抗眩暈方藥兩種方法提取液的成分比較(一)

1、抗眩暈方藥兩種方法提取液的成分比較(一)    作者：喬曉莉，李婉晴，王洪志，樊華，劉勇【摘要】 目的對抗眩暈方藥半仿生提取法(簡稱SBE法)和水提取法(簡稱WE法)兩種方法的提取液進行比較。方法以澤瀉醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸以及大黃素與大黃酚之和、總生物堿、干浸膏含量為指標(biāo)，利用高效液相色譜法、紫外分光光度法測定其含量。結(jié)果SBE液各指標(biāo)成分含量均高于WE液，二者反相液相色譜圖，SBE液多數(shù)共有峰的峰面積積分值均高于WE液。結(jié)論抗眩暈方藥兩種提取液中，以SBE法明顯優(yōu)于WE法。 【關(guān)鍵詞】 抗眩暈; 半仿生提取法; 水提取法抗眩暈方藥為我院治療梅尼埃

2、氏病的特色制劑，根據(jù)半仿生提取理論，在優(yōu)選其最優(yōu)提取條件的基礎(chǔ)上，以澤瀉醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸等為指標(biāo)，對半仿生提取法與水提取法兩種提取液進行了成分比較研究。1 儀器與藥品LC-10A型高效液相色譜儀，島津SPD-10A紫外檢測器， AUTO SCIENCE AT-330 柱溫箱，AGT C18色譜柱(4.6mm×250mm,5m);島津UV-160A紫外分光光度儀;RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(天津第一玻璃廠);KQ3200型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器廠);PHS-3C型酸度計(浙江簫山科學(xué)儀器廠);試劑均為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水。澤瀉醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸、大黃酚、大

3、黃素、鹽酸水蘇堿對照品(中國藥品生物制品檢定所)。澤瀉、白術(shù)、川芎、益母草、鉤藤、決明子藥材均購自天津市中藥飲片廠。2 方法與結(jié)果2.1 供試液的制備2.1.1 水提取液按處方比例稱取澤瀉12.30 g，白術(shù)6.16 g，川芎10.26 g，益母草10.26 g，決明子6.16 g，置圓底燒瓶內(nèi)，按常規(guī)水提取法用1 000 W電熱套加熱回流提取3次(加水量分別為10，8，6倍，煎煮時間分別為2.0，1.5，1.5h)，提取液用4層紗布過濾，60減壓蒸至11，以水定容至110 ml，得WE液。2.1.2 半仿生提取液按照“2.1.1”項下方法，用10%HCl調(diào)第一煎pH值為2.0，用10%NaO

4、H分別調(diào)第二煎、第三煎pH值為7.5，8.5，依法制得SBE液。2.2 澤瀉醇B乙酸酯的含量測定1，22.2.1 色譜條件色譜柱為AGT C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 m);流動相為乙腈水(8515);檢測波長：208 nm;流速1.0 ml·min-1;柱溫25;進樣量20 l。2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取澤瀉醇B乙酸酯對照品0.70 mg，用甲醇溶解并稀釋至10 ml，即得70 g·ml-1的對照品溶液。2.2.3 供試品溶液的制備精密吸取“2.1”項下的提取液各5.4 ml于25 ml容量瓶中，加15 ml甲醇超聲30 min，以甲醇

5、定容至25 ml，過濾，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。2.2.4 樣品含量測定 將供試品溶液按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計算樣品含量。結(jié)果見表1。2.3 川芎嗪和阿魏酸的含量測定3，42.3.1 色譜條件色譜柱為AGT C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 m);流動相為甲醇乙腈1%冰乙酸(115);檢測波長280 nm;流速0.8ml·min-1;柱溫25;進樣量20 l。2.3.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取川芎嗪對照品0.60 mg、阿魏酸對照品5.10 mg，用甲醇溶解并稀釋至10 ml，即得對照品溶液的混合溶液(每毫升含川

6、芎嗪60 g，含阿魏酸510 g)。表1 兩種方法提取液中澤瀉醇B乙酸酯含量2.3.3 供試品溶液的制備精密吸取“2.1”項下的提取液各5.4 ml，加25%乙醇80 ml超聲30 min，取40 ml于分液漏斗中，用二氯甲烷萃取3次，每次40 ml，收集二氯甲烷液，以0.1 mol·L-1鹽酸甲醇液調(diào)pH1.2，揮干，用甲醇定容至10 ml，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。2.3.4 樣品含量測定將供試品溶液按“2.3.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計算樣品含量。結(jié)果見表23。表2 兩種方法提取液中川芎嗪含量表3 兩種方法提取液中阿魏酸含量2.4 大黃素、大黃酚之和含

