1板藍根顆粒微生物限度檢查檢驗方法驗證方案版

1、1.概述1.1板藍根顆粒是中國藥典2015年版一部品種，批準文號：國藥準字Z42020660，其處方由板藍根組成，具有清熱解毒，涼血利咽之功效，用于肺胃熱盛所致的咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫脹；急性扁桃體炎、腮腺炎見上述證候者。有效期：18個月。1.2根據劑型與產品處方判斷，板藍根顆粒的微生物限度檢查內容應包括需氧菌總數計數、霉菌和酵母菌總數計數、大腸埃希菌檢查；根據板藍根顆粒的成分和歷史驗證數據分析，該產品無明顯的抑菌活性，擬采用“平皿法”進行微生物限度檢查，采用“常規(guī)法”進行控制菌檢查。 2.目的確認所采用的方法適用于該產品的微生物計數，以確保測定方法的可靠性，確保檢驗結果的準確可靠。若檢驗

2、程序或產品發(fā)生變化可能影響檢驗結果時，計數方法應重新進行適用性試驗。3. 依據中國藥典2015年版四部“非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法”、“非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法”、“非無菌產品微生物限度標準”。 4.范圍本驗證方案適用于公司板藍根顆粒微生物限度檢查檢驗方法的適用性試驗。5.職責5.1驗證領導小組5.1.1負責驗證方案的審批。5.1.2負責驗證的協調工作，以保證本驗證方案規(guī)定項目的順利實施。5.1.3負責驗證數據及結果的審核。5.1.4負責驗證報告的審批。5.1.5負責發(fā)放驗證證書。5.2質量部5.2.1負責驗證所需的培養(yǎng)基、樣品、菌液、緩沖液等的準備。5.2.2負責取

3、樣及對樣品的檢驗。5.3項目驗證小組5.3.1負責擬訂驗證方案。5.3.2負責驗證方案的實施和收集各項驗證試驗記錄，并對試驗結果進行分析后，起草驗證報告，報驗證領導小組。6.驗證實施條件6.1驗證方案培訓：在驗證實施前，應對參與驗證的人員進行驗證方案以及與驗證相關的文件進行培訓，確保相關人員掌握了驗證的相關要求與知識。6.2微生物限度檢測室：檢驗所使用的檢測室應經過HVAC系統(tǒng)確認，并符合要求。6.3檢驗用水：驗證過程使用的純化水其制備系統(tǒng)應經過確認并符合要求，純化水質量應經過檢驗并符合中國藥典2015年版二部的要求。6.4檢驗儀器設備：驗證涉及的檢驗儀器（設備）與檢驗方法，應經過技術監(jiān)督局校

4、驗合格或者公司確認/驗證合格。6.5培養(yǎng)基：驗證所使用的培養(yǎng)基應經過培養(yǎng)基的適用性檢查，其結果符合中國藥典的相關要求。見附件2:培養(yǎng)基確認。6.6驗證菌種：驗證所使用的菌種，其種類與傳代次數應符合中國藥典的相關要求。菌種情況見附件3:菌種確認。7.合格標準7.1在需氧菌、霉菌及酵母菌計數的三次獨立平行試驗中，試驗組菌落數減去供試品對照組菌落數的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.52范圍內。7.2在控制菌檢查的試驗中試驗組應檢出試驗菌，陽性對照組應檢出試驗菌，陰性對照組不得檢出試驗菌。8.驗證方法8.1菌液制備：8.1.1取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮

5、培養(yǎng)物各1ml,分別加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml，10倍遞增稀釋至10-5-10-7。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。8.1.2取1ml上述制備的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液分別注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。8.1.3、取1ml上述制備白色念珠菌、黑曲霉菌液注入平皿中

6、，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。8.1.4結果：見附件4:菌液濃度確定。8.2需氧菌、霉菌和酵母菌計數方法適用性試驗8.2.1、供試液制備：稱取供試品10g,用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基稀釋至100ml，制成1:10供試液。8.2.2、試驗組：吸取1:10的供試液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗菌懸液后搖勻。8.2.3、菌液對照品：吸取稀釋液胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml，共5份，每份中加入與試驗組相同的菌懸液后搖勻。8.2.4、試驗組和菌液對照組搖勻后，分別從所有試驗菌試管中吸取1ml注入直徑90mm的平皿中，傾注胰酪大豆胨固體培養(yǎng)基；

7、另分別吸取白色念珠菌1ml注入直徑90mm的平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；平行2份。 8.2.5、供試品對照組：吸取1:10的供試液1ml注入直徑90mm的平皿中，平行四份，其中兩個平皿中注入胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，另兩個注入沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，搖勻。8.2.6、將以上平皿分別置3035或2025培養(yǎng)，需氧菌培養(yǎng)不超過3天，真菌培養(yǎng)不超過5天，在3天和5天分別進行計數。8.2.7、計算公式：8.2.8、試驗結果：8.2.8.1見附件5:需氧菌總數計數方法適用性檢查結果8.2.8.2附件6:霉菌和酵母菌總數計數方法適用性檢查結果8.3控制菌檢查（大腸埃希菌）供試液制備：同“需氧菌、霉菌和酵母

