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1、第2課微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 【核心知識(shí)核心知識(shí)突破突破】1.1.培養(yǎng)基:培養(yǎng)基:(1)(1)概念:人們按照微生物對(duì)概念:人們按照微生物對(duì)_的不同需求,的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(2)(2)種類(lèi):液體培養(yǎng)基和種類(lèi):液體培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基,二者的區(qū)別是培養(yǎng)基,二者的區(qū)別是是否添加是否添加_。(3)(3)營(yíng)養(yǎng)成分。營(yíng)養(yǎng)成分。主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):_、_、水和無(wú)機(jī)鹽。、水和無(wú)機(jī)鹽。其他條件:其他條件:pHpH、_和氧氣。和氧氣。固體固體凝固劑凝固劑碳源碳源氮源氮源特殊營(yíng)養(yǎng)特殊營(yíng)養(yǎng)2.2.無(wú)菌
2、技術(shù):無(wú)菌技術(shù):(1)(1)目的:獲得目的:獲得_。(2)(2)關(guān)鍵:防止關(guān)鍵:防止_的入侵。的入侵。(3)(3)常用方法:常用方法:_和和_。純凈的培養(yǎng)物純凈的培養(yǎng)物外來(lái)雜菌外來(lái)雜菌滅菌滅菌消毒消毒(4)(4)無(wú)菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象無(wú)菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象( (連一連連一連) ):3.3.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)(1)計(jì)算:依據(jù)配方比例,計(jì)算配制計(jì)算:依據(jù)配方比例,計(jì)算配制100mL100mL的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基時(shí),時(shí),_的用量。的用量。(2)(2)稱量:準(zhǔn)確地稱取稱量:準(zhǔn)確地稱取_。各種成分各種成分各種成分各種成分(5)(5)倒平板:待培養(yǎng)基冷卻
3、至倒平板:待培養(yǎng)基冷卻至_左右時(shí),在左右時(shí),在_倒平板。倒平板。5050酒精燈酒精燈火焰附近火焰附近4.4.純化大腸桿菌:純化大腸桿菌:(1)(1)菌落:由菌落:由_繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的_群體。群體。一個(gè)細(xì)胞一個(gè)細(xì)胞子細(xì)胞子細(xì)胞(2)(2)主要方法及純化原理:主要方法及純化原理:主要方法主要方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法純化原理純化原理通過(guò)接種環(huán)在瓊脂通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面固體培養(yǎng)基的表面_操作,將操作,將聚集的菌種逐步稀聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表釋分散到培養(yǎng)基表面面將菌液進(jìn)行一系列將菌液進(jìn)行一系列的的_,稀,稀釋度足夠高時(shí),聚釋度足夠
4、高時(shí),聚集在一起的微生物集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)將被分散成單個(gè)細(xì)胞胞連續(xù)劃線連續(xù)劃線梯度稀釋梯度稀釋主要方法主要方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法主要步驟主要步驟 _操作操作系列稀釋操作和涂系列稀釋操作和涂布平板操作布平板操作接種工具接種工具接種環(huán)接種環(huán)_平板示平板示意圖意圖 平板劃線平板劃線涂布器涂布器(3)(3)平板劃線操作中灼燒接種環(huán)的目的:平板劃線操作中灼燒接種環(huán)的目的:灼燒時(shí)間灼燒時(shí)間灼燒目的灼燒目的第一次劃線前第一次劃線前殺死接種環(huán)上原有的微生物,防止殺死接種環(huán)上原有的微生物,防止 _污染培養(yǎng)基污染培養(yǎng)基第二次及以后第二次及以后每次劃線前每次劃線前殺死上次
5、劃線后接種環(huán)上殘留的菌殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來(lái)源于種,使下次劃線的菌種直接來(lái)源于_外來(lái)雜菌外來(lái)雜菌上次劃線的末端上次劃線的末端污染環(huán)境污染環(huán)境感染操作者感染操作者(4)(4)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖,請(qǐng)培養(yǎng)的效果圖,請(qǐng)分析:分析:獲得圖獲得圖A A效果和圖效果和圖B B效果的接種方法分別是什么?效果的接種方法分別是什么?提示:提示:獲得圖獲得圖A A效果的接種方法為稀釋涂布平板法,獲效果的接種方法為稀釋涂布平板法,獲得圖得圖B B效果的接種方法為平板劃線法。效果的接種方法為平板劃線法。某
6、同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí),發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí),發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片,最可能的原因是什么?應(yīng)當(dāng)怎樣操作落連成了一片,最可能的原因是什么?應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象?才可避免此種現(xiàn)象?提示:提示:最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌;采取的措施是增大稀一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌;采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行?接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行?提示:提示:火焰附近存在無(wú)菌區(qū)域。火焰附近存在
7、無(wú)菌區(qū)域。5.5.菌種的保藏方法:菌種的保藏方法:主要方法主要方法臨時(shí)保藏法臨時(shí)保藏法甘油管藏法甘油管藏法保藏對(duì)象保藏對(duì)象 頻繁使用的菌種頻繁使用的菌種_的菌種的菌種方法步驟方法步驟先接種到試管的先接種到試管的_培養(yǎng)基培養(yǎng)基上培養(yǎng),然后放入上培養(yǎng),然后放入4 4 的冰箱中的冰箱中轉(zhuǎn)入滅菌后的轉(zhuǎn)入滅菌后的 _中,混勻中,混勻后放在后放在-20 -20 冷冷凍箱中保存凍箱中保存長(zhǎng)期保藏長(zhǎng)期保藏固體斜面固體斜面甘油甘油6.6.【教材易漏知識(shí)教材易漏知識(shí)】選修選修1 1P18“P18“旁欄小資料旁欄小資料”:微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎
8、?微生物接種的核心是什么?嗎?微生物接種的核心是什么?提示:提示:不是。微生物的接種方法還包括斜面接種、穿不是。微生物的接種方法還包括斜面接種、穿刺接種等,其核心是防止雜菌污染,保證培養(yǎng)物的純刺接種等,其核心是防止雜菌污染,保證培養(yǎng)物的純度。度?!疚Ⅻc(diǎn)警示微點(diǎn)警示】微生物培養(yǎng)的微生物培養(yǎng)的“三點(diǎn)提醒三點(diǎn)提醒”(1)(1)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的確定方法。培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的確定方法。自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)物,碳源自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)物,碳源可來(lái)自大氣中的可來(lái)自大氣中的COCO2 2,氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。,氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物,
