血液中葡萄糖的測(cè)定 ——鄰甲苯胺法

1、血 液 中 葡 萄 糖 的 測(cè) 定血 液 中 葡 萄 糖 的 測(cè) 定 鄰甲苯胺法鄰甲苯胺法 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握血糖的測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 葡萄糖在熱的醋酸溶液中，與鄰甲苯胺縮合成雪夫氏堿(Schiff base)。 雪夫氏堿呈蘭綠色，其最高吸收峰為630nm波長(zhǎng)，顏色深淺與葡萄糖含量成正比。反應(yīng)式如下: CHNHH(CHOH)CH OH2423+=COCHNHH(CHOH)CHOH423C OHCHN3H(CHOH)CH42C=OHH O2鄰甲苯胺葡萄糖葡萄糖鄰甲苯胺雪夫氏堿（綠色）三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材1.分光光度計(jì)（630nm），比色皿 2. 計(jì)算紙（9 cm9

2、 cm）3. 水浴鍋4. 10ml容量瓶四、實(shí)驗(yàn)試劑四、實(shí)驗(yàn)試劑 1. 鄰甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入鄰甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升2. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)母液 （10mg/ml，用飽和苯甲酸溶液配制）3. 血清 （100ml）五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟取5支10ml容量瓶，標(biāo)號(hào)，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用飽和苯甲酸稀釋至10ml，混勻（則上述溶液100ml葡萄糖含量為25，50，100，200，300mg ）；混勻后，置沸水中 15分鐘，立即移入冷水浴中冷卻；以0號(hào)管調(diào)零，在630nm 處比色（見下表），以各管的 吸光

3、度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)管中葡萄糖含量（mg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)測(cè)定管吸光度查找含量。六、附注六、附注 1. 本法不需要除去蛋白質(zhì)，鄰甲苯胺試劑只與醛糖顯色，血液中其他還原性物質(zhì)基本上無(wú)影響。 2. 鄰甲苯胺試劑與葡萄糖顯色的深淺及其穩(wěn)定性與試劑中鄰甲苯胺濃度、冰醋酸濃度、加熱時(shí)間有關(guān)。此法顯色穩(wěn)定，24小時(shí)內(nèi)無(wú)變化。如將加熱時(shí)間縮短，生成顏色容易消褪。 3. 此法也適用于全血葡萄糖測(cè)定，特別是小兒病人作靜脈抽血困難時(shí)，可采用指端血或耳垂血 0.1毫升，加入 3% 三氯醋酸溶液1.9 毫升中，以沉淀蛋白質(zhì)。離心后吸取上清液 1.0毫升，加入鄰甲苯胺試劑 5毫升作為測(cè)定管。在標(biāo)準(zhǔn)管中加入葡萄

4、糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（0.05mg/ml）1.0毫升及鄰甲苯胺試劑 5毫升，在空白管中加入蒸餾水 1.0毫升及鄰甲苯胺試劑 5毫升，然后按上表進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果即為全血葡萄糖含量。六、附注六、附注4. 輕度溶血的血清對(duì)結(jié)果無(wú)明顯影響。根據(jù)推導(dǎo)，血清中含血紅蛋白 450毫克/100毫升時(shí)，可使測(cè)定結(jié)果降低約10%。5. 高脂血的標(biāo)本最后顯色有時(shí)會(huì)出現(xiàn)渾濁，影響測(cè)定結(jié)果?？上戎苽溲獮V液后再行測(cè)定。6.試劑的配制 1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液(10mg/ml)：準(zhǔn)確稱取干燥無(wú)水葡萄糖1克，加0.25%苯甲酸液至100毫升，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?2）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1mg/ml)：準(zhǔn)確吸取上述貯存液10ml，加0.25%苯甲酸至