不同產(chǎn)地獨(dú)角蓮藥材中肉桂酸的含量測(cè)定(一)

1、不同產(chǎn)地獨(dú)角蓮藥材中肉桂酸的含量測(cè)定(一)作者：張洪娟，張妍妍 隋軍，徐鵬【摘要】 目的建立獨(dú)角蓮中肉桂酸的高效液相含量測(cè)定方法；比較不同產(chǎn)地獨(dú)角蓮中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色譜法。色譜柱為迪馬-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）；以甲醇0.1%磷酸=4951為流動(dòng)相；流速為1ml/min；檢測(cè)波長為280nm。結(jié)果肉桂酸在0.21 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 5，平均回收率為99.58%，RSD為0.95%。結(jié)論不同產(chǎn)地獨(dú)角蓮肉桂酸的含量范圍為5.247 043.677 6 g/g，差異較大。該方法測(cè)定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為獨(dú)角蓮藥材的質(zhì)量控制方法

2、。 【關(guān)鍵詞】 獨(dú)角蓮 肉桂酸 高效液相色譜法獨(dú)角蓮為天南星科梨頭尖屬植物獨(dú)角蓮Typhonium giganteum Engl.的塊莖，具有祛風(fēng)痰、定驚搐、解毒散結(jié)止痛的功能。臨床應(yīng)用于治療腦血管病、面神經(jīng)麻木、頸淋巴結(jié)核、慢性支氣管炎等1，此外還用于美容祛斑方面。近年來有報(bào)道獨(dú)角蓮對(duì)瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。本文以肉桂酸為考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定獨(dú)角蓮中肉桂酸含量，可有效控制獨(dú)角蓮藥材質(zhì)量。1 儀器和試藥1.1 儀器島津LC-10AS泵，島津SPD-10A檢測(cè)器，島津UV-160A紫外分光光度儀，昆山KQ-250B型超聲儀，Sartorius BP211D型電子天平。1.2 藥品肉桂酸

3、對(duì)照品，購于中國藥品生物制品檢定所；獨(dú)角蓮藥材（均為鮮品，切片后自然干燥至水分符合規(guī)定），購于各產(chǎn)區(qū)，經(jīng)黑龍江省藥品檢驗(yàn)所初東君主任藥師鑒定符合中國藥典2005版規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)2。1.3 試劑甲醇為色譜純（迪馬公司）；磷酸為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心；水為超純水，其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件3色譜柱為迪馬-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）；流動(dòng)相為甲醇0.1%磷酸=4951；流速1 ml/min；檢測(cè)波長280 nm；柱溫為室溫。按上述色譜條件，理論塔板數(shù)按肉桂酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取肉桂酸對(duì)照品適量

4、，加甲醇溶解并稀釋制成濃度為0.03 mg/ml的肉桂酸對(duì)照品溶液。2.3 供試品溶液的配制與測(cè)定 取獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）2 g，精密稱定，加5%鹽酸溶液1 ml攪拌均勻，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇（21）溶液20 ml，室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 ml，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，即得供試品溶液。2.4 檢測(cè)波長的測(cè)定取肉桂酸對(duì)照品溶液，在200400 nm波長進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，肉桂酸在280 nm處有最大吸收。確立肉桂酸檢測(cè)波長為280 nm。2.5 供試品提取條件的確定2.5.1 溶劑的選擇根據(jù)肉桂酸溶解度擬選擇甲醇、50%甲醇、三

5、氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚以及三氯甲烷-甲醇不同比例混合溶劑為提取溶劑。實(shí)驗(yàn)方法：取獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）2 g，9份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻。分別加入不同溶劑20 ml，于室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 ml，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量（見表1）。結(jié)果顯示，以三氯甲烷-甲醇（21）為提取溶劑時(shí)，提取率最高，且無雜質(zhì)干擾，故選擇氯仿-甲醇（21）作為提取溶劑。圖1 肉桂酸對(duì)照品HPLC圖（略）圖2 獨(dú)角蓮藥材HPLC圖（略）2.5.2 提取方法篩選取獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩

