核素標(biāo)記化合物

1、第四章 核素標(biāo)記化合物第一節(jié) 概述一、標(biāo)記化合物的概念但凡分子中某一原子或某些原子或基團(tuán)被放射性核素或穩(wěn)定核素所取代，而成為 一類易被識別的化合物，那么稱之為核素標(biāo)記化合物以下簡稱標(biāo)記化合物。如CH3 14COOH是放射性14C的標(biāo)記化合物；ch13coo那么是穩(wěn)定核素13C的標(biāo)記化合物。其中14C和13C均 為標(biāo)記原子。本章側(cè)重介紹放射性標(biāo)記化合物 radionuclide labeled compound , 僅在 第三節(jié)中對穩(wěn)定核素標(biāo)記化合物和其他標(biāo)記化合物作扼要說明。二、常用的術(shù)語及標(biāo)記化合物的命名一標(biāo)記化合物的分類按照取代原子與被取代原子的關(guān)系，可把放射性標(biāo)記化合物分為兩類：1同位素

2、標(biāo)記化合物 isotopic labeled compound 化合物中某元素的穩(wěn)定同位素原子被同一元素的放射性同位素或穩(wěn)定同位素原子取 代，稱為同位素標(biāo)記化合物，取代前后的化合物，在理化性質(zhì)上完全相同同位素效應(yīng)除 外，這類標(biāo)記稱為同位素標(biāo)記isotopic labeling 。如葡萄糖分子中的 C、H分別被14C、 3h取代，二氧化碳中的碳被 14C或13C取代，都得到同位素標(biāo)記化合物。2. 非同位素標(biāo)記化合物 nonisotopic labeled compound該類標(biāo)記化合物是用化學(xué)性質(zhì)相似或根本不同的放射性核素取代原化合物中所含的某 元素的穩(wěn)定核素原子 , 這種標(biāo)記稱非同位素標(biāo)記 n

3、onisotopic labeling 。此類標(biāo)記化合 物即非同位素標(biāo)記化合物，如125I-IgG 免疫球蛋白 。非同位素標(biāo)記亦稱非理想標(biāo)記，得到的標(biāo)記化合物在理化和生化性能上與原化合物有一定的差異，但嚴(yán)格控制質(zhì)量，仍能在 醫(yī)學(xué)中得到廣泛應(yīng)用。標(biāo)記化合物也可按標(biāo)記核素是放射性核素還是穩(wěn)定核素分成放射性核素標(biāo)記化合物 和穩(wěn)定核素標(biāo)記化合物，統(tǒng)稱為核素標(biāo)記化合物。二標(biāo)記化合物的命名及常用術(shù)語1標(biāo)記化合物的命名 對放射性標(biāo)記化合物的命名尚缺少統(tǒng)一法那么。一般情況下，有機標(biāo)記化合物的命名， 通常先指出標(biāo)記位置，再列出標(biāo)記核素，最后是化合物的名稱，如l- 14C-醋酸。必要時，可在核素符號的右下角注明分

4、子內(nèi)標(biāo)記原子的數(shù)目，如DL-苯丙氨酸-環(huán)2Hs, a -2Hs。無機標(biāo)記化合物命名，通常在化合物的前面注明放射性核素，也可把標(biāo)記核素直接寫在分子 式內(nèi)，如 125I- 碘化鈉或 Na125I 。2常用術(shù)語標(biāo)記分子的具體情況常用以下術(shù)語或符號來說明：(l )定位標(biāo)記( specific labeling ) 即分子中的標(biāo)記原子限定在指定的位置上。常用“ S表示，如1-14C( S)-乙酸或1-14C-乙酸。表示1位碳原子被14C標(biāo)記。(2) 準(zhǔn)定位標(biāo)記( nominal labeling ) 在 3H 標(biāo)記中，理論上應(yīng)獲得預(yù)期的定位標(biāo)記分 子，實際上，3H在預(yù)期位置上的分布， 有時低于化合物中3