9、即碳異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物,即碳源必須由含碳有機(jī)物提供,氮源也主要由有機(jī)物提供,源必須由含碳有機(jī)物提供,氮源也主要由有機(jī)物提供,部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。(2)(2)選擇無(wú)菌技術(shù)的原則。選擇無(wú)菌技術(shù)的原則。考慮無(wú)菌技術(shù)的效果:滅菌的效果比消毒要好??紤]無(wú)菌技術(shù)的效果:滅菌的效果比消毒要好??紤]操作對(duì)象的承受能力:活體生物材料、操作者考慮操作對(duì)象的承受能力:活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒,而不能滅菌。的手等只能采用消毒,而不能滅菌。(3)(3)純化大腸桿菌的兩種方法的異同。純化大腸桿菌的兩種方法的異同。相同點(diǎn):平板劃線法和稀釋
10、涂布平板法都能獲得單相同點(diǎn):平板劃線法和稀釋涂布平板法都能獲得單細(xì)胞菌落。細(xì)胞菌落。不同點(diǎn):平板劃線法不能對(duì)微生物計(jì)數(shù),而稀釋涂不同點(diǎn):平板劃線法不能對(duì)微生物計(jì)數(shù),而稀釋涂布平板法能對(duì)微生物計(jì)數(shù)。布平板法能對(duì)微生物計(jì)數(shù)。【秒判正誤秒判正誤】1.1.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后,開(kāi)啟鍋蓋。到零后,開(kāi)啟鍋蓋。( )( )分析:分析:高壓滅菌加熱結(jié)束后,讓其自然冷卻,當(dāng)壓力高壓滅菌加熱結(jié)束后,讓其自然冷卻,當(dāng)壓力表的壓力降到零時(shí)打開(kāi)排氣閥。表的壓力降到零時(shí)打開(kāi)排氣閥。2.2.在配制培養(yǎng)基時(shí),一般微生物除滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,在配制培養(yǎng)基時(shí),
11、一般微生物除滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還應(yīng)該考慮還應(yīng)該考慮pHpH、氧氣及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。、氧氣及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。 ( )( )分析:分析:一般微生物需要一定的營(yíng)養(yǎng)、氧氣、一般微生物需要一定的營(yíng)養(yǎng)、氧氣、pHpH及特殊及特殊物質(zhì)物質(zhì)( (如添加維生素如添加維生素) ),但培養(yǎng)厭氧微生物時(shí),培養(yǎng)基,但培養(yǎng)厭氧微生物時(shí),培養(yǎng)基不能與氧氣接觸。不能與氧氣接觸。3.3.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。濺到皿蓋上。( )( )分析:分析:倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于
12、瓶口的縫隙,倒入培養(yǎng)基后將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋。立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋。4.4.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。取菌落。( )( )分析:分析:灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后才能挑取菌落,以灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后才能挑取菌落,以免溫度太高殺死菌種。免溫度太高殺死菌種。5.5.從有機(jī)廢水中分離分解有機(jī)物的微生物時(shí),接種后從有機(jī)廢水中分離分解有機(jī)物的微生物時(shí),接種后的培養(yǎng)皿要放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。的培養(yǎng)皿要放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。( )( )分析:分析:接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培接種后的培養(yǎng)
13、皿應(yīng)放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),光照會(huì)影響溫度等條件。養(yǎng),光照會(huì)影響溫度等條件。6.6.篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物時(shí),宜用乳糖作為培養(yǎng)基中篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物時(shí),宜用乳糖作為培養(yǎng)基中的唯一碳源。的唯一碳源。( )( )分析:分析:在以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上,只有能產(chǎn)生在以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上,只有能產(chǎn)生乳糖酶而利用乳糖的微生物才能生存。乳糖酶而利用乳糖的微生物才能生存?!久}案例命題案例研析研析】【典例典例】(2018(2018全國(guó)卷全國(guó)卷)將馬鈴薯去皮切塊,加水將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過(guò)濾得到馬鈴薯浸出液,在馬鈴薯浸煮沸一定時(shí)間,過(guò)濾得到馬鈴薯浸出液,在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖
14、和瓊脂,用水定容后滅菌,得出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到到M M培養(yǎng)基。培養(yǎng)基?;卮鹣铝袉?wèn)題:回答下列問(wèn)題:(1)M(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制霉素以抑制_的生長(zhǎng),加入了鏈霉素的培養(yǎng)基的生長(zhǎng),加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。(2)M(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有_(_(答出兩點(diǎn)即可答出兩點(diǎn)即可) ),氮源進(jìn)入細(xì)胞,氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與合成的生物大分子有后,
15、可參與合成的生物大分子有_(_(答出兩點(diǎn)即可答出兩點(diǎn)即可) )。(3)(3)若在若在M M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng)。平板上長(zhǎng)出菌落后可通過(guò)加入顯色劑篩選出能培養(yǎng)。平板上長(zhǎng)出菌落后可通過(guò)加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是_。該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_。(4)(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:甲
16、同學(xué)涂布了甲同學(xué)涂布了3 3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110110、140140和和149149,取平均值,取平均值133133。乙同學(xué)涂布了乙同學(xué)涂布了3 3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2727、169169和和176176,取平均值,取平均值124124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是低,其原因是_?!緦彺鸺记蓪彺鸺记伞?1)(1)審題關(guān)鍵:審題關(guān)鍵:理解形成理解形成“透明圈透明圈”的原因:淀粉遇碘變藍(lán),在培的原因:淀粉遇碘變藍(lán),在培養(yǎng)基中加入碘液后呈現(xiàn)藍(lán)色,能產(chǎn)生淀
17、粉酶的微生物養(yǎng)基中加入碘液后呈現(xiàn)藍(lán)色,能產(chǎn)生淀粉酶的微生物可將淀粉分解成麥芽糖后藍(lán)色消失,菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)可將淀粉分解成麥芽糖后藍(lán)色消失,菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈。透明圈。題干中關(guān)鍵信息不要忽略:乙同學(xué)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分題干中關(guān)鍵信息不要忽略:乙同學(xué)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是別是“2727、169169和和176”176”,“27”27”不在不在“3030300”300”中,中,且與且與“169169和和176”176”重復(fù)組差距太大,意味著很可能操重復(fù)組差距太大,意味著很可能操作有誤,需要重新實(shí)驗(yàn)。作有誤,需要重新實(shí)驗(yàn)。(2)(2)滿分答題:滿分答題:分析原因要體現(xiàn)出因果關(guān)系:設(shè)問(wèn)分析原因要體現(xiàn)出因果關(guān)系:設(shè)
