鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)

1、鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)    【摘要】 目的觀察鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片的主要藥理作用。方法采用小鼠因氨水所致咳嗽法、豚鼠因枸櫞酸所致咳嗽法觀察其鎮(zhèn)咳作用；小鼠呼吸道酚紅排痰量法、大鼠毛細(xì)管排痰量法觀察其祛痰作用；組胺所致豚鼠“哮喘”法觀察其平喘作用。結(jié)果鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片可以延長(zhǎng)小鼠因氨水所致的咳嗽潛伏期及因枸櫞酸所致豚鼠的咳嗽潛伏期，同時(shí)減少咳嗽次數(shù)；可以增加小鼠呼吸道的酚紅排痰量及增加大鼠毛細(xì)管的排痰量；可以對(duì)抗動(dòng)物因組胺引起的“哮喘”癥狀。結(jié)論鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用。 【關(guān)鍵詞】 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片；鎮(zhèn)咳； 祛痰； 平喘Ab

2、stract：ObjectiveTo observe pharmacological effects of Zhenke Zhichuan Tablets.MethodsThe cough-relieving effect of Zhenke Zhichuan Tablets was observed by mouse cough model induced by NH4OH and guine-pig cough model induced by citric acid with capillary method; observation on the phlegm expelling ef

3、fect was completed by using phenol red and by observing the phlegm expelling from the respiratory tract of adult mouse; the effect of anti-asthma was observed through the asthma caused by histamine. ResultsZhenke Zhichuan Tablets could apparently prolong the coughing incubation period and reduce cou

4、ghing frequency ; increase excretion of phenol red and phlegm from the respiratory tract;resist asthma caused by histamine.ConclusionZhenke Zhichuan Tablets has a therapeutic effect of relieving cough and expelling phlegm and anti-asthma.Key words： Zhenke Zhichuan Tablets； Relieving cough； Expelling

5、 phlegm; Anti-asthma鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片是由中藥顆粒劑經(jīng)劑型改造而成的新藥，具有吸收速度快、服用方便、易于運(yùn)輸保存等特點(diǎn)，功能為清熱宣肺、化痰止咳，臨床上可以用于上呼吸道感染、氣管炎、肺炎等。我們對(duì)其鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的藥理作用進(jìn)行了研究，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。1 材料與儀器1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動(dòng)準(zhǔn)第01號(hào)；英國(guó)種豚鼠；Wister大鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動(dòng)準(zhǔn)第02號(hào)。安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2 藥品與試劑鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片，安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供，批號(hào)040618；鎮(zhèn)咳止喘顆粒，安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供，批號(hào)20031223；氨水，上海試劑

6、一廠綜合經(jīng)營(yíng)公司產(chǎn)品，濃度28%，AR級(jí)，批號(hào)20020327；枸櫞酸，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，AR級(jí)，批號(hào)20020116；苯酚紅，北京市朝陽(yáng)區(qū)旭東化工廠產(chǎn)品，批號(hào)990609；烏拉坦，中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品產(chǎn)品，批號(hào)20011105；磷酸組織胺，中國(guó)藥品生物制品檢定所出品，25 mg/支，批號(hào)5109411。1.3 儀器東芝空氣壓縮機(jī)，日本產(chǎn)。721分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠出品。80-2沉淀離心機(jī)，上海手術(shù)器械廠產(chǎn)品。毛細(xì)管，內(nèi)徑0.8mm，長(zhǎng)度56cm。手術(shù)器械若干。2 方法2.1 鎮(zhèn)咳作用2.1.1 對(duì)小鼠因氨水所致咳嗽的影響參照文獻(xiàn)1，取體重1822 g的小

7、鼠50只，各半，隨機(jī)分成5組，分別灌胃給予0.2 ml/10 g相應(yīng)供試液，第1天上、下午各1次，第2天給完藥后30 min時(shí)將小鼠置于5 000 ml玻璃鐘罩內(nèi)，以400500 mmHg 恒壓將氨水（28%）噴入鐘罩，噴霧5 s，然后觀察記錄小鼠的咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)（3 min）。動(dòng)物在第1次給藥前24 h進(jìn)行篩選，后再分組，咳嗽標(biāo)準(zhǔn)為：腹肌收縮，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳聲。若潛伏期小于1 min且在1min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽者為“有咳嗽”敏感動(dòng)物，否則作無(wú)咳嗽而淘汰。2.1.2 對(duì)豚鼠因枸櫞酸所致咳嗽的影響參照文獻(xiàn)2，取體重100200 g的純白色豚鼠（對(duì)咳嗽及哮喘較敏感），兼用，篩選