5、H總量的95%,或百分比值不詳。 此類標(biāo)記稱準(zhǔn)定位標(biāo)記，用“ n表示。是一種名義上的定位標(biāo)記。(3) 均勻標(biāo)記( uniform labeling ) 是一種非定位標(biāo)記( non-specific labeling ), 指整個分子中的某元素所有的原子均被放射性核素取代,或是放射性原子在分子中均勻地分布或者是到達(dá)統(tǒng)計學(xué)上的均一性。用“U表示，如U-14C-乙酸。(4) 全標(biāo)記( general labeling ) 是非定位標(biāo)記,指分子內(nèi)所有相同的氫原子都可被314H取代，機遇各不相同。不具有統(tǒng)計學(xué)上的均一性。用“G表示，如G- C-乙酸。(5) 雙標(biāo)記或多標(biāo)記(double labeling

6、 or multiple labeling) 指在標(biāo)記化合物內(nèi)引入兩種或兩種以上的元素的同位素,或引入一種元素的兩種或兩種以上的同位素原子,1514如 NH CHCOQH生物醫(yī)學(xué)示蹤研究中，有時將一種化合物的兩種或兩種以上單標(biāo)記物混合 起來應(yīng)用,通常也稱為雙標(biāo)記或多標(biāo)記物。第二節(jié) 制備標(biāo)記化合物的根本技術(shù)一 、放射性核素的選擇及標(biāo)記要求由于放射性核素有其自身的特點,因此選擇核素時應(yīng)注意：( 1)有適宜的核性質(zhì)。例如發(fā)射丫射線的核素容易測量，往往成為制備標(biāo)記化合物的首選；半衰期不能太短，以便 完成制備和實驗；但是太長的壽命給處理放射性廢物帶來諸多麻煩, 以及比活度偏低,不易測量。( 2)得到的產(chǎn)

7、物應(yīng)與被示蹤化合物性質(zhì)盡量接近,以便得到可信的實驗結(jié)果和結(jié) 論。( 3)標(biāo)記方便,得到的化合物穩(wěn)定。放射性標(biāo)記化合物在標(biāo)記時也有一些特殊的要求： ( 1)標(biāo)記時應(yīng)充分利用放射性核素, 標(biāo)記率應(yīng)盡量高,未標(biāo)記的核素應(yīng)注意回收利用。( 2)放射性核素標(biāo)記是一種微量化學(xué)過程,需用微量或超微量方法進(jìn)行標(biāo)記、 純化和鑒定。 標(biāo)記時應(yīng)盡量減少放射性核素的稀釋, 防止參加不必要的載體。 ( 3)選擇標(biāo)記方法時, 最好用同位素標(biāo)記； 如使用非同位素標(biāo)記, 那么標(biāo)記核素的位置應(yīng)以不影響整個標(biāo)記分子的特定功能為佳；各種放射性核素的化學(xué)狀態(tài) 不同,標(biāo)記方法也有差異。( 4)標(biāo)記過程應(yīng)簡單、快速；最好在標(biāo)記的最后階段

8、參加放射性核素,以減少損失和污染；有條件時,在標(biāo)記前作冷實驗,以取得經(jīng)驗。二、標(biāo)記方法制備放射性標(biāo)記化合物的常用方法歸納如下：(一) 化學(xué)合成標(biāo)記法( chemical synthesis ) 此方法是通過化學(xué)反響將放射性核素引入化合物中。換言之,就是將放射性核素 的初始原料,通過選定的工藝步驟,合成所需要的標(biāo)記化合物。此法可定位標(biāo)記,但合成 步驟較多。 14C， 3H 標(biāo)記化合物常用此法進(jìn)行合成標(biāo)記。 二 同位素交換標(biāo)記法 isotope exchange 一般系指兩種不同分子之間同一元素的同位素相互替代的過程，利用這個交換過程直 接把某種特定的放射性核素引入化合物中。該方法操作快速、簡便。