18、問(wèn)(3)(3)第二空時(shí)在回第二空時(shí)在回答原因答原因( (原理原理) )時(shí),若直接答時(shí),若直接答“淀粉遇碘變藍(lán)淀粉遇碘變藍(lán)”或或“菌菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈”均不能得滿分,分析原因時(shí)一均不能得滿分,分析原因時(shí)一定要分析透徹,體現(xiàn)出因果關(guān)系才能得滿分。定要分析透徹,體現(xiàn)出因果關(guān)系才能得滿分。設(shè)問(wèn)設(shè)問(wèn)(2)(2)在回答問(wèn)題時(shí),題目要求在回答問(wèn)題時(shí),題目要求“答出兩點(diǎn)即可答出兩點(diǎn)即可”,設(shè)問(wèn)設(shè)問(wèn)(2)(2)第一空若只答第一空若只答“碳源碳源”或或“無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽”一點(diǎn)不能一點(diǎn)不能得滿分,設(shè)問(wèn)得滿分,設(shè)問(wèn)(2)(2)第二空若只答第二空若只答“蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)”或或“核酸核酸”一點(diǎn)不能得滿分,若只
19、答一點(diǎn)不能得滿分,若只答“DNA”DNA”和和“RNA”RNA”也不能得也不能得滿分,回答問(wèn)題時(shí)一定要根據(jù)題目要求完整答題。滿分,回答問(wèn)題時(shí)一定要根據(jù)題目要求完整答題?!窘馕鼋馕觥?1)(1)鏈霉素屬于抗生素,作用是抑制細(xì)菌的生鏈霉素屬于抗生素,作用是抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。可以通過(guò)加入鏈霉素篩選出抗鏈霉素的細(xì)菌,屬長(zhǎng)。可以通過(guò)加入鏈霉素篩選出抗鏈霉素的細(xì)菌,屬于選擇培養(yǎng)基。于選擇培養(yǎng)基。(2)M(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有碳源、無(wú)機(jī)種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有碳源、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等,
20、氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與鹽、有機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等,氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與合成的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等。合成的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等。(3)(3)淀粉遇碘變藍(lán),所以應(yīng)加入的顯色劑是碘液。該方淀粉遇碘變藍(lán),所以應(yīng)加入的顯色劑是碘液。該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是淀粉遇碘液顯藍(lán)法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是淀粉遇碘液顯藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰猓纬赏该魅?。色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰?,形成透明圈?4)(4)正確稀釋涂布平板,平板上的菌落數(shù)應(yīng)為正確稀釋涂布平板,平板上的菌落數(shù)應(yīng)為3030300300。而乙同學(xué)的結(jié)果中,而乙同學(xué)的結(jié)果中,1 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另個(gè)平板的計(jì)數(shù)
21、結(jié)果與另2 2個(gè)相差個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差。懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差。答案:答案:(1)(1)細(xì)菌選擇細(xì)菌選擇(2)(2)碳源、無(wú)機(jī)鹽蛋白質(zhì)、碳源、無(wú)機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸核酸(3)(3)碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)淼庖旱矸塾龅庖猴@藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰?,形成透明圈粉被水解,形成透明?4)(4)乙同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果中,1 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2 2個(gè)相差個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差【高考長(zhǎng)句應(yīng)答特訓(xùn)高考長(zhǎng)句應(yīng)答特訓(xùn)】(1)(1)利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是什利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是什么?么?提
22、示:提示:恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布了保證結(jié)果準(zhǔn)確,通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上,培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在在平板上,培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在3030300300的平板進(jìn)行的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)。(2)(2)從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的活菌數(shù)的計(jì)從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的活菌數(shù)的計(jì)算方法是什么?算方法是什么?提示:提示:( (平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)涂布的稀釋液體積涂布的稀釋液體積) )稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)?!痉椒ㄒ?guī)律方法規(guī)律】選擇培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)方法選擇培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)方法(1)(1)營(yíng)養(yǎng)缺陷型
23、選擇培養(yǎng)基:通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成營(yíng)養(yǎng)缺陷型選擇培養(yǎng)基:通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,使?fàn)I養(yǎng)缺陷型微生物不能正常生長(zhǎng)。分,使?fàn)I養(yǎng)缺陷型微生物不能正常生長(zhǎng)。(2)(2)添加抑菌物質(zhì)的選擇培養(yǎng)基:在完全培養(yǎng)基中加入添加抑菌物質(zhì)的選擇培養(yǎng)基:在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì),利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)非目的微生物某些化學(xué)物質(zhì),利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)非目的微生物產(chǎn)生的抑制作用選擇目的菌。產(chǎn)生的抑制作用選擇目的菌。(3)(3)特殊培養(yǎng)條件的選擇培養(yǎng)基:改變微生物的培養(yǎng)條特殊培養(yǎng)條件的選擇培養(yǎng)基:改變微生物的培養(yǎng)條件件( (如高溫、特殊如高溫、特殊pHpH等等) )?!究键c(diǎn)題組考點(diǎn)題組診斷診斷】角度一微生物的培養(yǎng)角度一