8、40只后隨機(jī)分為5組，每組8只。給藥容積為1.0 ml/100 g，第1天上、下午各給藥1次，第2 天上午給藥后30 min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物置于5 000 ml的密閉鐘罩內(nèi)，以400500 mmHg 恒壓通過(guò)噴頭將17.5%枸櫞酸噴入鐘罩，噴霧1 min，然后觀察記錄6 min內(nèi)豚鼠的咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)，加以組間比較并作統(tǒng)計(jì)分析。首先在給藥前1天對(duì)豚鼠進(jìn)行篩選，6 min內(nèi)豚鼠的咳嗽次數(shù)少于10次或大于30次均作淘汰。2.2 祛痰作用2.2.1 對(duì)小鼠呼吸道酚紅排痰量的影響測(cè)定酚紅最大吸收峰：參照文獻(xiàn)2方法，酚紅含量測(cè)定略作改變。在100 ml容量瓶?jī)?nèi)精確配制濃度為1 mg/ml的酚紅母液，

9、再配每毫升含酚紅0.01，0.1，0.5，0.7，1，3，5，10 g溶液，分裝于8個(gè)10 ml容量瓶?jī)?nèi)。任取兩管溶液，以未知酚紅的0管作對(duì)照，用721分光光度計(jì)在波長(zhǎng)420570 nm范圍內(nèi)，測(cè)光密度值。最后得酚紅最大吸收峰的波長(zhǎng)在560 nm處。繪制酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線 ：將上述配制的酚紅溶液，分別在560nm波長(zhǎng)處測(cè)光密度值，結(jié)果各管酚紅含量與光密度之間的直線相關(guān)有極顯著意義（相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，P0.001），各數(shù)據(jù)及線性方程如表1。表1 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線及方程（略）實(shí)驗(yàn)操作：參照文獻(xiàn)2，取體重1822 g的小鼠50只，各半，隨機(jī)分成5組，分別灌胃給予0.2 ml/10 g相應(yīng)供試液，第1

10、天上、下午各1次。第2天給完藥后0.5 h時(shí)做實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食812 h，每只小鼠給藥30 min后，腹腔注射酚紅溶液0.5 ml/只。30 min后，脫椎處死，仰位固定。頸部拉直，解剖分離出氣管在氣管下穿一絲線，以備固定氣管插管用。氣管插管（用頭部磨平的9號(hào)針頭）從甲狀軟骨處插入氣管內(nèi)約0.3 cm，用備好的絲線結(jié)扎、固定，用1ml注射器吸取5 d/dl的NaHCO3溶液0.5 ml推注入氣管內(nèi)，反復(fù)連續(xù)推抽3次，灌胃呼吸道。最后用注射器將灌洗液抽出注入試管中，按上述方法操作3次，沖洗9次，共吸取NaHCO3溶液1.5 ml，合并洗出液約1.21.5 ml，離心后取上清液用分光光度計(jì)比色

11、，OD值代入方程，得出酚紅濃度，將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.2.2 對(duì)大鼠毛細(xì)管排痰量的影響參照文獻(xiàn)2，取體重180220 g大鼠30只，各半，每組6只，隨機(jī)分成5組，分別灌胃給予1.0 ml/100 g相應(yīng)供試液。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水812 h后，烏拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定（注意保暖）。剪開(kāi)頸正中部皮膚，分離出氣管。在甲狀軟骨下緣正中的軟骨環(huán)之間用尖銳的注射針頭扎一小孔，然后插入玻璃毛細(xì)管1根，使毛細(xì)管剛好接觸氣管底部表面，借以吸取氣管后部之痰液。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)痰液充滿時(shí)，立即另?yè)Q1根。以毛細(xì)管吸取痰液長(zhǎng)度作為評(píng)價(jià)藥物的祛痰效果。記錄給藥前2 h的正常分泌量后，灌胃給藥后（在給藥1

12、 h后，再按同等劑量重復(fù)給藥1次）繼續(xù)再觀察4h 痰液分泌量。比較給藥前后平均每小時(shí)分泌及與生理鹽水組相比的痰液分泌量，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.3 對(duì)組胺所致豚鼠哮喘的影響參照文獻(xiàn)2，取預(yù)選后體重150200 g豚鼠40只，兼用，隨機(jī)分為5組，每組8只，給藥容積為1.0 ml/100 g，第1天上、下午各給藥1次，第2天上午給藥后0.5 h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物置于5 000 ml的密閉鐘罩內(nèi)，以 400500 mmHg壓力噴入2 mg/ml磷酸組胺1 ml，動(dòng)物在吸入以上藥液后經(jīng)過(guò)一定的潛伏期，即產(chǎn)生“哮喘”反應(yīng)，“哮喘”反應(yīng)按程序分為4級(jí)：級(jí)呼吸加速，級(jí)呼吸困難，級(jí)抽搐，級(jí)跌倒。動(dòng)物一旦出現(xiàn)抽搐，即