9、在放射性核素半衰期 短、化學(xué)合成步驟多的情況下，該方法的實用意義更大。適用于大量有機化合物或天然產(chǎn) 物的3h標(biāo)記，是制備3h標(biāo)記化合物的重要方法。 三 生物合成標(biāo)記法 biosynthesis 該方法是利用酶、微生物、動植物的生理代謝過程，引入放射性核素合成有機化合物。 特別是對目前尚不能用人工方法合成的物質(zhì)，如某些激素、蛋白質(zhì)、抗生素、核酸、維生 素等，生物合成法那么成為其惟一的制備方法。在酶的催化下，該方法合成的標(biāo)記化合物大 都是具有旋光性的異構(gòu)體，產(chǎn)物不必經(jīng)過別離。用微生物或動植物進(jìn)行生物合成的缺點是 產(chǎn)額低，標(biāo)記位置不易控制，易造成污染。此外，還有加速離子和熱原子反沖標(biāo)記法。實際上，這

10、種反沖標(biāo)記法與中子活化標(biāo)記、 輻射誘發(fā)激活標(biāo)記一樣、都屬于輻射合成標(biāo)記法。一般它們多用于化合物的3H 標(biāo)記，如甾族化合物、激素和維生素的 3H標(biāo)記。三、常用的標(biāo)記化合物及其制備常用的標(biāo)記化合物通常指 3H、 14C 和放射性碘標(biāo)記的化合物，目前碘標(biāo)記化合物用得比 較多。一放射性碳的標(biāo)記化合物碳是構(gòu)成生命物質(zhì)的根本元素。在碳的放射性同位素中，生物醫(yī)學(xué)中用得最多的是14C和11Co 14C由反響堆生產(chǎn)，半衰期為 5, 730年，只發(fā)射3粒子0.159 MeV ,用液閃測量 很方便，外照射較弱，易防護(hù)。用于自顯影時，影像清晰。半衰期長，能保證連續(xù)實驗， 又不需要進(jìn)行放射性衰變校正。理論上，14C標(biāo)記

11、化合物的放射性比活度可高達(dá)2.3088 TBq/g，豐度可達(dá)100%商品達(dá)80%以上。與3H相比，14C標(biāo)記化合物輻射自分解速度低。由于構(gòu)成物質(zhì)的 c c鍵比擬牢固，標(biāo)記化合物中的14c原子也比擬穩(wěn)定，所以在生物示蹤研究中很有用。11C標(biāo)記化合物用于核醫(yī)學(xué)診斷，由加速器生產(chǎn)，它發(fā)射3 +射線，半衰期為20.1 min ,需要用快速標(biāo)記和別離方法制備相應(yīng)的化合物。由于11C的良好核性質(zhì)，因此它的化合物，如11C-蛋氨酸、11C-甲基螺環(huán)哌啶酮等是 PET proton emission tomography，正電子發(fā)射 斷層術(shù)顯像中所用的主要放射性藥物之一 。放射性碳的標(biāo)記常從最簡單的化合物如1

12、1CQ或Ba14CG開始，然后逐步合成得到所需的產(chǎn)品，可定位標(biāo)記，純化方便，放射性比活度高。14c標(biāo)記化合物的制備方法，根本上分為化學(xué)合成法、生物合成法和輻射合成法3類。14C標(biāo)記化合物制備工藝復(fù)雜，要求設(shè)備條件高和防護(hù)措施全。一般放射性實驗室從事14c標(biāo)記有一定的困難。11C的標(biāo)記通常用全自 動裝置，在幾分鐘內(nèi)可得到所需的產(chǎn)品。二3h標(biāo)記化合物3H為弱3輻射體Ema=18.4 keV ,半衰期為12.35年，可適用于各類實驗。3H 的比活度可達(dá)1077.44GBq/mmol,比擬容易獲得高比活度的標(biāo)記化合物。并可借助核磁共振儀鑒定3h在標(biāo)記物中的標(biāo)記結(jié)構(gòu)。3h的豐度高，標(biāo)記化合物的制備方法較