24、微生物的培養(yǎng)1.(20161.(2016全國(guó)卷全國(guó)卷)空氣中的微生物在重力等作用下,空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下:物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下:配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基( (成分:牛肉膏、蛋白胨、成分:牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、X X、H H2 2O)O);制作無(wú)菌平板;制作無(wú)菌平板;設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;將各組平板置于將
25、各組平板置于37 37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。各組平板上菌落的平均數(shù)。回答下列問(wèn)題:回答下列問(wèn)題:(1)(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_。若。若要完成步驟,該培養(yǎng)基中的成分要完成步驟,該培養(yǎng)基中的成分X X通常是通常是_。(2)(2)步驟中,實(shí)驗(yàn)組的操作是步驟中,實(shí)驗(yàn)組的操作是_。(3)(3)若在某次調(diào)查中,某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為若在某次調(diào)查中,某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為3636個(gè)個(gè)/ /平板,而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了平板,而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6 6個(gè)菌個(gè)菌落,這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)
26、查中出現(xiàn)了落,這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象?,F(xiàn)象。若將若將30(30(即即36-6)36-6)個(gè)個(gè)/ /平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法做法_(_(填填“正確正確”或或“不正確不正確”) )?!窘忸}指南解題指南】解答本題需要注意兩點(diǎn):解答本題需要注意兩點(diǎn):(1)(1)明確培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的來(lái)源。明確培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的來(lái)源。(2)(2)理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)驗(yàn)操作的對(duì)應(yīng)關(guān)系。理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)驗(yàn)操作的對(duì)應(yīng)關(guān)系。【解析解析】本題主要考查微生物培養(yǎng)。本題主要考查微生物培養(yǎng)。(1)(1)微生物的生長(zhǎng)需要碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),培養(yǎng)基微生物的生長(zhǎng)需要碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),培
27、養(yǎng)基中的牛肉膏、蛋白胨為微生物的生長(zhǎng)既提供了碳源,中的牛肉膏、蛋白胨為微生物的生長(zhǎng)既提供了碳源,也提供了氮源。微生物培養(yǎng)通常采用的培養(yǎng)基是固體也提供了氮源。微生物培養(yǎng)通常采用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,故題中培養(yǎng)基,故題中X X應(yīng)是瓊脂,在培養(yǎng)基中起凝固劑的作應(yīng)是瓊脂,在培養(yǎng)基中起凝固劑的作用。用。(2)(2)本實(shí)驗(yàn)的目的是了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物本實(shí)驗(yàn)的目的是了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況,應(yīng)選擇在不同的高度放置平板,使之暴的分布情況,應(yīng)選擇在不同的高度放置平板,使之暴露在空氣中一段時(shí)間,以利于空氣中微生物的沉降。露在空氣中一段時(shí)間,以利于空氣中微生物的沉降。(3)(3)空白對(duì)照實(shí)
28、驗(yàn)組不應(yīng)出現(xiàn)菌落。出現(xiàn)了菌落說(shuō)明在空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)組不應(yīng)出現(xiàn)菌落。出現(xiàn)了菌落說(shuō)明在此次實(shí)驗(yàn)中平板被污染。用實(shí)驗(yàn)組獲取的菌落數(shù)的平此次實(shí)驗(yàn)中平板被污染。用實(shí)驗(yàn)組獲取的菌落數(shù)的平均值減去污染產(chǎn)生的菌落數(shù)作為實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,這種做均值減去污染產(chǎn)生的菌落數(shù)作為實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,這種做法不正確,應(yīng)在防止污染的情況下重新實(shí)驗(yàn),以獲得法不正確,應(yīng)在防止污染的情況下重新實(shí)驗(yàn),以獲得較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。答案:答案:(1)(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上,將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上,開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間(3)(3)污染不正確
29、污染不正確【方法技巧方法技巧】判斷培養(yǎng)基制作與接種操作是否合格的判斷培養(yǎng)基制作與接種操作是否合格的方法方法(1)(1)從培養(yǎng)基制作是否合格上判斷:如果未接種的培養(yǎng)從培養(yǎng)基制作是否合格上判斷:如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培養(yǎng)基后無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。的制備是成功的,否則需要重新制備。(2)(2)從接種操作是否符合無(wú)菌要求上判斷:從接種操作是否符合無(wú)菌要求上判斷:如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致,并符合接種菌菌落的特點(diǎn),說(shuō)明接種操作是符一致,并符合接
30、種菌菌落的特點(diǎn),說(shuō)明接種操作是符合要求的。合要求的。如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落,則說(shuō)明接種過(guò)程中,如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落,則說(shuō)明接種過(guò)程中,無(wú)菌操作未達(dá)到要求,需要分析原因,重新操作。無(wú)菌操作未達(dá)到要求,需要分析原因,重新操作。2.(20172.(2017江蘇高考江蘇高考) )苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:世紀(jì)金榜導(dǎo)學(xué)號(hào)世紀(jì)金榜導(dǎo)學(xué)
31、號(hào)(1)(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K K2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4、苯酚和水,其中可作為碳源的有苯酚和水,其中可作為碳源的有_。(2)(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加而逐漸_,以達(dá)到富集酚降解菌的目,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集,應(yīng)進(jìn)一步的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集,應(yīng)進(jìn)一步_,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加_。(3)(3)
