藥物分析實(shí)驗(yàn)講義-藥學(xué)-藥劑-化生專業(yè)

1、中南民族大學(xué)藥學(xué)院化學(xué)生物學(xué)與藥學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 藥物分析實(shí)驗(yàn)講義 趙丹 王少兵 林親雄 編寫 適用專業(yè)： 藥學(xué)專業(yè) 藥物制劑 化學(xué)生物學(xué)專業(yè) 2011年9月目 錄實(shí)驗(yàn)一 阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測(cè)定3實(shí)驗(yàn)二 異煙肼的雜質(zhì)檢查和異煙肼片的含量測(cè)定6實(shí)驗(yàn)三 葡萄糖注射液的分析8實(shí)驗(yàn)四 復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測(cè)定10實(shí)驗(yàn)五 高效液相色譜法測(cè)定天麻藥材的天麻素含量12實(shí)驗(yàn)一： 阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)方式：集中授課，分小組實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握水楊酸類藥物的鑒別反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理。2. 掌握比色法檢查阿司匹林片劑中游離水楊酸的實(shí)驗(yàn)原理。3. 掌握兩步滴定法

2、測(cè)定阿司匹林片劑中藥物含量的實(shí)驗(yàn)原理。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 鑒別：阿司匹林加熱水解后導(dǎo)致游離水楊酸產(chǎn)生，水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下（pH值4.0-6.0），可以用三氯化鐵溶液鑒別。2. 雜質(zhì)檢查：游離水楊酸含有酚羥基，可與高鐵鹽反應(yīng)顯紫堇色，因此，將適量阿司匹林供試品溶液與一定量水楊酸對(duì)照品溶液生成的色澤對(duì)比，即可控制阿司匹林中游離水楊酸的含量（比色法）。3. 含量測(cè)定：通過兩步滴定法完成，由于阿司匹林中存在酸性的穩(wěn)定劑，所以不能用氫氧化鈉直接滴定，必須使用兩步滴定法。首先用氫氧化鈉滴定液中和制劑中其它的酸性物質(zhì)和阿司匹林上游離的羧酸：然后在加入過量的氫氧化鈉滴定液，加熱水解，氫氧化鈉中和水

3、解所產(chǎn)生的醋酸，然后用硫酸回滴，測(cè)得中和醋酸所消耗的氫氧化鈉的量。該消耗量和阿司匹林的摩爾比為1:1。三、實(shí)驗(yàn)方法 1. 鑒別取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1 滴，即顯紫堇色。2. 檢查（游離水楊酸）取本品5 片，研細(xì)，用乙醇30 ml分次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾過，精密量取濾液6 ml，置50 ml納氏比色管中，用水稀釋至50 ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml（硫酸鐵銨溶液配置：取1 mol/L鹽酸溶液1ml，加硫酸鐵銨指示液2 ml后再加水適量使成100 ml），搖勻，30秒鐘內(nèi)如顯

4、色，與對(duì)照液（精密量取0.01水楊酸溶液4.5 ml，加乙醇3 ml，0.05酒石酸溶液1 ml ，用水稀釋至50 ml，再加上述新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml，搖勻）比較，不得更深(1.5)。3. 含量測(cè)定 取本品40片，研細(xì)，用中性乙醇70 ml，分?jǐn)?shù)次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，再用水適量洗滌研缽數(shù)次，洗液合并于100 ml量瓶中，再用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液10 ml（相當(dāng)于阿司匹林0.3 g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性）20 ml，振搖，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3 滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉

5、滴定液（0.1 mol/L）40 ml，置水浴上加熱15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05 mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸滴定液（0.05 mol/L)相當(dāng)于18.02 mg C9H8O4。 四、計(jì)算片劑按標(biāo)示量計(jì)算的百分含量定義是：上式中，V0和V分別為空白試驗(yàn)和樣品試驗(yàn)時(shí)消耗硫酸滴定液的體積（ml），F(xiàn)為硫酸滴定液濃度（0.05mol/L）校正因數(shù)；T為氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度；W為供試品片粉的稱取量（g），為平均片重（g），標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項(xiàng)下的標(biāo)示值（mg）。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論記錄鑒別、檢查和含量測(cè)定的結(jié)果，并對(duì)

