實(shí)驗(yàn)課生化試驗(yàn)儀器培訓(xùn)

1、 步驟一：制膠步驟一：制膠2g瓊脂糖+0.5x TBE 200ml 錐形瓶，蓋上牛皮紙， 用橡皮筋捆緊 微波爐加熱n次,直至溶解， 1min/次，中高溫（一般35次） 加 20ul熒光染料（有毒需帶上手套） 混勻 倒入凝膠托盤（大小凝膠托盤，梳子套 好）， 托盤高度1/3 （約3mm） 冷凝 輕輕取下梳子，大凝膠托盤 置于電泳槽中 ，小托盤上面的黑帶靠近負(fù)極 加緩沖液剛好沒過(guò)凝膠注意事項(xiàng)：1、注意用微波爐加熱溶解瓊脂糖時(shí)，分多次溶解，1min/次，以防爆沸。2、熒光染料有毒，操作時(shí)戴手 套和穿白大褂3、倒入托盤中膠的高度只能是托盤高度的1/3，不能過(guò)多也不能過(guò)少。4、冷卻后取梳子時(shí)必需小心，以

2、防加樣孔受破壞。步驟二：加樣步驟二：加樣用加樣槍加樣，記住自己加入樣品的位置。蓋上電泳儀上蓋。（注意正負(fù)極）注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 加樣時(shí)加樣槍要垂直，加完樣品后手指仍不能松開，直至加樣槍高于液面，以免吸出樣品和緩沖液。步驟三：調(diào)電泳儀用途：用途：適宜普通蛋白 核酸電泳面板說(shuō)明：面板說(shuō)明：操作步驟：1、接好電源并確認(rèn)與有接地保護(hù)的電源插座相連2、按顏色接好電泳槽和電泳儀的連接導(dǎo)線3、確認(rèn)電源符合要求后，開啟儀器的“電源開關(guān)”4.按選擇鍵，當(dāng)箭頭指向某一項(xiàng)時(shí)，可按數(shù)值調(diào)節(jié)按鍵調(diào)本項(xiàng)數(shù)值本實(shí)驗(yàn)所用各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下Us=80vIs=100mATs=0:305.按【啟/?！挎I后，儀器鳴響4聲，輸出啟動(dòng)，“輸

3、出指示燈”閃亮6.電泳完成后，電泳儀發(fā)出鳴響。此時(shí)按電源鍵關(guān)閉電源。取出凝膠。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、注意正負(fù)極的鏈接2、儀器使用中，請(qǐng)勿將電泳槽 放在電泳儀上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作， 嚴(yán)禁濺入電解質(zhì)溶液。若有電泳液濺入，切勿接通電源，以免造成事故。3、開機(jī)后人體不宜和電泳槽溶液或樣品接觸，嚴(yán)禁打開電泳槽的上蓋進(jìn)行加樣。必須是需要電泳的樣品添加完畢后才可以接通電源。若需要看樣品，最好是關(guān)機(jī)后再看。電熱恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱l使用操作接通儀器電源將儀器放置平整地面或臺(tái)面上。打開電源開關(guān)，電源指示燈亮按培養(yǎng)物的所需溫度進(jìn)行溫度設(shè)定，儀器開始加熱工作，控溫儀開始顯示工作室的溫度。達(dá)到設(shè)定溫度自動(dòng)恒溫半小時(shí)后

4、放入培養(yǎng)物。試驗(yàn)結(jié)束后關(guān)閉電源開關(guān)，儀器即停止工作。l注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)物品擺放時(shí)在箱內(nèi)不宜過(guò)擠，要讓空氣流動(dòng)暢通，使箱內(nèi)溫度均勻。內(nèi)室底板接近加熱器，故不宜將實(shí)驗(yàn)物直接放置其上。培養(yǎng)箱工作時(shí)應(yīng)將風(fēng)頂適當(dāng)旋開，以利箱內(nèi)溫度均勻和有適當(dāng)?shù)膿Q氣量。通電使用時(shí)不要用手觸及帶電部位。培養(yǎng)箱上面不得放置任何物品。電熱恒溫水箱電熱恒溫水箱CU600型恒溫水浴箱l使用方法開啟電源開關(guān)，電源開關(guān)指示燈亮，設(shè)備的電源已接通，溫度控制儀表顯示的數(shù)值是當(dāng)前的水溫值。 按照所需要的工作溫度進(jìn)行溫度的設(shè)定，此時(shí)溫控儀表的綠燈亮，電加熱器開始加熱，待水溫接近設(shè)定溫度時(shí)，溫控儀表的紅綠燈開始交替亮滅，溫控儀表進(jìn)入了比例控制帶，加

