單寧含量測(cè)定(三種方法)

1、不同方法測(cè)定單寧（不同方法測(cè)定單寧（tannin）含）含量量的比較研究 方法一方法一、 比色法比色法一、一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解單寧的性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法了解單寧的性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 樣品中的單寧在堿性溶液中將磷鎢鉬酸還原，生成深藍(lán)樣品中的單寧在堿性溶液中將磷鎢鉬酸還原，生成深藍(lán)色化合物，其顏色的深淺與單寧的含量成正比，可與標(biāo)準(zhǔn)色化合物，其顏色的深淺與單寧的含量成正比，可與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較定量。進(jìn)行比較定量。三、材料、儀器與試劑三、材料、儀器與試劑 1、材料：、材料： 香蕉（未熟透）香蕉（未熟透）50g 2、儀器：、儀器： 天平天平 組織搗碎機(jī)

2、組織搗碎機(jī) 燒杯燒杯 移液管移液管 分光光度計(jì)分光光度計(jì) 容量瓶容量瓶 恒溫箱恒溫箱 （30） 3、試劑、試劑 ： 標(biāo)準(zhǔn)單寧酸溶液（標(biāo)準(zhǔn)單寧酸溶液（0.5mg/mL）：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)單寧）：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)單寧 酸酸50 mg，溶解后用水稀釋至，溶解后用水稀釋至100 mL，用時(shí)現(xiàn)配。，用時(shí)現(xiàn)配。 F-D( Folin-Donis)試劑：稱取鎢酸鈉（試劑：稱取鎢酸鈉（Na2WO4H2O） 50g、磷鉬酸、磷鉬酸10g，置于，置于500mL錐形瓶中，加錐形瓶中，加375mL水溶解，水溶解， 再加磷酸再加磷酸25mL，連接冷凝管，在沸水浴上加熱回流，連接冷凝管，在沸水浴上加熱回流2h，冷卻，冷卻 后用水

3、稀釋至后用水稀釋至500mL。 60g/L 偏磷酸溶液。偏磷酸溶液。 1 mol/L碳酸鈉溶液：稱取無水碳酸鈉碳酸鈉溶液：稱取無水碳酸鈉53g，加水溶解并稀釋，加水溶解并稀釋至至500mL。 95%和和75%乙醇溶液。乙醇溶液。 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 按下表編號(hào)，分別加入試劑按下表編號(hào)，分別加入試劑 于于50mL容量瓶，加完后，劇容量瓶，加完后，劇 烈烈 振搖，以蒸餾水稀釋至刻度，充分混合，于振搖，以蒸餾水稀釋至刻度，充分混合，于30恒溫箱中放恒溫箱中放置置 ， 1.5h后，用分光光度計(jì)在波長后，用分光光度計(jì)在波長680處測(cè)定吸光值，并處測(cè)定吸光值，并

4、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、樣品測(cè)定、樣品測(cè)定 果實(shí)去皮，迅速稱取果實(shí)去皮，迅速稱取50g，加入，加入95%乙醇乙醇 50mL、偏磷酸、偏磷酸50mL、水、水50mL，置于高速組織搗碎機(jī)中打漿，置于高速組織搗碎機(jī)中打漿1min（或在研缽（或在研缽中研磨成漿狀）。稱取勻漿中研磨成漿狀）。稱取勻漿20于于100容量瓶中，加容量瓶中，加75%乙醇乙醇40mL，在沸水浴中加熱，在沸水浴中加熱20min，冷卻后用，冷卻后用75%乙醇稀釋至刻乙醇稀釋至刻度。充分混合，以慢速定量濾紙過濾，棄去初濾液。度。充分混合，以慢速定量濾紙過濾，棄去初濾液。 吸取上述濾液吸取上述濾液2置于已盛有置于已盛有25mL蒸

5、餾水、蒸餾水、2.5mLF-D試劑的試劑的50mL容量瓶中，然后加入，劇烈振搖后，以水稀釋至刻度，容量瓶中，然后加入，劇烈振搖后，以水稀釋至刻度，充分搖勻（此時(shí)溶液的藍(lán)色逐漸產(chǎn)生）。同時(shí)做空白試驗(yàn)。充分搖勻（此時(shí)溶液的藍(lán)色逐漸產(chǎn)生）。同時(shí)做空白試驗(yàn)。 于于30 恒溫箱中放置后，用分光光度計(jì)在波長處，以試劑恒溫箱中放置后，用分光光度計(jì)在波長處，以試劑空白調(diào)零，測(cè)定吸光值。空白調(diào)零，測(cè)定吸光值。 四、結(jié)果計(jì)算式中: x樣品中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，樣品中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； c 比色用樣品溶液中單寧的含量（由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得比色用樣品溶液中單寧的含量（由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得 ），），g； m 樣品質(zhì)量，樣品質(zhì)量，g；