8、菌計數方法適用性試驗”供試液制備。試驗組：取1：10供試液10ml和100cfu大腸埃希菌菌液加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng)1824h；取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244培養(yǎng)2448h；取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872h。陽性對照：取100cfu大腸埃希菌菌液加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，其他同試驗組。陰性對照：取100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，3035培養(yǎng)1824h；其他同試驗組。8.3.5結果：見附件6:大腸埃希菌方法適用性檢查結果9.異常情況與偏差處理：當出現偏差時，應按偏差處理管理規(guī)程

9、進行處理。10.驗證結果評定、結論與建議驗證小組組長負責收集各項驗證、試驗記錄，根據驗證、試驗結果對驗證效果進行綜合評審，起草驗證報告、做出驗證結論。對驗證結果的評審應包括一下內容：10.1驗證試驗是否有遺漏？10.2驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據以及是否經過批準？10.3驗證記錄是否完整？10.4驗證試驗結果是否符合標準要求？偏差及對偏差的說明是否合理？是否需要進一步補充試驗？11.附件11.1 附件1:驗證實施條件確認 11.2 附件2:培養(yǎng)基確認11.3 附件3:菌種確認11.4 附件4:菌液濃度確定11.5 附件5:需氧菌總數計數方法適用性檢查結果11.6 附件6:霉

10、菌和酵母菌總數計數方法適用性檢查結果11.7 附件7:大腸埃希菌方法適用性檢查結果11.8 附件8:驗證結果審批表11.9 附件9:人員培訓記錄附件1： 設施設備驗證確認設施設備名稱驗證報告編號驗證結果實驗室HVAC系統(tǒng)純化水系統(tǒng)LDZX-40A型立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器PSH-500A型生化培養(yǎng)箱303AS-2型電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺確認結論： 確認人： 確認日期：附件2： 培養(yǎng)基確認培養(yǎng)基名稱來源批號適用性檢查結果胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基/胰酪大豆胨液體對照培養(yǎng)基/沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基/麥康凱液

11、體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基麥康凱液體對照培養(yǎng)基/麥康凱瓊脂對照培養(yǎng)基/確認結論： 確認人： 確認日期：附件3： 菌種確認培養(yǎng)基名稱來源批號金黃色葡萄球菌CMCC(B) 26 003銅綠假單胞菌CMCC(B ) 10 104枯草芽孢桿菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(F ) 98 001大腸埃希菌CMCC(B) 44 102黑曲霉CMCC(B) 98 003確認結論： 確認人： 確認日期：附件4：菌液濃度確定10-310-410-510-610-7銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽孢桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1皿2白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿

12、2黑曲霉（沙氏）皿1皿2結論： 根據要求，菌數要控制在每1ml中含菌數在100cfu，因此，我們確定菌液制備：銅綠假單胞菌： 稀釋 金黃色葡萄球菌: 稀釋 大腸埃希菌： 稀釋 枯草芽孢桿菌: 稀釋 白色念珠菌（胰酪）: 稀釋 白色念珠菌（沙氏）: 稀釋黑曲霉（胰酪）：稀釋 黑曲霉（沙氏）： 稀釋 檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日附件5:需氧菌總數計數方法適用性檢查結果樣品批號：菌種菌液對照組試驗組稀釋度：1:10比值（0.5-2）3天5天3天5天3天5天金黃色葡萄球菌/銅綠假單胞菌/枯草芽孢桿菌/白色念珠菌黑曲霉供試品對照組：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：（ ）CFU

13、/平皿1， （ ）CFU/平皿2陰性對照組：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：（ ）CFU/平皿1， （ ）CFU/平皿2檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日附件6:霉菌和酵母菌總數計數方法適用性檢查結果樣品批號：菌種菌液對照組試驗組比值（0.5-2）3天5天3天5天3天5天白色念珠菌黑曲霉供試品對照組：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：（ ）CFU/平皿1， （ ）CFU/平皿2陰性對照組：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：（ ）CFU/平皿1， （ ）CFU/平皿2檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日附件7:大腸埃希菌方法適用性檢查結果樣品批號：皿號麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基檢驗結果試驗組12陽性對照組12陰性對照組12檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日附件8:驗證結果審批表驗證對象驗證開始日期驗證結束日期評審意見（在方框中打）1、驗證實驗有否遺漏 遺漏 未遺漏2、驗證實施過程中對驗證方案有無修改 有修改 無修改3、方案修改的原因 經過批準 未經批準4、驗證記錄是否完整 完整 不完整5、是否出現偏差 出現偏差 未出現偏差6、對偏差的說