32、下圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中下圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中_(_(填圖填圖中序號(hào)中序號(hào)) )區(qū)域更易獲得單菌落。區(qū)域更易獲得單菌落。(4)(4)采用比色測(cè)定法采用比色測(cè)定法( (使用苯酚顯色劑使用苯酚顯色劑) )檢測(cè)降解后的廢檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng),下表中應(yīng),下表中1 15 5 號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_(kāi)。管號(hào)管號(hào)1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6苯酚濃度苯酚濃度(mg/L)(mg/L)1 1如果廢水為如果廢水為50 mg/L50 mg/L苯酚溶液,降解后約有苯酚溶液
33、,降解后約有21%21%的苯酚的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋殘留,則需將殘留液稀釋_(_(填序號(hào):填序號(hào):55101020)20)倍后,再進(jìn)行比色。倍后,再進(jìn)行比色?!窘馕鼋馕觥?1)(1)蛋白胨和苯酚都是含碳有機(jī)物,可以為酚蛋白胨和苯酚都是含碳有機(jī)物,可以為酚降解菌提供碳源。降解菌提供碳源。(2)(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),隨轉(zhuǎn)將采集到的樣品接種培養(yǎng),隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加苯酚用量可以增大酚降解菌的接次數(shù)增加而逐漸增加苯酚用量可以增大酚降解菌的比例,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。如果圖中平板中比例,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。如果圖中平板中菌落過(guò)于密集,說(shuō)明培養(yǎng)液中酚降解菌數(shù)量過(guò)多,需菌落過(guò)于密
34、集,說(shuō)明培養(yǎng)液中酚降解菌數(shù)量過(guò)多,需要進(jìn)一步稀釋后再涂布,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。平要進(jìn)一步稀釋后再涂布,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,在配制的時(shí)候除了需要水、板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,在配制的時(shí)候除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加瓊脂等凝固劑。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加瓊脂等凝固劑。(3)(3)因?yàn)槊看我驗(yàn)槊看蝿澗€的菌種都來(lái)自上一次劃線的末端,所以最后一次劃線的菌種都來(lái)自上一次劃線的末端,所以最后一次劃線結(jié)束的時(shí)候更容易獲得單菌落。劃線結(jié)束的時(shí)候更容易獲得單菌落。(4)(4)根據(jù)表中根據(jù)表中6 6號(hào)號(hào)管中苯酚濃度為管中苯酚濃度為1 mg/L1 mg/L,可推知,可推知1 15 5號(hào)管中
35、苯酚濃度號(hào)管中苯酚濃度應(yīng)分別為應(yīng)分別為0 mg/L0 mg/L、0.2 mg/L0.2 mg/L、0.4 mg/L0.4 mg/L、0.6 mg/L0.6 mg/L、0.8 mg/L0.8 mg/L。根據(jù)題意,廢水為。根據(jù)題意,廢水為50 mg/L50 mg/L苯酚溶液,降解苯酚溶液,降解后約有后約有21%21%的苯酚殘留,要使稀釋后苯酚殘留液濃度在的苯酚殘留,要使稀釋后苯酚殘留液濃度在0 01 mg/L1 mg/L,需將殘留液稀釋?zhuān)鑼埩粢合♂?020倍。倍。答案:答案:(1)(1)蛋白胨、苯酚蛋白胨、苯酚(2)(2)增加稀釋涂布凝固增加稀釋涂布凝固劑劑(3)(3)(4)0(4)0、0.2
36、0.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8角度二無(wú)菌技術(shù)角度二無(wú)菌技術(shù) 3.(20183.(2018全國(guó)卷全國(guó)卷)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染?;卮鹣铝袉?wèn)題:回答下列問(wèn)題:(1)(1)在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)(_(填填“可以可以”或或“不可以不可以”) )放入干熱滅菌箱放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。中進(jìn)行干熱滅菌。(2)(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)
37、是與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是_。(3)(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能是紫外線能_。在照射前,適量噴灑。在照射前,適量噴灑_,可強(qiáng)化消毒效果。,可強(qiáng)化消毒效果。(4)(4)水廠供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)水廠供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)_(_(填填“氯氣氯氣”“”“乙醇乙醇”或或“高錳酸鉀高錳酸鉀”) )消毒的。消毒的。(5)(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是_。【解析解析】
38、(1)(1)玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具可以通過(guò)干熱玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具可以通過(guò)干熱滅菌的方法來(lái)滅菌。滅菌的方法來(lái)滅菌。(2)(2)巴氏消毒法是在巴氏消毒法是在707075 75 煮煮30 min30 min或在或在80 80 下煮下煮15 min15 min,可以殺死牛奶中的微生物,并使牛奶的營(yíng)養(yǎng),可以殺死牛奶中的微生物,并使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞;高溫瞬時(shí)消毒是在較短的時(shí)間內(nèi)利用成分不被破壞;高溫瞬時(shí)消毒是在較短的時(shí)間內(nèi)利用高溫殺死微生物,由于時(shí)間較短,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少。高溫殺死微生物,由于時(shí)間較短,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)(3)紫外線有消毒、滅菌的作用,在照射前,適量噴灑紫外線有消毒、滅
39、菌的作用,在照射前,適量噴灑消毒液,可以強(qiáng)化消毒效果。消毒液,可以強(qiáng)化消毒效果。(4)(4)自來(lái)水消毒通常采用自來(lái)水消毒通常采用“氯氣氯氣”或或“紫外線紫外線”等方法。等方法。(5)(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,但使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,但沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是鍋內(nèi)冷空氣沒(méi)有沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是鍋內(nèi)冷空氣沒(méi)有排盡。排盡。答案:答案:(1)(1)可以可以(2)(2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少在達(dá)到消毒目的的同時(shí),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少(3)(3)破壞破壞DNADNA結(jié)構(gòu)消毒液結(jié)構(gòu)消毒液(4)(4)氯氣氯氣(5)(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排