13、 14c容易。 一些難以用14c標(biāo)記的化合物，如肽類、蛋白質(zhì)等，常可用3h標(biāo)記。此外，還能作為碳骨架結(jié)構(gòu)的示蹤劑，這點是14c所不及的。所以，3h標(biāo)記化合物的用途較廣，用化學(xué)合成法、同位素交換法和生物合成法均可制備。三放射性碘標(biāo)記化合物在醫(yī)學(xué)中常用的放射性碘有131I、1251、123l、1241等，其核性質(zhì)如表 4-1，其中1251和131|是生物醫(yī)學(xué)中最常用的放射性核素。不少有機化合物都可以進(jìn)行碘標(biāo)記，方法簡 單，適合制備比活度高的化合物。123|和124|標(biāo)記化合物主要用于臨床功能檢查，131|用125于甲狀腺疾病和各種腫瘤的治療，I標(biāo)記化合物那么主要用于生物醫(yī)學(xué)研究與體外分析中。表4-

14、1醫(yī)學(xué)中常用的放射性碘核素半衰期衰變方式王要射線能量， MeV 分支比123I13.0 hEC丫 :0.159(82.9%)125I60.2 dEC丫 :0.035(6.7%) , X : 0.027131I8.04 d3 -3 -:0.606(86%), 0.336(13%)丫 :0.364(81%) , 0.637(8.94%)120I1.4 h+3丫 :+0.511, 3 : 4.6122I3.6 m+3丫 :+0.511, 3 : 3.1124I4.2 d+3丫 :+0.511, 3 : 2.11. 放射性碘標(biāo)記的蛋白質(zhì)和多肽放射性碘標(biāo)記的蛋白質(zhì)和多肽方法很多，如一氯化碘法、電解標(biāo)記法

15、、氯胺-T法、乳過氧化物酶法、lodogen法和聯(lián)接標(biāo)記法等。后四種方法應(yīng)用較多。I 氯胺-T Chloramine T , Ch-T法這是一種微量標(biāo)記方法，最初由Greenwood和Hun ter建立。該方法標(biāo)記率高，重復(fù)性好，是常用的經(jīng)典標(biāo)記方法。Ch-T是一種較溫- +和的氧化劑，在水溶液中形成次氯酸，將陰離子I氧化為分子態(tài)的碘或I，在pH為7.5的環(huán)境里能與蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基苯環(huán)上的H發(fā)生置換反響，制得碘標(biāo)記物。具體操作方法舉例：在5卩g/50卩L蛋白質(zhì)0.5 mol/ L的磷酸緩沖液，pH 7.5 中，依次參加 74MBq /50卩L碘I化鈉Na I , 100卩g /50卩L Ch

16、-T , 4C下快速攪拌 Imin后，參加 200卩g /100 卩L偏重亞硫酸鈉NqS205終止反響，參加 I mg /100 卩L碘化鉀KI , 然后用Sephadex G-25凝膠柱別離標(biāo)記蛋白質(zhì)和游離碘。一般游離碘不超過5%。其反響式為：JRT)2CHj-90i HO-Q CHj-CH -CO-+2ItNH,畫白廣威雰駄中的ncsas) *iH0-O-CH,-CH-C0-4-2H+ 2*1；#Inh(氯胺-T法標(biāo)記125I反響式Ch-T 水溶液對光和氧不穩(wěn)定，易分解，和Na2S2O5 樣，使用前臨時配制。Ch-T的實125際用量超過理論值按氧化74 MBq新鮮無載體的I計算，理論上僅需

17、 Ch-T O.15卩g,Ch-T的濃度越高，標(biāo)記率也越高，但用量過高會引起標(biāo)記物的生物活性和免疫活性降低； 用量過低或局部濃度過高也能導(dǎo)致標(biāo)記率降低。嚴(yán)格控制反響溫度，能減少Ch-T對蛋白質(zhì)的損傷作用。參加 KI是為了充分別離游離碘。反響時間由待標(biāo)記物質(zhì)的性質(zhì)決定。綜上所 述，控制Ch-T的濃度、反響時間和溫度有利于蛋白質(zhì)的標(biāo)記。2 乳過氧化物酶法即用乳過氧化物酶lactoperoxidase , LPC催化過氧化氫H2O2釋放出活潑的新生態(tài)氧，使125I離子活化并標(biāo)記在蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上的一種標(biāo)記方法。此類酶催化反響速度很快。以標(biāo)記蛋白質(zhì)為例，其方法舉例如下：37 MBq /50卩L N

