紫丁香葉中丁香苦苷時空變化規(guī)律的研究

1、    紫丁香葉中丁香苦苷時空變化規(guī)律的研究作者：趙海鵬，王振月，唐先明，候素云，王宗權(quán)，門敬菊、【摘要】 目的 分析 紫丁香葉中丁香苦苷的含量隨月份和空間的動態(tài)變化 規(guī)律 ，為紫丁香葉及其制劑的開發(fā)提供 科學(xué) 依據(jù)。 方法 采用高效液相色譜法，甲醇水(3070)等度洗脫，測定了紫丁香在不同生長發(fā)育期、同一生長期的不同空間紫丁香葉中丁香苦苷的含量。結(jié)果不同生長期和不同空間的紫丁香葉中的丁香苦苷含量動態(tài)變化具有一定規(guī)律。結(jié)論  研究 結(jié)果可為紫丁香葉藥材的生產(chǎn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和最佳采收期的確定提供科學(xué)依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】 紫丁香；丁香苦苷；

2、 時空變化規(guī)律； 高效液相色譜Abstract：ObjectiveTo provide scientific basis for exploiting new resource of Syringa oblata Lind1., the regularity of change on syringopicroside in leaves of S.oblata with its different months and sites was studied. MethodsHPLC method was applied to measure the content of syringopicro

3、side in different months and parts. Results The  syringopicroside in leaves of S. oblata. in different stages and parts may have regular changes in content. ConclusionThe results of the study can provide references for the production, establishing the quality standard and the selection of

4、optimum harvesting time of S. oblata Lind1.Key words：Syringa oblata Lind1.； Syringopicroside; Spatiotemporal characteristics; RPHPLC紫丁香Syringa oblata Lind1.為木樨科丁香屬落葉灌木或小喬木。它抗逆性強、分布廣，主要分布在我國的東北、華北和西北。紫丁香的葉可入藥，味苦，性寒，有清熱解毒、利濕退黃的作用，主治急性痢疾、黃疸性肝炎、火眼等1。近幾年研究表明紫丁香具有抗菌消炎、抗病毒和保肝利膽等生物活性2。紫丁香鮮葉制成的溶液，對弗氏痢疾桿菌進(jìn)行體外

5、抑菌試驗，效果較強；用于防治菌痢，既 經(jīng)濟(jì) ，又便于推廣。用紫丁香葉 治療 急性黃疸型肝炎，其療程短，退黃作用顯著3。紫丁香葉的活性物質(zhì)基礎(chǔ)主要為酪醇、3,4二羥基苯乙醇、對羥基肉桂酸、3,4二羥基苯甲酸、丁香苦苷等4。近幾年關(guān)于紫丁香葉的研究多見于化學(xué)成分研究方面5，而對于其不同生長期及空間丁香苦苷含量的動態(tài)變化方面的研究 目前 尚無人涉及。為了更好地綜合利用紫丁香葉藥材資源,本研究選取紫丁香葉中其中一種重要的生物活性成分丁香苦苷作為指標(biāo)，測定其含量隨月份和空間的動態(tài)變化規(guī)律，以期為紫丁香葉最佳采收期及采收部位的確定提供 理論 依據(jù)和實踐指導(dǎo)。1 材料與方法1.1 材料紫丁香Syringa

6、oblata Lind1.葉采自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)校園內(nèi)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與開發(fā)教研室王振月教授鑒定為Syringa oblata Lindl。丁香苦苷從植物紫丁香葉中提取分離得到，經(jīng)波譜分析鑒定結(jié)構(gòu)，歸一化法 計算 ，含量在98%以上。1.2 儀器與試劑Waters高效液相色譜儀（Waters996型泵，2487型雙波長檢測器），Empower工作站；色譜柱Symmetry C18（150 mm×3.9 mm，5 m），預(yù)柱Phenomenex ODSC18(4 mm×3.0 mm)；美國Dikma微孔濾膜（0.45 m）；瑞士Mettler AE 240 電子

7、天平；LDZ4-2自動平衡離心機(jī)（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）。甲醇為美國Dikma公司產(chǎn)品，色譜純；水為娃哈哈純凈水；其它所用試劑均為分析純試劑。1.3 取樣方法1.3.1 同一植株不同生長時期紫丁香葉的取樣方法選取同一紫丁香植株的中間部分的枝條進(jìn)行隨機(jī)采樣，對其進(jìn)行標(biāo)記，分別在5月10日、5月16日、6月20日、7月20日、9月1日、9月20日、10月3日、10月8日進(jìn)行采樣，取樣時從整個枝條上均勻摘取葉片(不含葉柄),混合后作為該時期的樣品。1.3.2 同一生長時期不同空間紫丁香葉的取樣方法按高度不同將紫丁香樹冠依次劃分為上、中、下3部分，按照陽光照射的位置將樹的東面和南面劃分為陽面，剩余為陰