40、盡未將鍋內(nèi)冷空氣排盡4.(20184.(2018江蘇高考江蘇高考) )酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半,可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用的一半,可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng),這樣既可減少污染又工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng),這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)酵母,并進(jìn)行大量培養(yǎng)。如圖所示為操作流程,請(qǐng)回酵母,并進(jìn)行大量培養(yǎng)。如圖所示為操作流程,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:答下列問(wèn)題:(1)(1)配制培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分,配制培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配
41、方準(zhǔn)確稱量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_,及時(shí)對(duì)培,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行_滅菌。滅菌。(2)(2)取步驟中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培取步驟中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,在步驟中將溫度約養(yǎng)皿中,在步驟中將溫度約_(_(在在25 25 、50 50 或或80 80 中選擇中選擇) )的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻,冷凝的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻,冷凝后倒置培養(yǎng)。后倒置培養(yǎng)。(3)(3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落,按步驟所示進(jìn)行挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落,按步驟所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有劃線。下列敘述合理的有_。a.a
42、.為保證無(wú)菌操作,接種針、接種環(huán)使用前都必須滅為保證無(wú)菌操作,接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌菌b.b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面,以免不能形成正常劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面,以免不能形成正常菌落菌落c.c.挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落,分別測(cè)定酵母細(xì)胞挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落,分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量中甲醇的含量d.d.可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度,獲得甲醇可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度,獲得甲醇高耐受株高耐受株(4)(4)步驟中,為使酵母數(shù)量迅速增加,培養(yǎng)過(guò)程中需步驟中,為使酵母數(shù)量迅速增加,培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和保證充足的營(yíng)養(yǎng)和_供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母
43、的活細(xì)胞密度,將發(fā)酵液稀釋密度,將發(fā)酵液稀釋1 0001 000倍后,經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液倍后,經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色,用染色,用25251616型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5 5個(gè)中格中的細(xì)胞個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù),理論上數(shù),理論上_色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于_,才能達(dá)到每毫升才能達(dá)到每毫升3 310109 9個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。【解析解析】(1)(1)不同種微生物生長(zhǎng)所需的最適不同種微生物生長(zhǎng)所需的最適pHpH不同,所不同,所以,配制培養(yǎng)基時(shí),溶化后需調(diào)以,配制培養(yǎng)基時(shí),溶化后需調(diào)pHpH。分裝到試管中的。分裝到試管中的培養(yǎng)基需進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。培養(yǎng)基需進(jìn)
44、行高壓蒸汽滅菌。(2)(2)倒平板時(shí),錐形瓶中的培養(yǎng)基溫度控制在倒平板時(shí),錐形瓶中的培養(yǎng)基溫度控制在50 50 左左右較適宜,溫度太低會(huì)凝固,太高會(huì)燙手。右較適宜,溫度太低會(huì)凝固,太高會(huì)燙手。(3)(3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落用于平板劃線時(shí)需注挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落用于平板劃線時(shí)需注意題干中意題干中a a、b b、d d所敘述的要點(diǎn),為了獲得專(zhuān)一酵母,所敘述的要點(diǎn),為了獲得專(zhuān)一酵母,只挑取效果最好的菌落就行,不需挑取多個(gè)菌落。只挑取效果最好的菌落就行,不需挑取多個(gè)菌落。(4)(4)酵母在有氧條件下繁殖快,所以除了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,酵母在有氧條件下繁殖快,所以除了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還需提供充足的氧氣
45、。對(duì)于死酵母通常用臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行還需提供充足的氧氣。對(duì)于死酵母通常用臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行染色,活酵母不會(huì)被染色。設(shè)染色,活酵母不會(huì)被染色。設(shè)5 5個(gè)中格中應(yīng)有個(gè)中格中應(yīng)有m m個(gè),據(jù)個(gè),據(jù)題意可得到等式:題意可得到等式:m m5 510104 410103 3=3=310109 9,m m=60=60個(gè)。個(gè)。但由于用等體積的臺(tái)盼藍(lán)染液進(jìn)行了染色,也被染液但由于用等體積的臺(tái)盼藍(lán)染液進(jìn)行了染色,也被染液稀釋了一倍,所以無(wú)色酵母數(shù)應(yīng)不低于稀釋了一倍,所以無(wú)色酵母數(shù)應(yīng)不低于3030個(gè)。個(gè)。答案:答案:(1)pH(1)pH高壓蒸汽高壓蒸汽( (濕熱濕熱) )(2)50 (2)50 (3)a(3)a、b b、d d(4
46、)(4)氧氣無(wú)氧氣無(wú)3030【加固訓(xùn)練加固訓(xùn)練】1.(20181.(2018石家莊模擬石家莊模擬) )牛奶是微生物培養(yǎng)的良好培養(yǎng)牛奶是微生物培養(yǎng)的良好培養(yǎng)基,牛奶在飲前都要經(jīng)過(guò)巴氏消毒,以殺死有害微生基,牛奶在飲前都要經(jīng)過(guò)巴氏消毒,以殺死有害微生物,為檢測(cè)消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況,做如物,為檢測(cè)消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況,做如圖所示操作。用無(wú)菌吸管從錐形瓶中吸取圖所示操作。用無(wú)菌吸管從錐形瓶中吸取1 mL1 mL生牛奶生牛奶稀釋液至盛有稀釋液至盛有9 mL9 mL無(wú)菌水的試管中,混合均勻,如此無(wú)菌水的試管中,混合均勻,如此再重復(fù)再重復(fù)2 2次。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:次。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)