6、 K 稀釋倍數(shù)，如按上述方法取樣稀釋倍數(shù)，如按上述方法取樣50時(shí)，時(shí)，K=（20/200）（2/100）=1/500 五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 1、樣品處理時(shí)要盡快進(jìn)行，以免單寧氧化而造成誤差。、樣品處理時(shí)要盡快進(jìn)行，以免單寧氧化而造成誤差。 2、維生素維生素C也能與也能與F-D試劑試劑作用產(chǎn)生作用產(chǎn)生藍(lán)色藍(lán)色，因此當(dāng)樣品含，因此當(dāng)樣品含有維生素有維生素C時(shí)需要進(jìn)行校正，時(shí)需要進(jìn)行校正，1維生素維生素C相當(dāng)于相當(dāng)于0.8單寧單寧酸。酸。610100cxmK方法二、EDTA絡(luò)合滴定法一、一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解單寧的性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法了解單寧的性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法二

7、、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 根據(jù)單寧可與重金屬離子形成絡(luò)合物沉淀的性質(zhì)，在樣品提取根據(jù)單寧可與重金屬離子形成絡(luò)合物沉淀的性質(zhì)，在樣品提取液中加入過量的標(biāo)準(zhǔn)液中加入過量的標(biāo)準(zhǔn)Zn(Ac)2溶液，待反應(yīng)完全后，再用溶液，待反應(yīng)完全后，再用EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定剩余的，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定剩余的，根據(jù)EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，可計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，可計(jì)算出樣品中單寧的含量。樣品中單寧的含量。 三、材料、儀器與試劑三、材料、儀器與試劑 1、材料：、材料： 香蕉（未熟透）香蕉（未熟透）5g 2、儀器：容量瓶?jī)x器：容量瓶 電子天平電子天平 研缽研缽 堿式滴定管堿式滴定管 3 3、試劑：、試劑：1.000 mol

8、/L1.000 mol/L醋酸鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取醋酸鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取Zn(Ac)Zn(Ac)22H H2 2 O O 21.95g,21.95g,用水溶解后定容至用水溶解后定容至100mL100mL。0.0500 0.0500 mol/Lmol/L乙二胺四乙酸二鈉（乙二胺四乙酸二鈉（EDTAEDTA）標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱?。?biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取乙二胺四乙酸二鈉乙二胺四乙酸二鈉9.3069.306g,g,溶解于水，并用水稀釋至溶解于水，并用水稀釋至500mL.500mL.pH=10pH=10的的NHNH3 3-NH-NH4 4ClCl緩沖溶液：稱取緩沖溶液：稱取54gNH54gNH4 4Cl C

9、l 加水溶解后加入濃加水溶解后加入濃氨水氨水350mL,350mL,用水定容至用水定容至1000mL1000mL。鉻黑鉻黑T T指示劑：稱取指示劑：稱取0.590.59鉻黑鉻黑T T，溶于，溶于10mL pH=1010mL pH=10的的NHNH3 3-NH-NH4 4ClCl緩沖溶液中，用緩沖溶液中，用95%95%乙醇定容至乙醇定容至100mL100mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 1.1.樣品處理樣品處理 稱取切碎混勻的樣品稱取切碎混勻的樣品510g510g，置于研缽中，加少許石英砂研，置于研缽中，加少許石英砂研磨成漿狀（干樣品經(jīng)磨碎過篩后，準(zhǔn)確稱取磨成漿狀（干樣品經(jīng)磨碎過篩后，準(zhǔn)確稱取12