8、面，具體劃分見圖1。2 結(jié)果2.1 色譜條件流動相A為甲醇，流動相B為水，甲醇水（3070）等度洗脫條件；流速1 ml·min-1；檢測波長221 nm；柱溫25；進(jìn)樣量10 l。色譜圖見圖2。2.2 對照品溶液的制備精密稱取丁香苦苷對照品適量，溶于甲醇配制成濃度依次為0.005，0.05，0.10，0.20，0.30，0.40 mg·ml-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量X(g)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y =13 009 844.292 7X31 673.057 2，r= 0.999 5 (0.254.0 g

9、)。2.3 供試品溶液的制備取5 g紫丁香葉粉(60減壓干燥至恒重)，精密稱定，加50 ml蒸餾水浸泡30 min，沸水浴加熱回流3次(均50 ml/次，回流1 h)，濾過，濾液合并，減壓濃縮至10 ml，調(diào)70%醇沉靜置24h后離心取上清液，減壓回收乙醇至10 ml，醋酸乙酯萃取3次，10 ml/次，合并萃取液并回收至干，殘渣用甲醇溶解并定容至25 ml。0.45 m 微孔濾膜濾過，備用。2.4 精密度實驗取同一份對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果丁香苦苷峰面積的積分值的RSD為2.17%，表明精密度良好。2.5 穩(wěn)定性實驗取同一份供試品溶液，分別在0 ，2，6，18和24 h檢測，結(jié)果丁香苦苷

10、峰面積的RSD為1.97%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。2. 6 重復(fù)性實驗取9月20日采集的紫丁香葉5份，按供試品溶液 方法 制備溶液，結(jié)果丁香苦苷峰峰面積的RSD為1.98%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。2. 7 加樣回收率實驗精密稱取已知含量的9月20日紫丁香葉粉末1 g，加入對照品適量，按“2.3”項下制備供試品溶液， 計算 回收率。結(jié)果丁香苦苷的平均回收率為99.32%，RSD為2.15%。表明加樣回收率良好。2. 8 樣品采收及測定為探索不同時期紫丁香葉中丁香苦苷含量的動態(tài)變化 規(guī)律 ，作者參照紫丁香的生長發(fā)育期，依據(jù)“1.3.1”的方法進(jìn)行采樣，采用統(tǒng)一方法干燥，備用；為探索不同空間紫丁香

11、葉中丁香苦苷含量的動態(tài)變化規(guī)律，作者依據(jù)“1.3.2”的方法進(jìn)行采樣，分別對10月3日的紫丁香葉陰陽面的上、中、下部位的丁香苦苷含量進(jìn)行了測定。按“2.3”項制備的供試品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣， 分析 紫丁香葉中丁香苦苷時空變化規(guī)律，其結(jié)果見圖34。3 討論3.1 對同一紫丁香植株在不同生長時期紫丁香葉中丁香苦苷含量的差異進(jìn)行 研究 時,關(guān)鍵是取樣技術(shù)。本研究中的取樣方法,根據(jù)研究目的最大限度地遵守單一差異原則,使測定結(jié)果的差異僅與紫丁香葉的取樣時間有關(guān),最大限度地消除了誤差來源。本實驗通過對不同生長期紫丁香葉中丁香苦苷的含量測定，顯示了其丁香苦苷在不同生長期的含量變化。結(jié)果表明不同生長時期

12、紫丁香葉中丁香苦苷的含量存在較大差異，其中丁香苦苷含量在5月10日、6月20日、9月20日均較高，這可能是因為丁香苦苷在不同生長階段隨季節(jié)變化而發(fā)生轉(zhuǎn)化，其間轉(zhuǎn)化的條件可能是外界的生態(tài)因子，這有待于進(jìn)一步證實。盡管5月10日紫丁香葉中丁香苦苷含量較高，但此時正值紫丁香的芽期，葉子的生物量明顯低于后兩個時期；而6月20日（紫丁香葉長齊前后）、9月20日（紫丁香葉將干枯脫落前）葉子的含量和生物量均較高，因此，僅從丁香苦苷的含量和葉子的生物量角度看，在紫丁香葉長齊前后或紫丁香葉將干枯脫落前均可采收，這與紫丁香葉民間用藥習(xí)慣相符。但僅以紫丁香葉中的某一個成分在不同時期的含量變化來確定其采收期具有局限性

13、，須結(jié)合其它活性成分的含量變化來綜合考慮。3.2 本實驗通過對同一時期不同空間紫丁香葉中丁香苦苷進(jìn)行了含量測定，顯示了不同空間紫丁香葉樣品丁香苦苷的含量存在較大差異。其中處于陽面葉子中的丁香苦苷含量均明顯高于同一空間位置的陰面葉子。且陽面葉子中，丁香苦苷含量由上到下依次降低，不同空間丁香苦苷含量差異明顯；陰面葉子中，丁香苦苷含量上部較高，中部和下部兩者差異不大，且均較上部葉子的含量低。這說明光照量的大小 影響 紫丁香葉中丁香苦苷的合成，光照充分對丁香苦苷生成有利?！?參考  文獻(xiàn) 】1Editorial Board of China Heral,State Administration of Traditional Chinese Medicine.China Herbal (中華本草)M.Shanghai;Shanghai Scientific and Technical Publishers,1999.2Wang D D，Liu S Q，Chen Y J，et a1Studies on active cornpo