18、a I , 210 卩 g /10 卩 L 蛋白質(zhì)，20100 ng /10 卩 L LPQ 200500 ng /10 卩 L H2O2 混勻，反響1030 min，參加10 mmol/L的巰基乙醇或緩沖液0.5 mL終止反響。10 min后參加0.1 mmol/L的Nal載體溶液100卩L,按常規(guī)方法純化別離。其反響式為：CT3+H0- 00* NH, 111In、90Y等那么可直接與生物大分子-螯合劑聯(lián)結(jié)物反響，得到相應(yīng)的標(biāo)記物；純化，除去未標(biāo)記的放射性核素和其他雜質(zhì)。間接 標(biāo)記法的優(yōu)點是可用于不含二硫鍵的配體標(biāo)記；缺點是得到適宜的雙功能螯合劑較困難， 對于不同的核素需要針對性地合成不同

19、的連接劑，否那么容易產(chǎn)生標(biāo)記物不穩(wěn)定、標(biāo)記產(chǎn)率 低等問題。另外，制備過程步驟多，放射性核素?fù)p失大。四、標(biāo)記化合物的純化與質(zhì)量鑒定一標(biāo)記化合物的純化各種方法得到的標(biāo)記化合物都含有一定量的雜質(zhì)，放存一段時間的標(biāo)記化合物也會出 現(xiàn)分解產(chǎn)物，所以在使用前必須別離純化。常用的純化方法有沉淀法、萃取法、離子交換 別離法和層析別離法等。純化方法的選擇主要依據(jù)標(biāo)記化合物的化學(xué)性質(zhì)，副反響生成的 化合物的性質(zhì)，標(biāo)記化合物的產(chǎn)額，標(biāo)記時已存在的或反響中生成的雜質(zhì)的性質(zhì)與量。二標(biāo)記化合物的質(zhì)量鑒定標(biāo)記化合物的質(zhì)量鑒定指標(biāo)應(yīng)包括：放射性核素純度、放射化學(xué)純度、放射性比活度及 生物學(xué)指標(biāo)。1.放射性核素純度radio

20、nuclide purity放射性核素純度指標(biāo)記化合物所需要的放射性核素的活度占樣品中各種核素總放射性 活度的百分比，計算公式：放射性核素純度所需放射性核素的活度樣品的總放射性活度100%般要求標(biāo)記化合物的放射性核素純度應(yīng)在98%以上。常用的檢查方法有兩種：半衰期測定法，適用半衰期短的核素，一般跟蹤時間為35個半衰期；射線能量測定法,利用各種放射性核素固有的能譜，檢查測定放射性核素的純度。2. 標(biāo)記率labeling efficiency 和放射化學(xué)純度radiochemical purity 所謂標(biāo)記率是指所標(biāo)記的物質(zhì)有可能包括一種以上的化學(xué)形態(tài)的放射性活度占樣 品中總放射性活度的百分比。放

21、射化學(xué)純度是指某一特定化學(xué)形態(tài)的標(biāo)記物的放射性活度占總放射性活度的百分比。放射化學(xué)純度一般應(yīng)到達(dá)95%以上方可使用。常用的檢查方法有放射性層析法，包括電泳法、薄層色譜、紙色譜及高效液相色譜法等，有時也用放射性核素稀釋法和放射自顯影法。標(biāo)記率標(biāo)記物的放射性活度 二樣品的總放射性活度100%放射化學(xué)純度100%特定化學(xué)形態(tài)的某種核素的放射性活度該核素的總放射性活度3. 放射性比活度(specific activity )放射性比活度簡稱比活度，是指單位質(zhì)量物質(zhì)所含的放射性活度。用MBq/mmol或GBq/mmol表示。測定方法有直接測定計算法、層析掃描面積計算法等。4. 生物學(xué)鑒定生物學(xué)鑒定包括生