6、）2 g，3份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻，加入氯仿-甲醇（21）20 ml。分別采取超聲處理30 min、室溫浸泡30 min和加熱回流30 min 3種方法，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積（見表2）。結(jié)果顯示，室溫浸泡30 min，得肉桂酸含量最高，重復(fù)性較好，且方法簡單易操作。表1 溶劑的選擇結(jié)果（略）表2 提取方法篩選結(jié)果（略）2.5.3 提取時(shí)間的考察取獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）2 g，5份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻，精密加入三氯甲烷-

7、甲醇（21）溶劑20 ml，室溫下分別浸泡10，20，30，45，60 min，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 ml，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量（見表3）。結(jié)果顯示，提取時(shí)間為30，45，60 min時(shí)，肉桂酸含量最高，且無明顯差異，故選擇提取時(shí)間為30 min最佳。表3 提取時(shí)間的考察結(jié)果（略）2.6 線性關(guān)系考察精密量取肉桂酸對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度為1 mg/ml的對(duì)照品溶液，搖勻，再精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀釋至10 ml，再分別注入高效液相色

8、譜儀各10 l，按上述色譜條件測(cè)定其峰面積積分值，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=4 860.9X + 31 936，r=0.999 5，線性范圍0.21g，峰面積RSD=1.20。2.7 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一份供試品溶液10 l，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定供試品中肉桂酸峰面積積分值。結(jié)果見表4。表4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一批獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）2 g，6份,分別制備供試品溶液。測(cè)定肉桂酸含量，結(jié)果見表5。表5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.9 回收率實(shí)驗(yàn)取已知肉桂酸含量的獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）1 g，6份，精密稱定，分別加入6 g/ml肉

9、桂酸對(duì)照品1 ml，按照“2.3”項(xiàng)供試品溶液的制備方法操作。分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 l注入色譜儀。測(cè)得其峰面積，并計(jì)算回收率（見表6）。結(jié)果表明，平均回收率為99.58%，RSD為0.95%。表6 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.10 樣品的含量測(cè)定（7個(gè)不同產(chǎn)地）取各產(chǎn)地獨(dú)角蓮藥材粉末（過3號(hào)篩）2 g，精密稱定，置于具塞瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml攪拌均勻，加三氯甲烷-甲醇（21）溶劑20 ml，室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 ml，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，作為供試品溶液。測(cè)定，計(jì)算肉桂酸含量。結(jié)果見表7。表7 樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）“-”：未檢

10、出3 討論在選用三氯甲烷-甲醇（21）為提取溶劑時(shí)，未經(jīng)過酸化處理時(shí)，峰面積較小。經(jīng)過酸化處理后，提取液直接進(jìn)樣，雖然峰面積增大，但峰形呈“饅頭峰”，保留時(shí)間提前，且有雜質(zhì)峰。而以甲醇為提取溶劑時(shí)，雖然峰面積相對(duì)較小，但峰形較好，分離度高，且雜質(zhì)峰少。所以在選擇方法時(shí)，考慮應(yīng)先酸化處理藥粉，用三氯甲烷-甲醇（21）溶劑提取，將提取液揮干，用甲醇溶解后進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)肉桂酸受熱時(shí)脫羧分解的性質(zhì)，研究中考察了浸泡、超聲、加熱回流3種處理方法。結(jié)果顯示，浸泡處理得到的供試品溶液中肉桂酸含量較高，經(jīng)過如此處理發(fā)現(xiàn)，不僅提取率提高，而且分離度很好，雜質(zhì)峰較少。實(shí)驗(yàn)中選擇全國具有地域代表性的7個(gè)產(chǎn)地獨(dú)角蓮藥材，測(cè)得肉桂酸的含量范圍在5.247 043.677 6 g/g之間。由此可知，肉桂酸在不同產(chǎn)地獨(dú)角蓮中含量差異極大，甚至個(gè)別產(chǎn)地藥材中未檢出，可能由于地域、采收季節(jié)、種植、加工過程等原因，導(dǎo)致了肉桂酸含量差異。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)獨(dú)角蓮中肉桂酸含量測(cè)定方法的研究，建立了測(cè)定準(zhǔn)確、重復(fù)性好的方法。