分子生物學重點習題

1、一、名詞解釋：1 基因：是核酸中儲存有功能的蛋白質多肽鏈或RNA序列信息及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列。2 基因組：細胞或生物體一套完整單倍體的遺傳物質的總稱。3 基因表達：是指原核生物和真核生物基因組中特定的結構基因所攜帶 的遺傳信息，經(jīng)過轉錄、翻譯等一系列過程，合成具有特定的生物學功能的各種蛋白質，表 現(xiàn)出特定的生物學效應的全過程。4 啟動子：RNA 聚合酶特異識別結合和啟動轉錄的DNA序列。5 多順反子：原核生物的一個 mRNA 分子帶有幾個結構基因的遺傳信息， 利用共同的啟動子及終止信號，組成操縱子的基因表達調控單元。6 單順反子：一個結構基因轉錄生成一個 mRNA 分子。7 順

2、式作用元件：某些能影響基因表達但不編碼蛋白質和 RNA 的 DNA序列，按照功能分為啟動子、增強子、負調控元件-沉默子。8 核心啟動子：指足以使 RNA 聚合酶轉錄正常起始所必需的、最少的 DNA 序列。包括“轉錄起始位點”即相當于 mRNA 的 CAP 位點及其上游2530 bp 處的 富含 TA 的典型元件“TATA”盒。核心啟動子單獨起作用時，其功能為確定轉錄起始位點并產(chǎn) 生基礎水平的轉錄。9 上游啟動子元件：TATA 合上游的一些特定的 DNA 序列， 反式作用因子，可與這些元件結合，調控基因轉錄的效率。10增強子：指位于啟動子上游或下游并通過啟動子增強鄰近基因轉錄效率的DNA 順序，

3、但增強子本身不具備啟動子活性。11沉默子：在真核基因內能抑制基因轉錄的 DNA 序列。它們與反式作用因子相 互結合而起作用。不受距離和方向的限制，并可對異源基因的表達起作用。12反式作用因子：指能直接或間接地識別或結合在各順式作用元件 8 12 bp 核心序列上，參與調控靶基因轉錄效率的一組蛋白質。在結構上含有與 DNA 結合的 結構域。13選擇性剪接：在高等真核細胞中，某個內含子 5的供點可以在特定 條件下與另一個內含子 3受點進行剪接，同時刪除這兩個內含子及其中間的全部外顯子或 內含子，即一個外顯子或內含子是否出現(xiàn)在成熟的 mRNA 中是可以選擇的，這種剪接方式 稱為選擇性剪接。14點突變

4、：在基因一級結構某個位點上，一個堿基被另一個堿基取代產(chǎn) 生的 DNA 一級結構改變稱為點突變。15基因工程：是指在體外對 DNA 分子按照既定的目的和方案，對DNA進行剪切和重新連接，然后把它導入宿主細胞，從而能夠擴增有關 DNA 片段，表達有關基因產(chǎn)物，進行 DNA 序列分析、基因治療，研究基因表達的調節(jié)元件（如啟動子、增強 子等），以及研究基因的功能等。16限制性核酸內切酶：限制性核酸內切酶是一種核酸內切酶，又稱限制性內切酶，能識別雙鏈 DNA 分子內部的特異位點并且裂解磷酸二酯鍵。17質粒：存在于包括細菌、酵母在內的多種微生物中，在宿主細胞的染色體外以穩(wěn)定的方式遺傳。結構上，它是一種雙鏈

5、環(huán)狀的DNA分子，含有復制起始點，此復制起始點與其他一些順式調控因子構成復制子，能利用細菌染色體DNA復制和轉錄的同一套酶系統(tǒng)，在細菌體內獨立地進行自我復制及轉錄。18cDNA 文庫：以特定的組織或細胞 mRNA 為模板逆轉錄產(chǎn)生的 cDNA 與適當?shù)妮d體重組得到的重組 DNA 克隆群。19斷裂基因：真核生物基因在編碼區(qū)內含有非編碼的插入序列，結構基因不連續(xù)，即。20結構基因：基因中用于編碼 RNA 或蛋白質的 DNA 序列為結構基因。21非結構基因：結構基因兩側一段不編碼的 DNA 片段，含有基因 調控序列。22內含子：真核生物結構基因內非編碼的插入序列。23質粒：存在于包括細菌、酵母在內的

6、多種微生物中，在宿主細胞的染色體外以穩(wěn)定的方式遺傳。結構上，它是一種雙鏈環(huán)狀的 DNA 分子，含有復制起始點，此復制 起始點與其他一些順式調控因子構成復制子，能利用細菌染色體 DNA 復制和轉錄的同一 套酶系統(tǒng)，在細菌體內獨立地進行自我復制及轉錄。24操縱子：多個功能相關的結構基因成簇串聯(lián)排列，與上游共同的調控區(qū)和下游轉錄終止信號組成的基因表達單位。25DNA 指紋：利用人類染色體上小衛(wèi)星DNA的核心序列為探針進行RFLP分析時，檢測到大量的高度可變區(qū)，產(chǎn)生相應的圖譜，并具有高度的個體特異性， 達到了如同人類指紋那樣的高度專一性，所以稱其為DNA指紋圖譜。26基因組學：闡明基因組結構、結構與功