22、物活性和免疫活性等的測定，這對體內(nèi)示蹤劑尤為重要。一般說來， 受體的生物活性可通過受體和配基結(jié)合率測定，免疫活性可通過抗體和抗原結(jié)合率測定。五、標(biāo)記化合物的貯存放射性標(biāo)記化合物除具有化合物本身的不穩(wěn)定性外，還具有放射性原子所引起的不穩(wěn) 定性。用于標(biāo)記的放射性核素所發(fā)出的射線能使標(biāo)記化合物自身分解，稱之為輻射自分解(autoradiolysis )。輻射自分解常分為 3類：初級內(nèi)部自分解：即標(biāo)記化合物由于放射 性標(biāo)記原子的核衰變而引起的原子組成的變化或化學(xué)鍵斷裂。這類分解作用是放射性核素 固有的物理特性，無法人為地控制和防止。初級外輻射分解：即放射性標(biāo)記原子發(fā)射的 射線直接作用于化合物分子，引起

23、分子化合鏈斷裂，造成化合物分解。這類外輻射分解作 用與標(biāo)記化合物的濃度有關(guān)。次級輻射分解：放射性標(biāo)記化合物或其周圍介質(zhì)的分子， 由于射線與物質(zhì)相互作用而產(chǎn)生一系列活性游離基團(tuán)，如H、OH、HO? 等，這些活性基團(tuán)又與標(biāo)記化合物分子相互作用，使得化合物分解。次級輻射分解作用對3h和14c標(biāo)記化合物更重要。標(biāo)記化合物的輻射自分解主要與標(biāo)記化合物吸收射線能量的效率、標(biāo)記化合物 的濃度和比活度有關(guān)。 標(biāo)記化合物發(fā)生輻射分解的百分?jǐn)?shù)用G值表示，即以系統(tǒng)每吸收100eV射線能量后發(fā)生變化(不管生成或破壞)的分子數(shù)目表示。應(yīng)指出，除了輻射自分解以外，標(biāo)記化合物還會發(fā)生化學(xué)分解，標(biāo)記化合物本身的不 穩(wěn)定性引起

24、儲存過程中發(fā)生分解，如水解、氧化、聚合等。對于氚，還會發(fā)生同位素交換 反響，標(biāo)記化合物分子的某些基團(tuán)，如-SH、-NH、-COOH = NH中的標(biāo)記氚原子都不穩(wěn)定(稱為不穩(wěn)定氚)，在極性溶劑中能與氫或其他元素發(fā)生交換而失去氚。標(biāo)記化合物的儲存原那么：降低標(biāo)記物比活度。固體純品貯存輻射自分解最嚴(yán)重，以 液態(tài)貯存較好。稀釋。在貯存高純度的標(biāo)記化合物時常用非標(biāo)記的化合物稀釋。選擇稀 釋劑時，主要采用不易產(chǎn)生自由基的溶液作稀釋劑，如苯。惰性氣體環(huán)境，以防止標(biāo)記 物氧化。低溫保存。以低溫度但不結(jié)冰條件下(2 0C4 C)避光貯存標(biāo)記化合物為好。對3H的標(biāo)記化合物來說也可采用深凍(-140 C)保存。第三

25、節(jié)穩(wěn)定核素及其他標(biāo)記化合物、穩(wěn)定核素標(biāo)記化合物穩(wěn)定核素( stable nuclide )是一類原子核不發(fā)射射線的核素，包括不自發(fā)地發(fā)生核 內(nèi)成分或能級變化或發(fā)生概率非常小(通常指Ti/2 109a ,也有人定義為Ti/2 1015a )的核素。醫(yī)學(xué)生物學(xué)中最有用的穩(wěn)定核素(H C、N、O S)大多數(shù)為輕元素的重同位素；少數(shù)為輕同位素。自然界存在的各種元素，大多數(shù)不止有一種穩(wěn)定核素，它們相互混合，以恒 定的比例存在于各種化合物之中。習(xí)慣上把其中比例最高的核素稱為主要核素，如16q其余比例較低的稱為主要核素的穩(wěn)定同位素(stable isotope ),如17Q和18O天然存在的穩(wěn)定核 素的原子

