類風濕關節(jié)炎滑膜細胞凋亡及相關基因Fas表達的研究(一)

1、類風濕關節(jié)炎滑膜細胞凋亡及相關基因Fas表達的研究(一)    摘 要 目的：研究類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA)患者滑膜組織中細胞凋亡及相關基因蛋白Fas的表達和意義。方法：采用免疫組織化學方法，對9例患者及8例正常對照滑膜組織中凋亡細胞及Fas的表達進行檢測。結果：RA患者滑膜組織中細胞凋亡率明顯低于對照組，而Fas陽性的細胞百分比卻明顯高于對照組。結論：RA患者滑膜組織中細胞凋亡的減少可能是導致滑膜過度增生進而關節(jié)功能喪失的原因之一，F(xiàn)as表達雖增多但不能直接誘導細胞凋亡。關鍵詞 類風濕關節(jié)炎；細胞凋亡；免疫組織化學

2、類風濕關節(jié)炎(RA)是一常見的以關節(jié)組織慢性炎癥性病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的全身性疾病，我國成人中發(fā)病率約為0.3%。RA的主要病理特征是關節(jié)滑膜的增生和軟骨及骨組織的侵襲破壞，有很高的致殘率，其發(fā)病機制目前尚不十分清楚。近年的研究表明，細胞凋亡是其發(fā)病中的一個重要機制13。我們采用TUNEL法和免疫組化法對甲醛固定及石蠟包埋的RA患者及對照的滑膜組織進行細胞凋亡及其相關基因Fas表達的研究，旨在探討RA滑膜增生的機制及凋亡相關基因Fas介導的細胞凋亡在RA發(fā)病中的作用。1 資料與方法1.1 臨床資料 在西安市第五醫(yī)院住院手術治療RA患者9例，均符合美國風濕病學會1987年的RA診斷標準，其中男性2例，

3、女性7例，年齡16歲67歲，平均年齡(32.8±15.0)歲，病程1 a23 a，平均病程(12.8±7.7) a。所有患者均有不同程度的關節(jié)活動性病變(有3個或3個以上關節(jié)持續(xù)性腫脹)，平均受累關節(jié)數(shù)為18個,6例類風濕因子(RF)陽性,3例陰性,血沉16 mm/h83 mm/h，平均(55.0±23.6) mm/h，其中關節(jié)功能分級：級2例，級1例，級5例，級1例。關節(jié)X線表現(xiàn)分期：期2例，期1例，期6例?；颊呋そM織均取自滑膜切除術中的膝關節(jié)和/或腕關節(jié)，8例正常對照的滑膜組織取自骨折或外傷截肢者的膝關節(jié)。1.2 組織處理 切取0.5 cm1 cm滑膜組織,

4、4%多聚甲醛固定,3%EDTA脫鈣,石蠟包埋，用10%的多聚賴氨酸處理載玻片,滑膜組織切片為6 m,室溫貯藏備用。1.3 實驗方法2 結果2.1 TUNEL法細胞凋亡在滑膜組織中的表達 RA組與對照組均可見細胞凋亡,但RA患者滑膜襯里層中細胞凋亡率明顯低于對照組，兩組相比差異具有顯著性(P0.05)。2.2 Fas蛋白在RA患者滑膜組織中的表達 RA組與正常對照組均可見Fas的陽性表達,但RA患者滑膜襯里層中Fas陽性的細胞百分比明顯高于對照組，兩組相比差異具有顯著性(P0.05)，見表1。表1 凋亡細胞及Fas在滑膜襯里層細胞中的陽性表達計數(shù)結果（略）注:與對照組比較*P0.053 討論RA

5、的病理特征主要表現(xiàn)為滑膜細胞(主要是成纖維細胞)的增殖與炎性細胞的浸潤，導致滑膜增厚、骨與軟骨組織的受損，最后導致關節(jié)的破壞。目前對滑膜增生的確切原因還不清楚，但這些細胞的積累肯定部分與細胞凋亡抵抗或缺陷有關1。本研究發(fā)現(xiàn)，RA患者滑膜細胞明顯增生，而細胞凋亡率卻明顯減少，說明RA患者滑膜細胞不因過度增生而出現(xiàn)過多的細胞凋亡，符合其病理特點，提示滑膜細胞的凋亡障礙可能是導致滑膜增厚的原因之一。細胞凋亡受多種基因調(diào)控,有些基因如Fas、Bax、腫瘤壞死因子等誘導凋亡，而Bcl2、P53等抑制凋亡的發(fā)生4。Fas蛋白是一種細胞膜表面受體，是型膜蛋白，屬于TNF家族，F(xiàn)asL是TNF家族的細胞表面分

6、子，屬于型膜蛋白，F(xiàn)as與FasL的結合可導致攜帶Fas的細胞凋亡5。已證實Fas作為凋亡主要誘導因子，存在于滑膜細胞、軟骨細胞以及滑膜浸潤單個核細胞，另有報道，F(xiàn)as蛋白可在RA和OA患者滑膜細胞表達，與抗Fas抗體結合后可誘導滑膜細胞凋亡，表明滑膜細胞表面的Fas具有傳導凋亡信號的功能6，RA的關節(jié)破壞可能與Fas介導的細胞凋亡有關2。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as在RA患者的滑膜細胞的高表達率，與細胞凋亡減少并不一致，結合既往研究報道滑膜襯里層細胞本身不能同時表達Fas和FasL而誘導自身細胞的凋亡5，從而我們推測滑膜細胞凋亡的下降可能是因為FasL的減少，使Fas不能與FasL結合將信號傳遞給細胞

7、，進而抑制和阻斷了Fas介導的凋亡途徑。另有研究報道，只有少量單個核細胞上Fas與FasL同時表達(5%)，滑膜表層發(fā)生凋亡的細胞大多數(shù)同時表達Fas和FasL，且Fas陽性的成纖維細胞與FasL陽性的單個核細胞位置上毗鄰7，這一點也解釋了RA滑膜細胞雖高表達Fas但仍能夠存活及增殖。綜上所述，本研究結果表明，RA滑膜細胞凋亡減少，凋亡相關基因Fas表達增高，細胞凋亡并不隨滑膜的增生而增加，其凋亡誘導因子Fas表達雖增加，但可能因其配體FasL減少而不能誘導凋亡，從而導致細胞增生與凋亡的不平衡，最終引起RA滑膜的增生及關節(jié)結構的破壞，但因多種基因同時調(diào)控細胞凋亡，F(xiàn)as介導的細胞凋亡的減少可能

8、僅是RA滑膜增生的原因之一。參考文獻：1 劉莉莉.類風濕關節(jié)炎細胞凋亡分子的研究進展J.上海免疫學雜志，2003：142144.2 陸意.類風濕關節(jié)炎發(fā)病機制的研究進展J.國外醫(yī)學免疫學分冊，2001：256259.3 劉繼紅，李衛(wèi)東，林志彬.類風濕關節(jié)炎細胞凋亡的研究現(xiàn)狀J.中國臨床藥理學與治療學，2003，8(2)：232236.4 Chouct,yang JS,Lee MR,et al. Apoptosis in rheumatoid arthritisexpression of Fas,FasL,P53,and Bcl2 in rheumatoid synovial tissues J.Pathology,2001,193:110.5 張興民，蔣明，鄭德先，等.類風濕關節(jié)炎患者滑膜細胞增生與Fas和bcl2基因的表達J.中華醫(yī)學雜志，1998，78(3)，1751786 Nakajima T, Aono H, Hasunuma T, et al. Apoptosis and functional