5、熱器開始斷續(xù)加熱以控制熱慣性。當(dāng)水溫升至設(shè)定溫度時(shí)，紅綠燈按照一定的規(guī)律交替亮滅，設(shè)備進(jìn)入恒溫段。舉例，數(shù)字顯示雙列三孔恒溫水浴鍋，工作溫度65，其操作程序如下：加注清水開啟電源開關(guān)溫度設(shè)定：依次按動(dòng)各位上的撥碼開關(guān)，使個(gè)位顯示為5，十位顯示為6，百位顯示為0溫控儀表的綠燈亮，加熱器開始工作溫控儀表的紅綠燈開始交替亮滅，進(jìn)入比例加熱階段直至恒溫。試驗(yàn)工作結(jié)束以后，關(guān)閉電源開關(guān)，切斷設(shè)備的電源，并將水槽內(nèi)的水放凈。l注意事項(xiàng) 本系列產(chǎn)品的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)出廠前均經(jīng)過(guò)實(shí)際運(yùn)行檢驗(yàn)，如果用戶因工藝要求需采用自備的溫度計(jì)（具有一定準(zhǔn)確度）進(jìn)行測(cè)定時(shí)，以用戶的溫度計(jì)為準(zhǔn)，如果溫控儀表顯示的數(shù)值與溫度計(jì)有差異

6、，用戶可將溫度設(shè)定旋鈕略做微調(diào)即可滿足工藝要求。水浴鍋使用時(shí)，必須先加水后通電，嚴(yán)禁干燒。水浴鍋使用時(shí)，必須有可靠的接地以確保使用安全。水位低于電熱管，不準(zhǔn)通電使用，以免電熱管爆裂損壞水位也不可過(guò)高，以免水溢入電器箱損壞元件。低速冷凍離心機(jī) 操作方法：操作方法：1.打開電源開關(guān)2.設(shè)定參數(shù)，溫度，時(shí)間，轉(zhuǎn)數(shù)3.開始離心，轉(zhuǎn)數(shù)逐漸升值設(shè)定值，到達(dá)設(shè)定時(shí)間后，減速降至04.停止鍵參數(shù)設(shè)定1.溫度設(shè)定 a.按選擇鍵，上限指示燈亮，按加減設(shè)定 b。按選擇鍵，下限指示燈亮，按加減設(shè)定時(shí)間與轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)定1.按選擇鍵，出現(xiàn)p0000，按記憶鍵，出現(xiàn)上次轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)定，按加減和左移，輸入，最后按記憶鍵存儲(chǔ)2.按加鍵，顯

7、示p0001,為時(shí)間設(shè)定，單位為分鐘，按記憶鍵，出現(xiàn)上次時(shí)間設(shè)定，按加減和左移，輸入，最后按記憶鍵存儲(chǔ)3.按選擇鍵，退出設(shè)定4.完成設(shè)定之后，按離心鍵工作注意事項(xiàng)1.離心前必須配平2.過(guò)長(zhǎng)離心管放于外側(cè)3.已設(shè)定好的參數(shù)不要隨意修改4.一次離心不要超過(guò)60分鐘5.離心結(jié)束后，未能及時(shí)打開蓋子，可關(guān)閉電源之后再接通，然后打開蓋門微型離心機(jī) 1.打開開關(guān)2.配平3.設(shè)定轉(zhuǎn)數(shù)與時(shí)間4.開始離心5.關(guān)閉電源注意：離心時(shí)一定要配平，要把里面的蓋子扣上MLSMLS37503750高壓滅菌鍋使用說(shuō)明及相關(guān)高壓滅菌鍋使用說(shuō)明及相關(guān)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)MLS-3750高壓蒸汽滅菌鍋整體控制盤控制盤電源開關(guān)電源開關(guān)排

8、氣貯存桶：排氣貯存桶：里面的水不得里面的水不得低于最低刻度低于最低刻度線，也不得高線，也不得高于最高警界線于最高警界線機(jī)械開關(guān)（控制機(jī)械開關(guān)（控制鍋蓋開關(guān)）鍋蓋開關(guān)） ： 只有電源開只有電源開關(guān)打開的狀態(tài)關(guān)打開的狀態(tài)下才能夠打開下才能夠打開MSL-3750高壓蒸汽滅菌鍋MSL-3750高壓滅菌鍋內(nèi)部構(gòu)造內(nèi)部結(jié)構(gòu)內(nèi)部結(jié)構(gòu)主要兩個(gè)主要兩個(gè)不銹鋼框不銹鋼框構(gòu)成，不構(gòu)成，不銹鋼框用銹鋼框用于放需要于放需要滅菌的物滅菌的物品品不銹鋼框底在滅菌不銹鋼框底在滅菌前加入一定量的前加入一定量的水水(水不能高于不水不能高于不銹鋼下框銹鋼下框）高壓滅菌鍋操作盤使用壓力表：顯示滅菌鍋內(nèi)部壓力壓力表：顯示滅菌鍋內(nèi)部壓力