6、其討論。六、思考題1）請(qǐng)寫出阿司匹林腸溶片含量測(cè)定中含量的計(jì)算公式。2）含量測(cè)定中為什么要在水浴上加熱。附錄：滴定液的標(biāo)定氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)：取在105干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀約0.6g, 精密稱定，加新沸過的冷水50ml，振搖，使其盡量溶解；加酚酞指示液2滴,用本液滴定；在接近終點(diǎn)時(shí),應(yīng)使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。 硫酸滴定液(0.05mol/L)：取在270300干燥至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉約0.25g，精密稱定，加水50ml使溶解，加甲基紅溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液

7、滴定至溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色時(shí)，煮沸2分鐘,冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙?ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于5.30mg的無水碳酸鈉。 實(shí)驗(yàn)二：異煙肼的雜質(zhì)檢查和異煙肼片的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)方式：集中授課，分小組實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握薄層色譜檢查雜質(zhì)的實(shí)驗(yàn)原理和操作技能。2. 掌握溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量測(cè)定原理和操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 游離肼的檢查異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，可能會(huì)在制備時(shí)由原料引入游離肼，或在貯藏過程中降解產(chǎn)生游離肼，肼是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此應(yīng)對(duì)其進(jìn)行限量檢查。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法檢查，利用藥物與雜質(zhì)用異丙醇-

8、丙酮（3 : 2）展開后，肼能與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成腙顯色，進(jìn)行比較檢查。2. 片劑的含量測(cè)定異煙肼結(jié)構(gòu)中的酰肼基團(tuán)具有還原性，在強(qiáng)酸性介質(zhì)中可與溴酸鉀定量反應(yīng)，反應(yīng)式如下：三、實(shí)驗(yàn)方法1. 異煙肼中游離肼雜質(zhì)檢查取本品，加水制成50 mg/ml的異煙肼水溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1 ml中約含有0.20 mg（相當(dāng)于游離肼50 g）的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法，吸取供試品溶液10 l和對(duì)照品溶液2 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇-丙酮（3 : 2）為展開劑，展開，晾干，噴以乙醇制的對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液，放置15分鐘后檢視。在供試品溶液主斑點(diǎn)前方與對(duì)照品

9、溶液主斑點(diǎn)相應(yīng)位置，不得顯黃色斑點(diǎn)。2. 異煙肼片的含量測(cè)定取異煙肼片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于異煙肼0.2 g），置于100 ml容量瓶中，加水適量，振搖使異煙肼溶解并稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，加水50 ml，稀鹽酸20 ml與甲基橙指示劑1滴，溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）緩緩滴定（溫度保持在1825）至粉紅色消失，每1 ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429 mg的C6H7N3O。滴定結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。 中國(guó)藥典（2010版）規(guī)定，本品含異煙肼（C6H7N3O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0-105.0%。四、

10、計(jì)算異煙肼片劑的標(biāo)示量百分含量計(jì)算公式為：上式中，F(xiàn)為濃度校正因數(shù)，本實(shí)驗(yàn)中指溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）的濃度校正因數(shù)；T為溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）對(duì)異煙肼的滴定度；V為供試品消耗滴定液的校正體積數(shù)；標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項(xiàng)下的標(biāo)示值。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論1）繪制薄層檢查結(jié)果示意圖，并進(jìn)行討論.2）計(jì)算標(biāo)示量百分含量并進(jìn)行討論。附注：1. 乙醇制的對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液：取對(duì)-二甲氨基苯甲醛1 g，加乙醇9.0 ml與鹽酸2.3 ml使之溶解，再加乙醇至100 ml，即得。2. 溴酸鉀滴定液（約0.01667mol/L）：取溴酸鉀2.8g，加水適量溶解成1000

11、ml，搖勻。3. 溴酸鉀滴定液（約0.01667mol/L）的標(biāo)定：精密量取本液25 ml，置于碘瓶中，加入碘化鉀2.0 g與稀硫酸5ml，密塞，搖勻，暗處放置5分鐘，加水100 ml（1825）然后用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，臨近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉指示液2 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正，根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液消耗的體積計(jì)算本液的實(shí)際濃度。（空白滴定：25ml水+碘化鉀2.0g，稀硫酸5ml，水100ml，重復(fù)上面操作）實(shí)驗(yàn)三： 葡萄糖注射液的分析實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)方式：集中授課，分小組實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握注射液性狀，雜質(zhì)檢查以及