26、 數(shù)與該元素總 原子數(shù)的 百分比，即該 穩(wěn)定核素 的天然豐度( natural abundanee )。它是穩(wěn)定核素測量時的本底來源之一，能直接影響測量的靈敏度。所以，應(yīng) 用時應(yīng)盡量地選擇天然豐度低的核素。穩(wěn)定核素的生產(chǎn)，與放射性核素不同，主要是通過理化方法，從天然存在的某一元素 的各種穩(wěn)定核素的混合物中別離出所需的核素。常用的方法有質(zhì)量別離法、同位素交換法 和富集法( enriehment )等。穩(wěn)定核素的標(biāo)記化合物( labeled eompound of stable nuelide)的制備，與放射性核素標(biāo)記物的制備方法根本相似，也分為化學(xué)合成法、生物合成法及同位素交換三大類。穩(wěn)定核素標(biāo)

27、記化合物制備規(guī)模相比照擬大，多在數(shù)10 mg到100 g之間，要求穩(wěn)定核素豐度高。因不存在核素衰變問題，不要求快速合成，故制備過程并不完全與放射性標(biāo)記過程 相同。如用重水為原料，采用反復(fù)交換步驟可獲得豐度很高的氘標(biāo)記化合物。另外，穩(wěn)定 核素大多比擬昂貴，因此制備過程中要求充分利用原料，并盡量回收未標(biāo)記的局部。近年來，隨著穩(wěn)定核素應(yīng)用的擴(kuò)大，穩(wěn)定核素標(biāo)記技術(shù)已向多標(biāo)記開展，并越來越多 采用分子內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，即一個分子上標(biāo)記多個同種或不同種類的穩(wěn)定核素的原子。同時， 對標(biāo)記的部位也提出了更嚴(yán)格的要求，并注意到標(biāo)記化合物的立體特異性。除化學(xué)純度外，標(biāo)記化合物的豐度成為穩(wěn)定核素標(biāo)記化合物的主要質(zhì)量指標(biāo)。

28、標(biāo)記化合物的豐度有兩個含義：原子豐度(atomic abundanee)和分子豐度(molecular abundance )。原子豐度是指標(biāo)記分子某一特定位置上的原子中標(biāo)記原子所占的百分比。原子豐度包 括該標(biāo)記核素的天然豐度，所以有人也用原子百分超(atom excess )來度量標(biāo)記原子的含量。原子百分超 =原子豐度 - 天然豐度。分子豐度：是指每 100 個分子中帶標(biāo)記核素的分子有多少。其中包括由天然穩(wěn)定核素 形成的、與標(biāo)記物相同的分子。2H、 13C、 15N、 50Cr 等穩(wěn)定核素標(biāo)記的化合物已廣泛地用于物質(zhì)代謝、血容量及腎功能等 方面的研究。隨著分析技術(shù)與分析儀器的開展與完善，穩(wěn)定

29、核素標(biāo)記化合物的應(yīng)用將會更 加廣泛。二、其他標(biāo)記化合物自從 1972 年 Ruberstein 等建立了均相酶免疫分析 homogeneous enzymoimmunoassay 之后，相繼又建立了發(fā)光免疫分析 luminescence immunoassay 熒光偏振免疫分析 fluorescence polarization immunoassay及時間分辨熒光免疫分析 time-resolvedfluoroimmunoassay 等非放射性標(biāo)記示蹤技術(shù)。隨之相應(yīng)地出現(xiàn)酶標(biāo)記化合物、熒光素標(biāo) 記化合物和化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記化合物等。由于這些化合物的有效使用期長，無放射性污染 及廢物處理問題，分析靈敏度接近或超過RIA，所以，這些方法越來越受到人們的重視，應(yīng)用范圍逐漸