9、工作指示燈：指示當(dāng)前工作內(nèi)容工作指示燈：指示當(dāng)前工作內(nèi)容select：選擇切換鍵，切換設(shè)置項(xiàng)：選擇切換鍵，切換設(shè)置項(xiàng)timer：設(shè)定預(yù)定開始的時(shí)間：設(shè)定預(yù)定開始的時(shí)間開始鍵：各項(xiàng)設(shè)置完畢啟動(dòng)開始鍵：各項(xiàng)設(shè)置完畢啟動(dòng)顯示設(shè)定目標(biāo)溫度顯示設(shè)定目標(biāo)溫度、升溫過(guò)程降溫過(guò)程、升溫過(guò)程降溫過(guò)程溫度溫度顯示預(yù)設(shè)滅菌時(shí)間等顯示預(yù)設(shè)滅菌時(shí)間等顯示最終設(shè)定的要求溫度顯示最終設(shè)定的要求溫度加壓過(guò)程指示燈：加壓過(guò)程亮加壓過(guò)程指示燈：加壓過(guò)程亮停止按鈕停止按鈕:終止終止作業(yè)運(yùn)行及預(yù)定作業(yè)運(yùn)行及預(yù)定、保溫狀態(tài)、保溫狀態(tài)高壓滅菌鍋基本操作流程檢查并放置排氣儲(chǔ)存桶檢查并放置排氣儲(chǔ)存桶接通電源開關(guān)接通電源開關(guān)打開蓋子打開蓋子注

10、入加熱用水注入加熱用水放入滅菌物品放入滅菌物品關(guān)閉蓋子關(guān)閉蓋子選擇過(guò)程：選擇過(guò)程：操作操作盤操作操作盤選擇作業(yè)內(nèi)容選擇作業(yè)內(nèi)容按下啟動(dòng)鈕按下啟動(dòng)鈕滅菌溶解、保溫滅菌溶解、保溫運(yùn)行完畢運(yùn)行完畢打開蓋子打開蓋子去除滅菌物品去除滅菌物品切斷電源開關(guān)并排出加熱用水切斷電源開關(guān)并排出加熱用水使用高壓滅菌鍋?zhàn)⒁馐马?xiàng)1 待滅菌的物品放置不宜過(guò)緊2 待滅菌器內(nèi)壓力降至與大氣壓相等后才可 開蓋3 裝培養(yǎng)基的試管或瓶子的棉塞上，應(yīng)包油紙或牛皮紙，以防冷凝水入內(nèi)4 當(dāng)需要一定高溫打開蓋子取出滅菌儀器等時(shí)，面部遠(yuǎn)離滅菌鍋蓋口，以免被蒸汽燙傷。5 使用滅菌鍋滅菌前必須將冷空氣充分排除，否則鍋內(nèi)溫度達(dá)不到規(guī)定溫度，影響滅

11、菌效果6 滅菌完畢后，不可放氣減壓，否則瓶?jī)?nèi)液體會(huì)劇烈沸騰，沖掉瓶蓋而外溢甚至導(dǎo)致容器爆裂。PTC-1148PTC-1148一、梯度一、梯度PCRPCR儀儀把一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（溫度梯度），通常12鐘溫度梯度，這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段，其最適退火溫度不同，通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增，就可以篩選出表大量高的最適退火溫度，進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。梯度PCR儀，在不設(shè)置徒弟的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。二、二、PCRPCR儀的具體性能：儀的具體性

