升) ×稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)%= ×100 稱取的樣品量(克)×5=64.84%八、分析與討論1. 無論做什么實(shí)驗(yàn)，如果用到電爐加熱，一定要在電爐下面墊上大理石板，以免溫度過高損壞實(shí)驗(yàn)桌面。2. 滴定時要注意滴定終點(diǎn)，在滴定過程中，應(yīng)注意在顏色由藍(lán)色變?yōu)樽仙珪r，應(yīng)減慢滴速，當(dāng)顏色變?yōu)橥咙S色時，立即停止加入葡萄糖，顏色會再度變回紫色時，不應(yīng)再滴加葡萄糖。在本

9、次實(shí)驗(yàn)中，我組滴定終點(diǎn)起初把握不準(zhǔn)確，結(jié)果有幾次滴定誤差較大：空白滴定消耗葡萄糖量（單位毫升）：10.40 10.42 10.36 10.38樣品滴定消耗葡萄糖量（單位毫升）：7.425 7.750 7.200 7.125 7.100 7.1283. 在樣品測定中，有幾次滴定，消耗葡萄糖量逐漸遞減，分析原因可能如下：3.1 滴定終點(diǎn)觀察不準(zhǔn)確；3.2 使用移液管滴加費(fèi)林試劑時，由于管尖端碰壁，再次使用時導(dǎo)致樣液被稀釋；4. 在實(shí)驗(yàn)初始溶解淀粉時，要求使用200mL錐形瓶，但是我們只有300mL和100mL的錐形瓶，因此我們使用了100mL錐形瓶，希望藉此增大接觸面積，加快水解速度，結(jié)果在水浴加熱過程中因該錐形瓶太小，結(jié)果導(dǎo)致傾斜，水進(jìn)入瓶內(nèi)，因此又重新選用了300mL錐形瓶。之所以出現(xiàn)此次失誤，是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)不夠充分，不熟悉實(shí)驗(yàn)儀器，沒有考慮到錐形瓶和水浴鍋的大小。5. 此次實(shí)驗(yàn)我組測得葡萄糖含量為64.84%，測得含量偏低。經(jīng)過查閱資料，每 100g面粉中含：蛋白質(zhì)12.0克脂肪0.8克 碳水化合物70克 熱量339千卡 無機(jī)鹽類1.5克 磷180毫克 鈣22毫克鐵7.6毫克而面粉中淀粉水解后測定還原糖含量，可達(dá)88.3%分析含量偏低原因可能如下：1. 在稱取面粉時候，濾紙上有少許淀粉未倒干凈，或者電子天平稱量不準(zhǔn)