12、含量測(cè)定的方法。2.掌握剩余碘量法測(cè)定含量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 鑒別（Fehling反應(yīng)）葡萄糖分子中的醛基可以將Fehling試劑（堿性酒石酸銅試液）還原，生成了氧化亞銅紅色沉淀，用于葡萄糖的定性鑒別。2. 含量測(cè)定（碘量法）碘在堿性溶液中可將葡萄糖氧化成葡萄糖酸，剩余的碘液用硫代硫酸鈉滴定液滴定。碘與NaOH作用可生成次碘酸鈉(NaIO)，葡萄糖(C6H12O6)能定量地被次碘酸鈉(NaIO)氧化成葡萄糖酸(C6H12O7)。在酸性條件下，未與葡萄糖作用的次碘酸鈉可轉(zhuǎn)變成碘(I2)析出，因此只要用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的I2，便可計(jì)算出C6H12O6的含量。其反應(yīng)如下： I2與

13、NaOH作用：I22NaOH = NaIONaIH2O C6H12O6和NaIO定量作用：C6H12O6NaIO = C6H12O7NaI 總反應(yīng)式：I2C6H12O62NaOH = C6H12O72NaIH2O C6H12O6作用完后，剩下未作用的NaIO在堿性條件下發(fā)生歧化反應(yīng)：3NaIO = NaIO32 NaI 在酸性條件下：NaIO35NaI3H2SO4 = 3I23Na2SO43H2O 析出過量的I2可用標(biāo)準(zhǔn)Na2S2O3溶液滴定：I22Na2S2O3 = Na2S4O62NaI三、實(shí)驗(yàn)方法1. 鑒別：取本品緩緩滴入溫?zé)岬膲A性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀。2. 檢查（1

14、）pH值 應(yīng)為3.2 5.5。（2）5-羥甲基糠醛 精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖1.0 g），置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在284 nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸收度不得大于0.32。3. 含量測(cè)定（剩余碘量法）精密量取本品適量0.5 ml(約相當(dāng)于葡萄糖50 mg)，置碘瓶中，加蒸餾水10ml，精密加入碘滴定液（0.05 mol/L）10 ml，分四次加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液20 ml，每次5 ml，每次加入時(shí)密塞振搖約10 s，加完后密塞，暗處放置10 min，加稀硫酸2 ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定至近終點(diǎn)（呈微黃色），加淀粉指

15、示劑1 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 m1碘滴定液（0.05 mol/L）相當(dāng)于9.908 mg的葡萄糖(C6H12O6.H2O)。 中國(guó)藥典（2010版）規(guī)定，本品為葡萄糖或無水葡萄糖的滅菌水溶液，含葡萄糖（C6H12O6.H2O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0105.0%。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 記錄各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并針對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)過程中的特殊現(xiàn)象進(jìn)行討論。0.5 ml的10%葡萄糖注射液相當(dāng)于50 mg的葡萄糖（C6H12O6.H2O），應(yīng)消耗碘滴定液（0.05 mol/L）體積為：允許5的誤差，碘消耗體積應(yīng)該為5.05 ml ± 5%，即為4.805.30

16、ml。五、思考題1）寫出剩余碘量法的化學(xué)方程式。 附注：1. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L） 取硫代硫酸鈉約26 g與無水碳酸鈉（Na2CO3）0.20g，加新沸過的冷水適量定容成1000 ml，搖勻，放置個(gè)月后濾過。2. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）標(biāo)定 取在120干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.15g，精密稱定，置碘量瓶中，加水50ml使溶解，加碘化鉀2g，輕輕振搖使溶解，加稀硫酸40ml，搖勻，密塞，暗處放置10分鐘，用水250ml稀釋，用本液滴定至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1 m