12、能：6 x 8 的樣品板排列，一次可以容納48 個(gè)0.2ml 的PCR 反應(yīng)管，0.2ml 的PCR 8 聯(lián)反應(yīng)聯(lián)管，48 孔PCR反應(yīng)板。如果是0.5ml PCR 反應(yīng)管，一次最多可以加12 個(gè)；梯度PCR 功能允許在同一反應(yīng)中設(shè)置8 個(gè)不同溫度，方便優(yōu)化反應(yīng)條件。三、簡(jiǎn)單的程序編輯選項(xiàng)三、簡(jiǎn)單的程序編輯選項(xiàng)MJ Mini PCRMJ Mini PCR儀提供兩種程序編輯的選項(xiàng)，圖示的方法可以快速的編儀提供兩種程序編輯的選項(xiàng)，圖示的方法可以快速的編輯循環(huán)參數(shù)，菜單式的文字編輯方法可以輸入一些高級(jí)的選項(xiàng)。在輯循環(huán)參數(shù)，菜單式的文字編輯方法可以輸入一些高級(jí)的選項(xiàng)。在PCR PCR 運(yùn)行過(guò)程中，按下

13、一個(gè)鍵，可以在不同的顯示模式下切換，顯示運(yùn)行過(guò)程中，按下一個(gè)鍵，可以在不同的顯示模式下切換，顯示運(yùn)行程序各個(gè)步驟，圖示實(shí)時(shí)顯示模塊、熱蓋和樣品溫度，以及剩余運(yùn)行程序各個(gè)步驟，圖示實(shí)時(shí)顯示模塊、熱蓋和樣品溫度，以及剩余的運(yùn)行時(shí)間。的運(yùn)行時(shí)間。 文字模式顯示程序的步驟，并可以輸入高級(jí)的選項(xiàng)文字模式顯示程序的步驟，并可以輸入高級(jí)的選項(xiàng) “Screen”Screen”鍵可以在文字和圖示之間切換；圖示模式顯示循環(huán)的示意鍵可以在文字和圖示之間切換；圖示模式顯示循環(huán)的示意圖，可以修改溫度和時(shí)間圖，可以修改溫度和時(shí)間 在在PCR PCR 運(yùn)行過(guò)程中，圖示模式顯示模塊、熱蓋和樣品溫度運(yùn)行過(guò)程中，圖示模式顯示模塊

14、、熱蓋和樣品溫度 四、正面圖解四、正面圖解五、使用方法五、使用方法1、開機(jī)：打開開關(guān)，自我檢查（“self-testing”）后視窗上顯示主頁(yè)面。2、裝樣品：向已有樣品的0.5ml離心管中加入 0.3ml的液態(tài)石蠟油，防止液體樣品蒸發(fā)。逆時(shí)針扭轉(zhuǎn)齒輪打開PCR儀的蓋子。進(jìn)行一次PCR可裝載12個(gè)0.5ml離心管，因?yàn)?.5ml離心管比較粗，所以相鄰的兩個(gè)管子要隔著一個(gè)空格。裝好樣品后順時(shí)針旋轉(zhuǎn)齒輪蓋上蓋子。 打鉤的空格可放0.5ml離心管3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序：則直接選擇“run”按Proceed，用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，若選擇“run”，按proceed，則開始執(zhí)行程序；若選擇“vi

15、ew”,則預(yù)覽程序步驟。4、如果要輸入新的程序：則在主菜單上用箭頭鍵選擇NEW，按Proceed。1）命名新的程序：最多8個(gè)字母，輸入后按Proceed確認(rèn)。2）輸入程序條件：名字輸入、按Proceed后則可以輸入熱蓋溫度，然后可以輸入反應(yīng)容量（1-100L）。3）選擇程序步驟：選擇“TEMP”后按Proceed,“1=”后輸入0-99之間的任意溫度，按Proceed后輸入持續(xù)時(shí)間，再按proceed，然后選擇“yes”“no”或“option”；當(dāng)需要斜度的時(shí)候就選擇“GRAD”，按proceed，輸入一個(gè)較低的溫度值后按proceed，再輸入一個(gè)較高的溫度、再按proceed，選擇持續(xù)時(shí)間

16、，最后選擇“yes”“no”“option”。4）循環(huán)步驟：選擇”GOTO”，輸入程序應(yīng)該循環(huán)回到的步驟數(shù)（如，要回到第2部，就按2），按proceed，再輸入循環(huán)次數(shù)，按proceed。 5）結(jié)束程序：完成編寫程序后選擇“END”。此程序還可被儲(chǔ)存。5、輸入完成的程序后，到按cancel回到RUN菜單，選擇新編寫的程序，開始運(yùn)行。6、其它：用pause可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。按Cancel可停止運(yùn)行的程序、或返回上一菜單。 六、設(shè)置一個(gè)六、設(shè)置一個(gè)PCRPCR體系：體系： 一般分為一般分為8 8步：步：1、預(yù)變性：可用94，5min。2、變性：一般用94，30s。3、退火：