10、g12g），轉(zhuǎn)入），轉(zhuǎn)入150mL150mL錐形瓶中，用錐形瓶中，用50mL50mL水分多次洗凈研缽，洗液一并轉(zhuǎn)入錐水分多次洗凈研缽，洗液一并轉(zhuǎn)入錐形瓶中，振動(dòng)、提取形瓶中，振動(dòng)、提取1015min.1015min.2.2.絡(luò)合沉淀絡(luò)合沉淀 在在100mL100mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入容量瓶中，準(zhǔn)確加入ZnZn（AcAc）2 2標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL5mL、濃氨、濃氨水水3.5mL3.5mL，搖勻（開始有白色沉淀產(chǎn)生，搖動(dòng)使沉淀溶解）。，搖勻（開始有白色沉淀產(chǎn)生，搖動(dòng)使沉淀溶解）。慢慢將提取物轉(zhuǎn)入容量瓶中，不斷振搖，在慢慢將提取物轉(zhuǎn)入容量瓶中，不斷振搖，在3535水浴中保溫水浴中保溫2030mi

11、n.冷卻，用水定容至冷卻，用水定容至100mL，充分混勻，靜置、過濾，充分混勻，靜置、過濾 （處濾液棄去）。（處濾液棄去）。 3.滴定滴定 準(zhǔn)確吸取濾液準(zhǔn)確吸取濾液10mL，置于，置于150mL錐形瓶中。加水錐形瓶中。加水40mL、NH3-NH4Cl緩沖溶液緩沖溶液12.5mL、鉻黑、鉻黑T指示劑指示劑10滴，混勻。用滴，混勻。用0.0500mol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由酒紅色變?yōu)榧兊臉?biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由酒紅色變?yōu)榧兯{(lán)色金額為終點(diǎn)。藍(lán)色金額為終點(diǎn)。四、注意事項(xiàng)四、注意事項(xiàng)1.單寧遇單寧遇Fe3+會(huì)發(fā)生顏色反應(yīng)，因此處理樣品時(shí)，不能與分歧會(huì)發(fā)生顏色反應(yīng)，因此處理樣品時(shí)，不能與分歧接觸，切碎樣品

12、應(yīng)采用不銹鋼刀。接觸，切碎樣品應(yīng)采用不銹鋼刀。2.單寧容易被氧化，樣品處理后應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)要注意單寧容易被氧化，樣品處理后應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)要注意控制加熱溫度，加熱過程中要加些搖動(dòng)數(shù)次，意識(shí)反應(yīng)完全?？刂萍訜釡囟龋訜徇^程中要加些搖動(dòng)數(shù)次，意識(shí)反應(yīng)完全。結(jié)果計(jì)算1122(10)0.1556100c Vc Vxm式中式中: 樣品中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，樣品中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，（）（）標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，吸?。ǎ┪。ǎ?biāo)準(zhǔn)溶液的體積，標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLEDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度， V2滴定時(shí)消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，滴定時(shí)消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積， mL0.1556由實(shí)驗(yàn)得出的比例

13、常數(shù)，由實(shí)驗(yàn)得出的比例常數(shù)，樣品質(zhì)量，樣品質(zhì)量， 10分取倍數(shù)，及樣品絡(luò)合沉淀后定容至分取倍數(shù)，及樣品絡(luò)合沉淀后定容至100mL，吸取其中的，吸取其中的1/10進(jìn)行滴定。進(jìn)行滴定。方方法三、高錳酸鉀法法三、高錳酸鉀法 一、目的一、目的 了解單寧性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法了解單寧性質(zhì)及熟練掌握單寧含量的測(cè)定方法 二、原理二、原理 作為多酚，單寧是一種強(qiáng)還原劑，極易被氧化劑氧化，還可作為多酚，單寧是一種強(qiáng)還原劑，極易被氧化劑氧化，還可被活性炭吸附。本測(cè)定以高錳酸鉀為氧化劑，根據(jù)樣品中單寧被活性炭吸附。本測(cè)定以高錳酸鉀為氧化劑，根據(jù)樣品中單寧可以被活性炭吸附，測(cè)定樣品液用活性碳吸附前后的氧化值

14、之可以被活性炭吸附，測(cè)定樣品液用活性碳吸附前后的氧化值之差，計(jì)算單寧物質(zhì)的含量。差，計(jì)算單寧物質(zhì)的含量。 三、材料、儀器與試劑三、材料、儀器與試劑 1、材料：香蕉（未熟透）、材料：香蕉（未熟透） 2、儀器、儀器 ：天平：天平 研缽研缽 燒杯（燒杯（50、100mL） 漏斗漏斗 濾紙（濾紙（1515）2 2張張 刻度試管（刻度試管（5 5、10mL10mL） 三角瓶（三角瓶（100mL100mL） 量筒量筒10mL10mL 25mL 25mL堿式滴定管堿式滴定管 容量瓶容量瓶 100mL100mL 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋5050 3 3 、試劑、試劑 0.01 0.01 mol/Lmol/L KM