17、ol/L）相當(dāng)于4.903 mg的重鉻酸鉀，根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的取用量算出本液的濃度，即得。實(shí)驗(yàn)四 復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)方式：集中授課，分小組實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握雙波長(zhǎng)分光光度法的基本原理。2. 掌握利用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定藥物含量的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理雙波長(zhǎng)分光光度法（又稱等吸光度雙波長(zhǎng)消去法）：是在兩個(gè)不同波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度，以兩波長(zhǎng)處吸光度的差值（A）作為定量依據(jù)來測(cè)定藥物含量的方法。雙波長(zhǎng)的選定原則：一般選擇待測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)（2），選擇參比波長(zhǎng)（1）使干擾組分在2和1處具有相等吸光度，

18、從而采用A計(jì)算消除干擾組分的影響。其示意圖如下：假設(shè)樣品在2和1處的吸光度分別為A2和A1，測(cè)定組分（以X表示）在2和1處的吸光度分別為和；干擾組分（以Y表示）在2和1處的吸光度分別為和： 在相同測(cè)定條件下，E為一常數(shù)，因此A和濃度C有線性關(guān)系，因此可以用對(duì)照品比較法測(cè)定藥物的含量。三、實(shí)驗(yàn)方法 供試品溶液的制備：取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于磺胺甲噁唑50mg與甲氧芐啶10mg），置100ml 量瓶中，加乙醇適量，振搖15分鐘使磺胺甲噁唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；對(duì)照品溶液A：精密稱取干燥至恒重的磺胺甲噁唑50mg，置于100

19、ml量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液A。對(duì)照品溶液B：精密稱取干燥至恒重的甲氧芐啶10 mg，置于100 ml量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液B?；前芳讎f唑的含量測(cè)定：1 供試品及對(duì)照品A、B 測(cè)定液的配制：精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液A、B各2 ml，分別置于100 ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻。同時(shí)配制空白參比溶液。2 磺胺甲噁唑含量測(cè)定參比波長(zhǎng)的確定(磺胺甲噁唑的含量測(cè)定波長(zhǎng)為257nm)： 1）基線描掃：設(shè)置描掃參數(shù)，描掃波長(zhǎng)范圍200320nm；描掃波長(zhǎng)間隔0.2 nm；對(duì)空白參比溶液進(jìn)行基線描掃，扣除溶劑系統(tǒng)的光吸收。

20、 2）對(duì)照品B(甲氧芐啶)測(cè)定液描掃：以上述設(shè)置的描掃參數(shù)對(duì)照品B測(cè)定液進(jìn)行光吸收描掃，得到描掃曲線與各設(shè)定波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度，在波長(zhǎng)304nm附近找出與A257光吸收強(qiáng)度相同（相差小于5）的測(cè)定參比波長(zhǎng)，即AA測(cè)定A參比0。3 測(cè)定供試品、對(duì)照品A測(cè)定液在測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度：以上述設(shè)置的描掃參數(shù)對(duì)測(cè)定供試品、對(duì)照品A測(cè)定液進(jìn)行描掃，得到兩者在測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度。甲氧芐啶的含量測(cè)定：1 供試品及對(duì)照品A、B 測(cè)定液的配制：精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液A、B各5ml，分別置于100 ml量瓶中，加HCl-KCl溶液稀釋至刻度，搖勻。同時(shí)配制空白參比溶液。2 甲氧芐啶

21、含量測(cè)定參比波長(zhǎng)的確定(甲氧芐啶的含量測(cè)定波長(zhǎng)為239nm)： 1）基線描掃：設(shè)置描掃參數(shù)，描掃波長(zhǎng)范圍200320nm；描掃波長(zhǎng)間隔0.2 nm；對(duì)空白參比溶液進(jìn)行基線描掃，扣除溶劑系統(tǒng)的光吸收。 2）對(duì)照品A(磺胺甲噁唑)測(cè)定液描掃：以上述設(shè)置的描掃參數(shù)對(duì)照品B測(cè)定液進(jìn)行光吸收描掃，得到描掃曲線與各設(shè)定波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度，在波長(zhǎng)295nm附近找出與A239光吸收強(qiáng)度相同（相差小于5）的測(cè)定參比波長(zhǎng)，即AA測(cè)定A參比0。3 測(cè)定供試品、對(duì)照品B測(cè)定液在測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度：以上述設(shè)置的描掃參數(shù)對(duì)測(cè)定供試品、對(duì)照品B測(cè)定液進(jìn)行描掃，得到兩者在測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)處的光吸收強(qiáng)度。四、計(jì)