7、能的關系及基因與基因之間相互作用的一門科學。27短串聯(lián)重復：衛(wèi)星DNA中重復單位為2-6bp的 DNA 序列，常見為(AC)n 和(TG)n，重復次數(shù) 10-60 次，總長度小于 150bp，高度多態(tài)性，可作遺傳標記。28基因型：逐代傳遞下去的的成對基因的集合，一個來自父本，一個來自母 本。29RNA 干擾：是由雙鏈 RNA 誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象:與其有同源 序列的 mRNA 被降解，從而抑制了該基因的表達。30核酶：是具有酶活性的 RNA，可降解特異的 mRNA 序列。用于基因治療的核酶分子由三個部分組成，中間是保守序列（能夠組成酶活性結構域），兩端是引導序列。與一般的反義 RNA 相比，核酶

8、具有較穩(wěn)定的空間結構，不易受到 RNA 酶的攻擊。更重要的是，核酶在切斷mRNA后，又可從雜交鏈上解脫下來，重新結合和切割其它的mRNA分子。31蛋白質組學：是應用各種技術手段來研究蛋白質組的一門新興科學，是在整 體水平上研究細胞內蛋白質組成及其活動規(guī)律的科學。32免疫共沉淀：免疫沉淀是抗原和抗體之間專一性地相互作用 而沉淀，從而保留下來，其是一種經(jīng)典的檢測蛋白質相互作用的方法。其實驗過程比較簡單， 裂解細胞后，加入抗體，抗原被沉淀下來后洗滌，去除非特異性結合，再分析復合體?？贵w 可以是單克隆，也可以是多克隆。33 等電聚焦：是依據(jù)蛋白質分子的凈電荷或等電點進行分離的技術。在等電聚焦過程中，電

9、場所采用的載體兩性電解質含有脂肪 族多氨基多羧酸，可在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù) pH 梯度。蛋白質分子在一個載體兩性電解質形成的連續(xù)而穩(wěn)定的線性 pH 梯度中電泳，當?shù)鞍踪|遷移到其等電點位 置時，凈電荷為零，在電場中不再移動。因此可將各種不同等電點性質的蛋白質分離開來。34Southern 雜交：是利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性 內切酶消化的 DNA 片段，將膠上的 DNA 變性并在原位將單鏈 DNA 片段轉移至尼龍膜 或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與其互補的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定 DNA 分子的技術。因為該技術由 Southe

10、rn 于 1975 年創(chuàng)建，所以稱為 Southern 印跡雜交技術。35Northern 雜交：指將 RNA 變性及電泳分離后，將其轉 移到固相支持物上，再與其互補的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從 而檢測特定 RNA 分子的的量與大小。因該技術與 DNA 印跡技術相對應，故被稱為 Northern 印跡雜交。36聚合酶鏈式反應 PCR：是體外酶促合成特異 DNA 片段的 一種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，循環(huán)進行，使 目的 DNA 得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。37基因芯片：指固定有寡核苷酸、基因組 DNA 或 cD

11、NA 等的生物芯片。利用 這類芯片與標記的生物樣品進行雜交，可對樣品的基因表達譜生物信息進行快速定性和 定量分析。38限制性片斷長度多態(tài)性：基因組中存在 著許多限制性核酸內切酶位點，當用某種或幾種限制性核酸內切酶對某一段基因消化時，就 會產(chǎn)生大小不同的特定片段，這些片段稱為限制性片段。在同種生物不同個體中出現(xiàn)的不同 長度限制性片段類型就稱為限制性片段長度多態(tài)性。如果由于缺失、重排或核苷酸置換使 DNA 分子中原有的某種限制性核酸內切酶的識別位點發(fā)生改變，使原有的酶切位點消失或 形成了新的酶切位點，于是用這種酶進行酶切后，生成的 DNA 片段的長度或數(shù)目隨之發(fā)生 改變。這種變化如與某種遺傳病的基

12、因有關，就可作為這種遺傳病的診斷指標。39單核苷酸多態(tài)性：指基因組水平上由于單個核苷酸 位置上存在轉換或顛換等變異所引起的 DNA 序列多態(tài)性。SNP 在人類基因組中廣泛存在， 是人類可遺傳變異中最常見的一種。40. 分子克?。涸诜肿铀缴咸峁┮环N純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉化與轉導的方式，引入適合的寄主體內得到復制與擴增，然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴增。41. 組成性基因表達： 無論表達水平高低，管家基因較少受環(huán)境因素影響，而是在個體各個生長階段

