醫(yī)療器械無菌檢驗方法驗證方案

1、*有限公司無菌檢驗方法驗證方案 驗證方案申請人: 日期: 年 月 日驗證方案審核人: 日期: 年 月 日驗證方案審批人: 日期: 年 月 日1. 概述： 無菌檢查法是為了檢查藥典要求無菌的醫(yī)療器械產(chǎn)品是否無菌而建立的檢查法， 是作為批準無菌產(chǎn)品放行的檢驗或監(jiān)督部門對無菌產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督中的一個重要項目。它是根據(jù)用于實驗的培養(yǎng)基中是否有微生物生長來判定樣品的無菌性 ， 液體培養(yǎng)基變渾濁一般表明樣品受微生物的污染?；谖⑸镂廴镜牟痪鶆蛐裕篃o菌檢查法結(jié)果的可信度受許多因素制約， 如抑菌因素、檢查法、檢驗量、檢查用的培養(yǎng)基質(zhì)量、操作環(huán)境、無菌技術(shù)等。檢驗方法的驗證是現(xiàn)代質(zhì)量保證體系中關(guān)系到質(zhì)控技術(shù)、方

2、法、手段的科學(xué)性、準確性的重要組成部分 ，是保證檢驗結(jié)果的公正、 科學(xué)、準確的基礎(chǔ)。2. 驗證目的： 驗證所采用的方法和條件是否適合于供試品的無菌檢查。即確認供試品在該檢驗量、該檢驗條件下無抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不計。3. 驗證范圍： 適用于醫(yī)用紗布無菌檢查法的驗證。4. 驗證人員及職責(zé)姓名職務(wù)職責(zé)負責(zé)驗證方案的批準實施、驗證報告的批準驗證方案、驗證報告的起草并負責(zé)驗證過程中現(xiàn)場的監(jiān)控及取樣負責(zé)按制訂無菌檢驗規(guī)程實施檢驗和驗證實驗5. 文件準備和培訓(xùn) 檢查驗證所需的各類文件資料，應(yīng)齊全；相關(guān)的文件草案是否已具備。文件編碼文件名稱存放部門6. 驗證條件6.1. 儀表量器經(jīng)過校

3、驗合格，且在有效期內(nèi)。6.2. 供試品：隨機抽取*醫(yī)藥有司生產(chǎn)的3個批次醫(yī)用無菌醫(yī)用紗布6.3. 培養(yǎng)基及試劑：6.3.1. 試劑試液： 0.9%氯化鈉、氯化鈉蛋白胨緩沖液，配制記錄見附件16.3.2. 培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 批號： 改良馬丁培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 批號：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 批號：改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 批號：蛋白胨 生產(chǎn)廠家： 批號：培養(yǎng)基配制記錄見附件2。6.4. 驗證用菌株：金黃色葡萄球菌   【CMCC（B）26003】銅綠假單胞菌     【CMCC（B）10104】枯草芽孢桿菌    

4、【CMCC（B）63501】生孢梭菌       【CMCC（B）64941】白色念珠菌     【CMCC（F）98001】 黑曲霉         【CMCC（F）98003】標準菌株購自：浙江省食品藥品檢驗研究中心各驗證用菌種傳代記錄見附件3。6.5. 無菌檢驗儀器及相關(guān)設(shè)備：壓力蒸汽滅菌器型 號： 生產(chǎn)廠家： 校驗日期： 有效期：生化培養(yǎng)箱（細菌培養(yǎng)）型 號： 生產(chǎn)廠家： 校驗日期： 有效期：生化培養(yǎng)箱（霉菌培養(yǎng)）型 號： 生產(chǎn)廠家： 校驗日期： 有效期：7. 驗證內(nèi)容：7.1. 培養(yǎng)基無菌性檢查