22、算采用測(cè)定A值并利用對(duì)照品對(duì)照法來進(jìn)行含量計(jì)算： ；因?yàn)閷?duì)照品和供試品配置的體積相等，所以；每片測(cè)定的藥物含量為：五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1 測(cè)定原始數(shù)據(jù)；2 磺胺甲噁唑標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)的計(jì)算；3 甲氧芐啶標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)的計(jì)算；4 對(duì)測(cè)定結(jié)果的討論與分析；附上在測(cè)定磺胺甲噁唑和甲氧芐啶時(shí)的紫外吸收曲線圖。附注：HCl-KCl溶液：13.0 ml 0.2 mol/L HCl 與25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均勻后，加水稀釋至100 ml。實(shí)驗(yàn)五 高效液相色譜法測(cè)定天麻的天麻素含量實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型：設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)教學(xué)方式：集中授課，分小組設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)

23、、工作原理和操作方法。2. 熟悉樣品制備對(duì)高效液相色譜法測(cè)定物質(zhì)含量的影響。3. 掌握高效液相色譜測(cè)定天麻素含量的定量方法（內(nèi)標(biāo)法）。二、實(shí)驗(yàn)原理高效液相色譜法是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱。當(dāng)試樣隨著流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱中后，由于樣品中的不同組分在色譜柱中的流動(dòng)相和固定相間的分配系數(shù)不同，各組分在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配（吸附脫附放出），經(jīng)過一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，先后從色譜柱上洗脫下來，離開色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。在確定的色譜條件下，特定物質(zhì)成分在色譜柱上有

24、固定的保留時(shí)間，即特定的出峰時(shí)間，并且在一定濃度范圍內(nèi)，特定物質(zhì)成分的含量與其色譜峰面積成正比，通過測(cè)定特定物質(zhì)成分與其標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰面積，便可計(jì)算出試樣中特定物質(zhì)成分的絕對(duì)含量。高效液相色譜法由于簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，在藥典中廣泛應(yīng)用于藥物含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)通過設(shè)計(jì)不同的天麻素提取方法，獲得天麻藥材天麻素含量測(cè)定的樣品，再用藥典采用的HPLC法測(cè)定各樣品的天麻素含量，考察樣品制備方法對(duì)天麻藥材中天麻素含測(cè)定的影響。三、學(xué)生設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案的要點(diǎn)與要求實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不同提取溶劑與超聲提取方法制備測(cè)試樣品，考察溶劑與超聲方法對(duì)天麻藥材中天麻素含量測(cè)定的影響。實(shí)驗(yàn)過程中將學(xué)生分為不同的組別，每組采用不同的天麻

25、素提取方法制備測(cè)定樣品，再用中國(guó)藥典的HPLC法(內(nèi)標(biāo)法)進(jìn)行麻素含量測(cè)定。使學(xué)生明確樣品制備方法與條件對(duì)HPLC法測(cè)定藥材或藥物中特定成分含量的影響，引導(dǎo)學(xué)生通過優(yōu)化條件達(dá)到更好的測(cè)定效果，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維能力與探索精神。四、實(shí)驗(yàn)方法1. 對(duì)照品溶液的制備：將天麻素標(biāo)準(zhǔn)品在真空干燥箱中80干燥1h，精密稱取天麻素對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含50g的溶液，即得。2. 供試品溶液的制備：設(shè)計(jì)1：采用稀乙醇作為提取溶劑制備供試品溶液(藥典方法)：見附件。設(shè)計(jì)2：采用60%甲醇作為提取溶劑制備供試品溶液：制備方法同藥典方法，僅提取溶劑不同。設(shè)計(jì)3：取本品粉末(過三號(hào)篩，50目)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml密封，在70溫度條件下，分別用400w的功率超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，濃縮至近干，添加乙腈水(3:97)混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中。用乙腈水(3:97)混合溶液稀釋至刻度