2019生物競(jìng)賽-生物化學(xué)-13酶的應(yīng)用及研究方法-楊榮武《生物化學(xué)原理》

1、生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武第十三章第十三章 酶的應(yīng)用及研究方法酶的應(yīng)用及研究方法生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武提綱提綱一、酶的活力測(cè)定酶活力的表示方法酶活力測(cè)定的方法二、酶的分離和純化三、酶工程固定化酶人工酶定點(diǎn)突變酶雜交酶1. 抗體酶生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武酶的活力酶的活力 酶活力（enzyme activity）也稱為酶活性，是指酶的催化能力。 酶活力單位的定義：1個(gè)U是指在最適條件下每分鐘催化1微摩爾底物轉(zhuǎn)化的酶量,或者1個(gè)katal（kat）被定義為每

2、秒鐘催化1分子底物轉(zhuǎn)化的酶量（1 kat = 6107U，1U=16.6710-9kat）。 比活性或比活力（specific activity）來(lái)表示，它是指單位重量（通常是每毫克）酶所含有的活力單位數(shù) 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武酶活力測(cè)定的方法酶活力測(cè)定的方法 測(cè)活基本原理：測(cè)活基本原理： 測(cè)定一種酶的活力實(shí)際上就是測(cè)定它所催化的化學(xué)反應(yīng)的最佳反應(yīng)速度。而測(cè)定反應(yīng)速度的方法原則上有兩種，一種是檢測(cè)單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量，另一種是測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的增加量。 測(cè)活基本條件：測(cè)活基本條件：反應(yīng)條件為最適條件，包括最適pH、最適溫度和最適離子強(qiáng)度等反應(yīng)速度為初速度底物

3、濃度過(guò)量。 具體測(cè)定方法：具體測(cè)定方法：直接測(cè)定法（direct assay） 間接測(cè)定法（indirect assay） 偶聯(lián)測(cè)定法（coupled assay）生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武細(xì)胞色素氧化酶活力的直接測(cè)定細(xì)胞色素氧化酶活力的直接測(cè)定 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武二氫乳清酸脫氫酶的間接測(cè)定二氫乳清酸脫氫酶的間接測(cè)定 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武己糖激酶活力的偶聯(lián)測(cè)定己糖激酶活力的偶聯(lián)測(cè)定 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武酶蛋白純化的一般流程酶蛋白純化的一般流程 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原

4、理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武酶純化表（酶純化表（purification table）酶溶液體積（ml）酶溶液蛋白質(zhì)含量（mg/ml）酶溶液活性（U/ml）酶總量或酶總活性（U）=酶活力（U/ml）體積（ml）比活性（U/mg）=酶活力（U/ml）/蛋白質(zhì)量（mg/ml）總蛋白（mg）=酶溶液蛋白質(zhì)含量（mg/ml）體積（ml）得率（%）=每一步純化后的酶總量/每一步純化之前的酶總量100%；純化倍數(shù)（purification factor）=每一步純化后的酶比活性/每一步純化之前的酶比活性。 酶純化表示例酶純化表示例生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武固定化酶固定化酶 是指將一種可溶性酶與不溶性的有機(jī)或無(wú)機(jī)基質(zhì)結(jié)合，或者將其包埋到特殊的具有選擇透過(guò)性的膜內(nèi)，從而提高酶的穩(wěn)定性、便于重復(fù)和持續(xù)使用。與可溶性酶相比，固定化酶具有方便、經(jīng)濟(jì)和穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武人工酶人工酶 也稱為人工合成酶（synzyme），它們一般是具有類似酶活力的合成多聚物或寡聚物，有時(shí)還包括具有酶活力的天然蛋白的衍生物。 生物競(jìng)賽-生物化學(xué)原理（結(jié)構(gòu)生物化學(xué)）-南京大學(xué)楊榮武雜交酶雜交酶 現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展已允許人們將兩種不同的生物分子融合在一起，以獲得具有新