15、nO KMnO4 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取約標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取約1.60g KMnO1.60g KMnO4 4溶于溶于1000mL1000mL蒸餾水中，蓋蒸餾水中，蓋上表面皿，加熱至沸并保持微沸狀態(tài)約上表面皿，加熱至沸并保持微沸狀態(tài)約1h1h。冷卻后，放暗處約一周后用垂熔。冷卻后，放暗處約一周后用垂熔玻璃漏斗或玻璃絲過濾。將濾液轉(zhuǎn)至棕色瓶?jī)?nèi)暗處保存。用玻璃漏斗或玻璃絲過濾。將濾液轉(zhuǎn)至棕色瓶?jī)?nèi)暗處保存。用NaCNaC2 2O O4 4標(biāo)定標(biāo)定KMnOKMnO4 4 。 2.5 2.5 mol/Lmol/L硫酸溶液：取硫酸溶液：取138.8mL138.8mL濃硫酸稀釋至濃硫酸稀釋至1000mL1000mL。

16、 活性炭活性炭 四、操作步驟四、操作步驟 1 1、稱取、稱取5g5g樣品在研缽中研磨成勻漿，用漏斗轉(zhuǎn)移容量瓶定容至樣品在研缽中研磨成勻漿，用漏斗轉(zhuǎn)移容量瓶定容至 100mL100mL，混勻后，混勻后用干燥濾過濾，保留濾液。用干燥濾過濾，保留濾液。2 2、吸取樣品濾液、吸取樣品濾液5.0mL5.0mL，于，于100mL100mL三角瓶中，加三角瓶中，加10mL10mL水和水和5mL 2.5 5mL 2.5 mol/L Hmol/L H2 2SOSO4 4，混勻，微熱（混勻，微熱（5050）5min5min后用后用0.01 0.01 mol/Lmol/L KMnO KMnO4 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡

17、粉色維持標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡粉色維持30s30s不褪色即為終點(diǎn)，記下消耗的體積不褪色即為終點(diǎn)，記下消耗的體積V V1 1，重復(fù)一次做兩個(gè)平行樣。，重復(fù)一次做兩個(gè)平行樣。3 3、吸取樣品濾液、吸取樣品濾液5.0mL5.0mL，于，于100mL100mL燒杯中，并加燒杯中，并加3g3g活性炭，加熱攪拌活性炭，加熱攪拌10min10min，過濾，過濾用少量的熱蒸餾水沖洗殘?jiān)?，收集的濾液中加用少量的熱蒸餾水沖洗殘?jiān)?，收集的濾液中加2.5 2.5 mol/Lmol/L硫酸硫酸5mL5mL，同樣用，同樣用0.01 0.01 mol/Lmol/L KMnO KMnO4 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記下消耗的體積標(biāo)準(zhǔn)

18、溶液滴定至終點(diǎn)，記下消耗的體積V V2 2, ,重復(fù)一次做兩個(gè)重復(fù)一次做兩個(gè)平行樣。平行樣。 12() 0.04157100c V Vxm式中：式中： CKMnO4 摩爾濃度，摩爾濃度，mol/L V1滴定樣品消耗滴定樣品消耗KMnO4 的毫升數(shù)，的毫升數(shù)，mL V2活性碳吸附單寧后所消耗的活性碳吸附單寧后所消耗的KMnO4的毫的毫升數(shù)，升數(shù)，mL W樣品克數(shù)，樣品克數(shù)，g 0.04161mL 0.01 mol/L KMnO4 溶液相當(dāng)溶液相當(dāng)于單寧的毫克數(shù)，于單寧的毫克數(shù)，mg六、記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果項(xiàng)目項(xiàng)目樣品樣品活性碳吸附后樣品活性碳吸附后樣品消耗消耗VKMnOKMnO4 4 （mLmL）平均消耗平均消耗VKMnOKMnO4 4 （mLmL）單寧含量單寧含量（mg/100g）七、注意事項(xiàng)n1、過濾時(shí)由于溶液粘度大，過濾緩慢，只保、過濾時(shí)由于溶液粘度大，過濾緩慢，只保留接下來的留接