47、題:(1)(1)巴氏消毒的方法是巴氏消毒的方法是_,使用這種方法對(duì),使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是_。(2)(2)取最終的牛奶稀釋液取最終的牛奶稀釋液0.1 mL0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,應(yīng)選擇的涂布工具是應(yīng)選擇的涂布工具是_。(3)(3)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在操作步驟方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在操作步驟上應(yīng)做什么改動(dòng)?上應(yīng)做什么改動(dòng)?_。(4)(4)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌,從從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落
48、中混有各種雜菌,從中檢測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入中檢測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入_,菌落具有菌落具有_特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌?!窘馕鼋馕觥?1)(1)采用巴氏消毒法加工牛奶,在采用巴氏消毒法加工牛奶,在707075 75 煮煮30 min 30 min 或或80 80 煮煮15 min15 min進(jìn)行殺菌,此種方法在殺進(jìn)行殺菌,此種方法在殺滅牛奶中有害微生物的同時(shí)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞,滅牛奶中有害微生物的同時(shí)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞,完好地保存了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和純正口感。完好地保存了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和純正口感。(2)(2)取最終的牛奶稀釋液取最終的牛奶稀釋液0.1
49、mL0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,應(yīng)選擇涂布器。應(yīng)選擇涂布器。(3)(3)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用稀消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用稀釋涂布平板法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在釋涂布平板法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在操作步驟上應(yīng)減少稀釋次數(shù)。操作步驟上應(yīng)減少稀釋次數(shù)。(4)(4)欲檢測(cè)大腸桿菌,可在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán),大欲檢測(cè)大腸桿菌,可在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán),大腸桿菌菌落會(huì)呈黑色,略帶金屬光澤。腸桿菌菌落會(huì)呈黑色,略帶金屬光澤。答案:答案:(1)(1)在在707075 75 煮煮30 min(30 min(在在80 80 煮煮
50、15 min)15 min)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞(2)(2)涂布器涂布器(3)(3)減少稀釋次數(shù)減少稀釋次數(shù)(4)(4)伊紅美藍(lán)伊紅美藍(lán)( (金屬光澤的紫金屬光澤的紫) )黑色黑色2.(20182.(2018揭陽(yáng)模擬揭陽(yáng)模擬) )炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列,菌落呈卷發(fā)狀。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列,菌落呈卷發(fā)狀。對(duì)炭疽病疑似患者,可根據(jù)噬菌體的寄主專(zhuān)一性,通對(duì)炭疽病疑似患者,可根據(jù)噬菌體的寄主專(zhuān)一性,通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診。過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診。細(xì)菌培養(yǎng):采集疑似患者的樣本,分離培養(yǎng),獲得細(xì)菌培養(yǎng):采集疑似患者的樣本,
51、分離培養(yǎng),獲得可疑菌落??梢删?。細(xì)菌鑒定:實(shí)驗(yàn)流程圖如圖所示。細(xì)菌鑒定:實(shí)驗(yàn)流程圖如圖所示。(1)(1)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí),滅菌與調(diào)節(jié)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí),滅菌與調(diào)節(jié)pHpH的先后順序是的先后順序是_。(2)(2)挑選可疑菌落制片后,用挑選可疑菌落制片后,用_觀察,可看到呈觀察,可看到呈竹節(jié)狀排列的炭疽桿菌。竹節(jié)狀排列的炭疽桿菌。(3)(3)接種可疑菌后,接種可疑菌后,3535培養(yǎng)培養(yǎng)2424小時(shí),液體培養(yǎng)基變渾小時(shí),液體培養(yǎng)基變渾濁,原因是濁,原因是_。圖中的對(duì)照組試管中應(yīng)加入。圖中的對(duì)照組試管中應(yīng)加入_。兩組試管同時(shí)培養(yǎng)。兩組試管同時(shí)培養(yǎng)6 6小時(shí)后,進(jìn)行比較,小時(shí)后,進(jìn)行比較,若實(shí)驗(yàn)組液
52、體培養(yǎng)基的渾濁度若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度_(_(填填“提提高高”“”“降低降低”或或“不變不變”) ),則可明確炭疽病疑似患者,則可明確炭疽病疑似患者被炭疽桿菌感染。此實(shí)驗(yàn)依據(jù)的原理是被炭疽桿菌感染。此實(shí)驗(yàn)依據(jù)的原理是_?!窘馕鼋馕觥?1)(1)在配制培養(yǎng)基時(shí),需要先調(diào)節(jié)在配制培養(yǎng)基時(shí),需要先調(diào)節(jié)pHpH,后滅菌。,后滅菌。(2)(2)菌落可以通過(guò)肉眼觀察,而單個(gè)細(xì)菌無(wú)法通過(guò)肉眼菌落可以通過(guò)肉眼觀察,而單個(gè)細(xì)菌無(wú)法通過(guò)肉眼觀察,需要借助顯微鏡觀察。觀察,需要借助顯微鏡觀察。(3)(3)接種可疑菌后,接種可疑菌后,35 35 培養(yǎng)培養(yǎng)2424小時(shí),液體培養(yǎng)基變小時(shí),液體培養(yǎng)基變渾濁,原因是細(xì)菌
53、大量繁殖;對(duì)照組試管中應(yīng)加入等渾濁,原因是細(xì)菌大量繁殖;對(duì)照組試管中應(yīng)加入等量的生理鹽水,與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)量的生理鹽水,與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6 6小時(shí)后,若實(shí)驗(yàn)組小時(shí)后,若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組低,則可明確炭疽病疑液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組低,則可明確炭疽病疑似患者被炭疽桿菌感染。噬菌體的宿主具有專(zhuān)一性,似患者被炭疽桿菌感染。噬菌體的宿主具有專(zhuān)一性,實(shí)驗(yàn)組加入的噬菌體會(huì)侵染炭疽桿菌,使炭疽桿菌裂實(shí)驗(yàn)組加入的噬菌體會(huì)侵染炭疽桿菌,使炭疽桿菌裂解,細(xì)菌數(shù)量減少,溶液渾濁度降低。解,細(xì)菌數(shù)量減少,溶液渾濁度降低。答案:答案:(1)(1)先調(diào)節(jié)先調(diào)節(jié)pHpH,后滅菌,后滅菌(2)(2)顯微鏡顯微
54、鏡(3)(3)細(xì)菌大量繁殖等量生理鹽水降低細(xì)菌大量繁殖等量生理鹽水降低實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌,使其死實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌,使其死亡,溶液變澄清亡,溶液變澄清考點(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)考點(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 【核心知識(shí)核心知識(shí)突破突破】1.1.篩選菌株:篩選菌株:(1)(1)尋找目的菌株的方法:根據(jù)它對(duì)尋找目的菌株的方法:根據(jù)它對(duì)_的要求,的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。生存環(huán)境生存環(huán)境(2)(2)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選。實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選。方法:方法:_有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件,同時(shí)有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件,同時(shí)
