蛋白質鹽析實驗注意事項及實驗步驟_第1頁
蛋白質鹽析實驗注意事項及實驗步驟_第2頁
蛋白質鹽析實驗注意事項及實驗步驟_第3頁
全文預覽已結束

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、蛋白質鹽析實驗考前須知及實驗步驟蛋白質鹽析實驗考前須知及實驗步驟一、考前須知：1. 鹽析的成敗決定于溶液的pH值與離子強度 ,溶液pH值越接近蛋白的等電點 ,蛋白質越容易沉淀。2. 鹽析一般用的硫酸銨 ,容易吸潮 ,因而在使用前 ,一般先磨碎 ,平鋪放入烤箱內60攝氏度烘干后再稱量 ,這樣更準確。3. 在參加鹽時應該緩慢均勻 ,攪拌也要緩慢 ,越到后來速度應該更注意緩慢 ,如果出現(xiàn)一些未溶解的鹽 ,應該等其完全溶解后再加鹽 ,以免引起局部的鹽濃度過高 ,導致酶失活。4. 鹽析后最好攪拌40分鐘到一個小時而且再在冰浴中放置一段時間。3.5為了防止鹽對酶的影響 ,一般脫鹽處理后再測酶活性。5. 鹽

2、析后的蛋白質最好盡快脫鹽處理 ,以免變性 ,透析較慢 ,一般可用超濾或者G-25 ,G-50 處理。6. 一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸銨濃度在70%左右。二、實驗步驟：蛋白質鹽析常用的中性鹽 ,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。 其中應用最多的硫酸銨 ,由下表可以看出：它的優(yōu)點是溫度系數(shù)小而溶解度大(20度時飽和溶液為754克/升;0度時飽和溶解度為706克/升) ,在這一溶解度范圍內 ,許多蛋白質和酶都可以鹽析出來;另外硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好 ,不易引起蛋白質變性。硫酸銨溶液的pH常在4.5-5.5之間 ,當用其他pH值進行鹽析時 ,需用硫酸或氨水調節(jié)。表1 幾種鹽在

3、不同溫度下的溶解度(克/100毫升水)02080100 (NH4)2SO470.675.495.3103Na2SO44.918.943.342.2NaH2PO41.67.893.8101飽和硫酸銨法：1. 取x ml血清加x ml生理鹽水 ,于攪拌下逐滴參加2xml飽和硫酸銨 ,硫酸銨的終飽和度為50%。2. 4 ,3h以上 ,使其充分沉淀離心(3000rpm),20min,充上清 ,以xml生理鹽水溶解沉淀 ,再逐滴加飽和硫酸銨x/2ml。3. 置43h以上 ,此時 ,(NH4)2SO4的飽和度為33%重復上述第二步過程12次。末次離心后所得沉淀物為蛋白 ,以0.02%mol/L pH7.4PBS溶解至xml裝入透析袋。4. 對PBS充分透析、換液3次 ,至萘氏試劑測透析外液無黃色 ,即無NH4+為止。蛋白質在用鹽析沉淀別離后 ,需要將蛋白質中的鹽除去 ,常用的方法是透析 ,即把蛋白質溶液裝入透析袋內(常用的是玻璃紙) ,用緩沖液進行透析 ,并不斷的更換緩沖液 ,因透析所需時間較長

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論