5、：每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支，培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。培養(yǎng)基無菌性檢查記錄日期：培養(yǎng)基培養(yǎng)天數(shù)支數(shù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基123456 結(jié)論注備： 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.2供試品的制備 醫(yī)用紗布供試品：將包裝好的醫(yī)用紗布打開，用剪刀將醫(yī)用紗布剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。7.3. 試驗菌液的制備7.3.1. 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面中,置3035培養(yǎng)18-24小時，分別取用3-5ml 0.9的無菌氯化鈉溶液，反復(fù)吹洗，沖下菌苔，震蕩80次，用10倍遞增稀釋制成每1m

6、l含菌數(shù)小于100 CFU的菌懸液。 7.3.2. 接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至12ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,3035培養(yǎng)1824小時，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100 CFU的菌懸液。      7.3.3. 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，置2328培養(yǎng)24-48小時，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml 0.9的無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。7.3.4. 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中,置23-28培養(yǎng)5-7天，使大量孢子形成。用

7、3-5ml0.9的無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫并過濾孢子懸液至無菌試管內(nèi)作為原液，取1m原液加9ml 0.9的無菌氯化鈉溶液10倍遞增逐級稀釋制成每1ml含孢子數(shù)小于100CFU的孢子懸液。7.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100 CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌菌懸液各1ml，每種培養(yǎng)基各接種2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100 CFU的白色念珠菌、黑曲霉菌懸液各1ml，每種培養(yǎng)基各接種2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果?？瞻讓φ展軣o

8、菌生長,加菌的培養(yǎng)基管均生長良好,判靈敏度檢查合格。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基： 日期： 培養(yǎng)天數(shù)支數(shù)菌種 123金黃色葡萄球菌12銅綠假單胞菌12枯草芽孢桿菌12生孢梭菌12空白對照結(jié)論 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 改良馬丁培養(yǎng)基：日期 支數(shù)培養(yǎng)天數(shù)菌種12345白色念珠菌12黑曲霉菌12空白對照結(jié)論注備：“+”表示長菌，“”表示不長菌，“±”表示可疑長菌 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.5. 擬驗證的醫(yī)用紗布無菌檢查試驗方法 分別取醫(yī)用紗布供試品，加入相應(yīng)的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，細菌于3035培養(yǎng)14天， 真菌于2328培養(yǎng)14天。同時每天觀察并記錄

9、實驗結(jié)果。日期：培養(yǎng)基培養(yǎng)天數(shù)支數(shù) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基1234567891011121314結(jié)論注備：“+”表示長菌，“”表示不長菌，“±”表示可疑長菌 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.6. 驗證試驗的方法7.6.1. 將醫(yī)用紗布供試品分別人工污染小于100cfu的金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念株菌菌懸液后加入相應(yīng)的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，作為供試品陽性對照組；另分別取裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗菌，作為陽性對照組；同時平行做緩沖液的陰性對照組。7.6.2. 細菌于3035培養(yǎng)5天， 真菌于23

10、28培養(yǎng)5天。每天觀察并記錄實驗結(jié)果。 7.7. 可接受標準 陰性對照呈陰性，陽性對照呈陽性，供試品陽性對照組微生物生長情況與陽性對照組一致，說明醫(yī)用紗布按照無菌檢查法標準操作規(guī)程操作，供試品對微生物生長無不良影響，則醫(yī)用紗布的無菌檢查方法通過。7.8. 試驗記錄日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽性供試品陽性對照生孢梭菌陽性供試品陽性對照枯草桿菌陽性供試品陽性對照銅綠假單胞菌陽性供試品陽性對照陰性對照黑曲霉陽性供試品陽性對照白色念株菌陽性供試品陽性對照陰性對照注備：“+”表示長菌，“”表示不長菌，“±”表示可疑長菌 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽性供試品陽性對照生孢梭菌陽性供試品陽性對照枯草桿菌陽性供試品陽性對照銅綠假單胞菌陽性供試品陽性對照陰性對照黑曲霉陽性供試品陽性對照白色念株菌陽性供試品陽性對照陰性對照注備：“+”表示長菌，“”表示不長菌，“±”表示可疑長菌 檢測人/日期： 復(fù)核人/日期： 日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽性供試品陽性對照生孢梭菌陽性供試品陽性對