17、溫度自定，30s2min。4、延伸：一般72，對(duì)于2kb，1min；2kb，每增加1kb加1min。5、循環(huán)數(shù)：一般2535個(gè)循環(huán)。6、最終延伸：72，515min。7、保存：4，時(shí)間設(shè)為0。(屏幕將會(huì)顯示FOREVER)8、END。屏幕顯示：屏幕顯示： NEW： Lid：100 （程序的名字） Vol：50L 1=94.0 5:00 2=94.0 0:30 3=56.0 0:30 4=72.0 0:30 5=GOTO 2， 30 TIMES 6=72.0 5:00 7=4.0 FOREVER 8=END七、注意事項(xiàng)七、注意事項(xiàng)1、不要拉齒輪以打開PCR儀，這樣會(huì)損壞儀器。2、儀器內(nèi)至少要裝8

18、個(gè)離心管，并且要均勻放置；4個(gè)在中間，另外4個(gè)離心管四個(gè)角上的空格各一個(gè)。3、儀器內(nèi)可一次放12個(gè)0.5ml離心管；最外周的空格不能放離心管，避免隨壞擴(kuò)增效果。4、轉(zhuǎn)齒輪時(shí)不要多于3/4圈。5、要用石蠟油來(lái)封閉樣品，不能用硅酮油，因?yàn)檫@樣會(huì)損壞樣品。6、按pause后或中途關(guān)掉電源而又重啟后，可繼續(xù)原程序的操作。1 為了盡量減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.11.5A。在此范圍內(nèi)顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。樣品的濃度不能過(guò)低或者過(guò)高。2 混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；3 混合液中不能有氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；4 必須使用相同

19、的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則測(cè)定濃度結(jié)果差異太大；5 換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇要一致；6 不能采用窗口磨損的比色杯；7 樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積（50ul）；8 使用時(shí)避免接觸比色杯的光面。低溫保存箱的使用低溫保存箱的使用使用方法設(shè)備安裝后必須靜置至少24小時(shí)以上才能通電。在通電時(shí)，要先打開機(jī)器后背電控箱上的充電電池開關(guān)（從機(jī)器背后可以看到）注：不打開該開關(guān)，通電后會(huì)有電池電量低報(bào)警。使用方法初次開機(jī)運(yùn)行時(shí)，將溫度設(shè)在-40，達(dá)到設(shè)定溫度后穩(wěn)定運(yùn)行8小時(shí)以上，再將溫度設(shè)在-70 ，達(dá)到-70 后穩(wěn)定運(yùn)行24小時(shí)后，再根據(jù)需要將溫度繼續(xù)調(diào)整到要求溫度，達(dá)到設(shè)定溫度后穩(wěn)定運(yùn)行24

20、小時(shí)，若運(yùn)行正常則空箱運(yùn)行完成。使用方法按操作2確認(rèn)保存箱運(yùn)行正常后，可以向箱內(nèi)存放-40以下冷凍物品，同時(shí)調(diào)整設(shè)定溫度，使設(shè)定溫度高于冷凍物品溫度3，穩(wěn)定運(yùn)行8小時(shí)后，再分階段降溫。每次存放物品不能超過(guò)1/3箱體容量，達(dá)到設(shè)定溫度并正常運(yùn)行24小時(shí)后，再放入另1/3 箱體容量物品，按上述方法降溫。降溫過(guò)程中盡量不要開門，否則會(huì)造成溫度上升。使用方法使用時(shí)環(huán)境溫度超過(guò)28時(shí)，需開空調(diào)或打開門窗給環(huán)境降溫。如果環(huán)境溫度超過(guò)32，低溫保存箱設(shè)置自動(dòng)進(jìn)入保護(hù)程序，最低只能設(shè)置-82，建議此環(huán)境時(shí)使用時(shí)間不超過(guò)10小時(shí)。環(huán)境溫度超過(guò)32的情況下，禁止使用低溫保存箱，否則易燒毀壓縮機(jī)。 實(shí)驗(yàn)室一般都將溫度控制在25注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)保存箱內(nèi)禁止放入易燃、易爆的危險(xiǎn)品和強(qiáng)腐蝕性的酸、堿等物品。保存箱一旦切斷電源，需待五分鐘以上方可重新接通，以免壓縮機(jī)或系統(tǒng)損壞。維護(hù)保養(yǎng)，必須拔下電源插頭。切勿滾壓或損壞電源線。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)在放入物品前，請(qǐng)確認(rèn)該物品適合于低溫儲(chǔ)存。嚴(yán)禁一