55、抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。實(shí)例:篩選尿素分解菌時(shí)使用以實(shí)例:篩選尿素分解菌時(shí)使用以_為唯一氮源的為唯一氮源的_培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。人為提供人為提供尿素尿素選擇選擇(3)(3)選擇培養(yǎng)基:在微生物學(xué)中,將允許選擇培養(yǎng)基:在微生物學(xué)中,將允許_的的微生物生長(zhǎng),同時(shí)微生物生長(zhǎng),同時(shí)_其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。特定種類(lèi)特定種類(lèi)抑制或阻止抑制或阻止2.2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目:統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目:比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法( (稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法) )直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)法( (顯微計(jì)數(shù)法顯微計(jì)數(shù)法) )樣品的稀釋度足夠高時(shí),培樣品
56、的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的來(lái)源于樣品稀釋液中的_活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌中大約含有多少活菌 利用特定利用特定_或或_,在,在顯微鏡下計(jì)算一顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中定容積的樣品中微生物的數(shù)量微生物的數(shù)量一一個(gè)個(gè)細(xì)菌細(xì)菌計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)板血細(xì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板胞計(jì)數(shù)板比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法( (稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法) )直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)法( (顯微計(jì)數(shù)法顯微計(jì)數(shù)法) )公式公式每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù)= _= _C C:某稀釋度
57、下平板上生長(zhǎng):某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù);的平均菌落數(shù);V V:涂布平:涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)(mL);M M:稀釋倍數(shù):稀釋倍數(shù)每毫升原液所含每毫升原液所含細(xì)菌數(shù):每小格細(xì)菌數(shù):每小格平均細(xì)菌數(shù)平均細(xì)菌數(shù)40040010 00010 000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)( (C CV)V)M M比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法( (稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法) )直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)法( (顯微計(jì)數(shù)法顯微計(jì)數(shù)法) )缺點(diǎn)缺點(diǎn)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落個(gè)菌落不能區(qū)分細(xì)胞死不能區(qū)分細(xì)胞死活
58、活誤差誤差比實(shí)際值偏比實(shí)際值偏_比實(shí)際值偏比實(shí)際值偏_小小大大3.3.設(shè)置對(duì)照和重復(fù):設(shè)置對(duì)照和重復(fù):比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目對(duì)照對(duì)照重復(fù)重復(fù)目的目的排除排除_對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響結(jié)果的影響排除排除_對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響響非測(cè)試因素非測(cè)試因素偶然因素偶然因素比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目對(duì)照對(duì)照重復(fù)重復(fù)方法方法空白對(duì)照:確定培養(yǎng)基制空白對(duì)照:確定培養(yǎng)基制作是否合格;作是否合格;條件對(duì)照:用條件對(duì)照:用_培養(yǎng)培養(yǎng)基與選擇培養(yǎng)基對(duì)照,說(shuō)基與選擇培養(yǎng)基對(duì)照,說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有選擇作明選擇培養(yǎng)基具有選擇作用用同一稀釋度涂布同一稀釋度涂布至少至少_個(gè)平板個(gè)平板完全完全3 34.4.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
59、:土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù):5.5.分解尿素的細(xì)菌的鑒別:分解尿素的細(xì)菌的鑒別:(1)(1)方法:在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入方法:在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_指示劑培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。指示劑培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。酚紅酚紅(2)(2)原理:原理:(3)(3)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及結(jié)論。實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及結(jié)論。培養(yǎng)基變紅:該種細(xì)菌培養(yǎng)基變紅:該種細(xì)菌_分解尿素。分解尿素。培養(yǎng)基不變紅:該種細(xì)菌培養(yǎng)基不變紅:該種細(xì)菌_分解尿素。分解尿素。能能不能不能【微點(diǎn)警示微點(diǎn)警示】關(guān)于關(guān)于“選擇菌落數(shù)在選擇菌落數(shù)在3030300300的平板的平板”的兩個(gè)理解誤區(qū)的兩個(gè)理解誤區(qū)(1)(1)只得到只得到1 1個(gè)菌落數(shù)
60、在個(gè)菌落數(shù)在3030300300的平板:不符合實(shí)驗(yàn)的的平板:不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則,易受到偶然因素的影響。重復(fù)原則,易受到偶然因素的影響。(2)(2)得到得到3 3個(gè)或個(gè)或3 3個(gè)以上菌落數(shù)在個(gè)以上菌落數(shù)在3030300300的平板:也不的平板:也不一定正確,如得到一定正確,如得到3 3個(gè)平板,菌落數(shù)分別為個(gè)平板,菌落數(shù)分別為230230、3434、240240,雖然菌落數(shù)均在,雖然菌落數(shù)均在“3030300”300”,但由于,但由于3434與另外與另外兩個(gè)平板上的菌落數(shù)差異較大,應(yīng)找出原因并重新實(shí)兩個(gè)平板上的菌落數(shù)差異較大,應(yīng)找出原因并重新實(shí)驗(yàn)。驗(yàn)。【秒判正誤秒判正誤】1.1.只有能合成脲酶的
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