13、拉開(kāi)蓋子，必要時(shí)輔以人工呼吸以免動(dòng)物因窒息而死亡。多數(shù)動(dòng)物在90 s以內(nèi)即可以出現(xiàn)或級(jí)反應(yīng)，一般不超過(guò)150 s，超過(guò)150 s者可認(rèn)為不敏感，不予選用,給藥前1天進(jìn)行篩選，潛伏期超過(guò)360 s按360 s計(jì)。3 結(jié)果3.1 鎮(zhèn)咳作用3.1.1 對(duì)小鼠因氨水所致咳嗽的影響鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片小、中、大劑量2.062 5，4.125 0，8.250 0 g·kg-1（分別相當(dāng)于臨床用的5，10，20倍）灌胃給予小鼠3次后，與顆粒（4.125 0 g·kg-1）劑型一樣，可以延長(zhǎng)因氨水所致小鼠的咳嗽潛伏期，同時(shí)減少咳嗽次數(shù)，與生理鹽水組相比較具有顯著意義，潛伏期與對(duì)照組相比分別為P0

14、.05，P0.05和P0.01，咳嗽次數(shù)與對(duì)照組相比分別為P0.01，P0.01和P0.01，但無(wú)明顯量效關(guān)系。提示鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片有一定的鎮(zhèn)咳作用。結(jié)果見(jiàn)表2。 表2 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片對(duì)小鼠因氨水所致咳嗽的影響(略)3.1.2 對(duì)豚鼠因枸櫞酸所致咳嗽的影響 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片小、中、大劑量0.773 4，1.546 9，3.093 8 g·kg-1（相當(dāng)于臨床用量的1.875，3.75，7.5倍），灌胃給予豚鼠3次后，與顆粒劑型（1.546 9 g·kg-1）一樣，可以延長(zhǎng)因枸櫞酸所致豚鼠的咳嗽潛伏期，同時(shí)減少咳嗽次數(shù)，與生理鹽水組相比較具有顯著意義，潛伏期與對(duì)照組相比分別為P0

15、.05，P0.05和P0.01，咳嗽次數(shù)與生理鹽水組相比較分別為P0.05，P>0.05和P0.05，提示鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片具有一定的鎮(zhèn)咳作用。結(jié)果見(jiàn)表3。表3 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片對(duì)豚鼠因枸櫞酸所致咳嗽的影響(略)3.2.1 對(duì)小鼠呼吸道酚紅排痰量的影響 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片小、中、大劑量（2.062 5，4.125 0，8.250 0 g·kg-1，分別相當(dāng)于臨床用量的5，10，20倍）灌胃給予小鼠3次后，可以增加小鼠呼吸道的酚紅排痰量，與生理鹽水組相比具有顯著意義，分別為P0.05，P0.01和P0.05，同顆粒劑型相比，具有相同的藥理效應(yīng)。提示鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片具有一定的鎮(zhèn)咳作用。結(jié)果見(jiàn)表

16、4。表4 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片對(duì)小鼠呼吸道酚紅排痰量的影響(略)3.2.2 對(duì)大鼠毛細(xì)管排痰量的影響鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片小、中、大劑量（1.031 3，2.062 5，4.125 0 g·kg-1，分別相當(dāng)于臨床用量的2.5，5，10倍）灌胃給予大鼠2次后，可以增加大鼠毛細(xì)管的排痰量，與生理鹽水組相比具有顯著意義，分別為P0.01，P0.05和 P0.01；與給藥前相比具有非常顯著意義，分別為P0.01，P0.001和 P0.01，同顆粒劑型相比，具有同等的藥理作用。鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口服后，可以增加其呼吸道排痰量，提示本品具有一定的鎮(zhèn)痰作用。結(jié)果見(jiàn)表5。表5 鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片對(duì)大鼠毛細(xì)管排痰量的影響(略)3.3 對(duì)組胺所致豚鼠哮喘的影響豚鼠經(jīng)呼吸道吸入一定量的磷酸組胺后，可以造成類(lèi)似人類(lèi)的“哮喘”模型。鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片小、中、大劑量（0.773 4，1.546 9，3.093 8 g·kg-1，分別相當(dāng)于臨床用量的1.875，3.75，7.5倍）灌胃給予豚鼠3次后，可以對(duì)抗動(dòng)物因組胺引起的“哮喘”癥狀，表現(xiàn)為動(dòng)物跌倒?jié)摲谘娱L(zhǎng)，與生理鹽水組相比較具有非常顯著意義，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分別為P0.05，P0.01和P0.01。同顆粒劑型相比，具有同等的藥理作用。提示鎮(zhèn)咳止喘咀嚼片具