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文檔簡介
1、植物可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍: 96T0.1ng/L - 4ng/L使用目的:本試劑盒用于測定植物組織、細胞及相關(guān)液體樣本中可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)水平。用純化的植物可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入可溶性蛋白質(zhì)(sprotein),再與HRP標記的可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍
2、色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物可溶性蛋白質(zhì)(sprotein)濃度。 試劑盒組成 130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標試劑6ml1瓶8標準品(8ng/L)0.5ml1瓶3酶標包被板12孔8條9標準品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液6ml1/瓶12密封袋1個標本要求 1標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于
3、-20保存,但應避免反復凍融2不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。4ng/L5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液2ng/L4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液1ng/L3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液0.5ng/L2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液0.25ng/L1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
4、、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。 4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。8. 洗滌:操作同5。9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.10. 終止
5、:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(n5)。5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
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