7、量測定5，62.4.1 色譜條件色譜柱：AGT C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5m);流動相：甲醇-0.1%磷酸(8515);檢測波長：254 nm;流速：1.0 ml·min-1;柱溫：25;進樣量20 l。2.4.2 對照品溶液的配制分別精密稱取大黃素對照品0.12 mg，大黃酚對照品0.26 mg，用甲醇溶解并稀釋至10 ml，即得對照品溶液的混合溶液(每毫升含大黃素12 g，含大黃酚26 g)。2.4.3 供試品溶液的制備精密吸取“2.1”項下的提取液各25 ml于分液漏斗中，用氯仿萃取4次，每次30 ml，收集氯仿液，減壓濃縮至干，殘渣加無水乙醇醋酸乙

8、酯(21)溶解并定容至10 ml，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。2.4.4 樣品含量測定將供試品溶液按“2.4.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計算樣品含量。結(jié)果見表4。2.5 總生物堿的含量測定7，82.5.1 對照品溶液的制備精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液溶解并稀釋，得到鹽酸水蘇堿濃度為0.216 mg·ml-1的對照品溶液。表4 兩種方法提取液中大黃素和大黃酚含量之和2.5.2 供試品溶液的制備精密吸取“2.1”項下的提取液各30 ml旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液10 ml使溶解，離心，抽濾，分

9、2次(共10 ml)洗滌離心的殘渣，再離心并抽濾，合并兩次濾液用0.1 mol·L-1鹽酸溶液定容至25 ml，精密吸取10 ml于燒杯中，加活性炭0.5 g于沸水浴中加熱0.5 min，邊加熱邊攪拌，濾至25 ml容量瓶中，加2%新配制的雷氏鹽2 ml ，再用0.1 mol·L-1鹽酸溶液定容至25 ml，在冰水浴中放置1 h，過濾，取續(xù)濾液進行測定。取對照品溶液10 ml，同上提取作為對照品溶液;以0.1 mol·L-1鹽酸溶液10 ml同上提取作空白溶液。2.5.3 樣品含量測定將上述樣品溶液、對照品溶液、空白溶液利用紫外分光光度法在525 nm波長處進行測

10、定，總生物堿含量以鹽酸水蘇堿計算。結(jié)果見表5。表5 兩種方法提取液中總生物堿含量2.6 干浸膏的含量測定9按照中國藥典部附錄X.A浸出物測定法，取“2.1”項下的提取液各5.4 ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105烘干3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，即刻精密稱重，計算干浸膏的含量。結(jié)果見表6。表6 兩種方法提取液中干浸膏含量2.7 WE液與SBE液的多成分反相液相色譜精密吸取“2.1”項下的提取液各5 ml，加醋酸乙酯萃取3次，每次20 ml，合并醋酸乙酯液，揮干，殘渣加甲醇定容至10 ml，微孔濾膜濾過后進樣20 l，進行色譜分析。采用AGT C18色譜柱(4.6 mm

11、×250 mm，5 m);流動相為A：甲醇，B：0.1%甲酸水溶液;梯度洗脫條件：B：80%35%(0110 min)，35%(110130 min);檢測波長為280 nm;流速0.8 ml·min-1;柱溫25;進樣量20 l。兩種提取液色譜圖見圖1，各吸收峰面積積分值見表7。表7 兩種方法提取液色譜圖中吸收峰面積積分值圖1 兩種提取液色譜圖3 討論以澤瀉醇B乙酸酯、川芎嗪和阿魏酸及大黃素大黃酚之和、總生物堿、干浸膏含量為指標(biāo)，對抗眩暈方藥兩種提取液成分進行比較，結(jié)果，SBE法明顯優(yōu)于WE法。抗眩暈方藥SBE法與WE法多成分反相液相色譜圖表明，SBE液檢出15個吸收峰，

12、而WE液只檢出9個吸收峰，SBE液色譜圖中除7號峰面積積分值低于WE液外，其它峰面積積分值均高于WE液。本文及多種制劑研究報道提示10，11，SBE法具有許多的優(yōu)越性，在中藥方藥的提取過程中，有著廣闊的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 段 啟，龔千峰，王少軍，等.中藥飲片澤瀉的炮制工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，27(3):51.2 文紅梅，彭國平，池玉梅，等.澤瀉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究-澤瀉中2種澤瀉醇的HPLC測定法J.中國臨床藥理學(xué)雜志，1998，18(6):375.3 蘭 順.高效液相色譜法測定復(fù)方川芎膠囊中川芎嗪的含量J.中國實驗方劑學(xué)雜志，2004，10(5):1.4 桂 卉，肖錦仁，鄒 龍.HPLC考察川芎茶調(diào)顆粒制備中川芎嗪的動態(tài)變化J.中成藥，2003，25(4):279.5 馮映冰，龔志萍.決明子中大黃酚含量的反相HPLC法測定J.分析測試學(xué)報，1999，18(4):79.6 余建清，雷嘉川，馬俊玲，等.不同炮制方法對決明子中蒽醌類成分的影響J.中醫(yī)藥學(xué)報，2000，28(6):35.7 晁 志，王厄舟，周秀佳.益母草藥材中生物堿含量與產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境的關(guān)系J.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2000，20(6):504.8