13、的大多數(shù)或幾乎全部組織中持續(xù)表達，或變化很小。區(qū)別于其他基因，這類基因表達被視為組成性基因表達。42. 管家基因：在生命的全過程都是必需的，在一個生物體的幾乎 所有細胞中持續(xù)表達的基因。43. 干擾RNA：含22個左右核苷酸的雙鏈RNA，參與RNA誘導的沉默復合物（RISC）的組成，這是一種多成分核酸酶，可使特異的mRNA降解，阻斷該mRNA進行翻譯。44. 等電點：在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時溶液的pH稱為該氨基酸的等電點。45. 結構域：結構域是在二級結構或超二級結構的基礎上形成三級結構的局部折疊區(qū)，一條多肽鏈在這個域范圍內

14、來回折疊，但相鄰的域常被一個或兩個多肽片段連結。通常由50-300個氨基酸殘基組成，其特點是在三維空間可以明顯區(qū)分和相對獨立，并且具有一定的生物功能如結合小分子。模體或基序（motif）是結構域的亞單位，通常由23二級結構單位組成，一般為螺旋、折疊和環(huán)（loop）。46. 蛋白質的四級結構：指蛋白質的多條多肽鏈之間相互作用所形成的更為復雜聚合物的一種結構形式，主要描述蛋白質 亞基空間排列以及亞基之間的連接和相互作用，不涉及亞基內部結構。47. 模體：表示具有特定功能的或作為一個獨立結構域一部分的相鄰的二級結構的聚合體，它一般被稱為功能模體或結構模體，相當于超二級結構。模體和結構域一起組成了蛋白

15、質的三級結構。二、單項選擇題1. 以下哪項屬于真核生物基因的順式作用元件 ： （C）A.內含子 B. 外顯子 C.增強子 D.操縱子 E.轉座子2. 原核生物與真核生物基因組比較，以下哪項是原核生物的特點：（A）A.基因密度高 B.無操縱子結構C.有多基因家族和假基因 D.多復制起點品 E.有大量重復序列3. 以下哪項是真核生物基因組結構特點？ （B）A只有一個復制起點 B. 有大量重復序列 C. 大部分是編碼序列D. 有操縱子結構 E.轉錄的 RNA 為多順反子4. 增強子的作用是 （B）A.增強 DNA 復制 B.增強基因轉錄 C.增強基因穩(wěn)定性 D.增強 RNA 的穩(wěn)定性E被 RNA 聚

16、合酶識別結合5. 以下哪項是原核生物基因組的結構特點 （C）A.由 DNA 或 RNA 組成 B.有單鏈、雙鏈之分C.操縱子結構 D.與組蛋白結合 E. 基因重疊6. 以下哪項屬于啟動子元件 （C）A.內含子 B. 外顯子 C.TATA 盒 D.終止子 E.CAAT 盒7. 下列關于啟動子的論述正確的是下列關于啟動子的描述正確的是：（C）A可以表達基因產(chǎn)物 B能專一地與阻遏蛋白結合C是 RNA 聚合酶的結合部位 D是 DNA 聚合酶的結合部位 E. 是結構基因8. 不屬于真核基因表達調控的順式作用元件的是： （C）A啟動子 B增強子 C操縱子 D沉默子 E. 反應元件9. 由 AATAAA 和

17、富含 GT 或 T 序列共同組成的順式作用元件是（D）A.啟動子 B. 增強子 C. 反應元件 D. 加尾信號 E. 沉默子10. 有關真核基因轉錄調控的反式作用因子描述不正確的是 （C）A. 包括基本和特異性轉錄因子B. 通常含有 DNA 結合結構域C. 基因組上一段 DNA 序列D. 通常還有與其它蛋白結合的結構域E. 含有轉錄活化域11. 下列哪項不屬于真核基因轉錄調控的順式作用元件 （D）A. 啟動子 B. 增強子 C. TATA 盒 D. 一種 RNA E. 沉默子12. 有關基因表達描述錯誤的是（A）A. 其過程總是經(jīng)歷基因轉錄及翻譯的過程B. 某些基因表達經(jīng)歷基因轉錄及翻譯等過程

18、C. 某些基因表達產(chǎn)物是蛋白質分子D. 某些基因表達產(chǎn)物不是蛋白質分子E. 某些基因表達產(chǎn)物是 RNA 分子13. 關于管家基因敘述錯誤的是（C）A在生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達B在生物個體的幾乎各生長階段持續(xù)表達C在一個物種的幾乎所有個體中持續(xù)表達D在生物個體的某一生長階段持續(xù)表達E在生物個體全生命過程的幾乎所有細胞中表達14. 大多數(shù)基因表達調控的最基本環(huán)節(jié)是（C）A. 復制水平B. 轉錄水平C. 轉錄起始水平D. 轉錄后加工水平E. 翻譯水平15. 當培養(yǎng)基內色氨酸濃度較大時，色氨酸操縱子處于（B）A. 誘導表達 B. 阻遏表達 C. 基本表達 D. 組成表達 E. 協(xié)調表達16.

19、順式作用元件是指 （E）A. 基因的 5 側翼序列B. 基因的 3 側翼序列C. 基因的 5、3 側翼序列D. 基因 5、3 側翼序列以外的序列E. 具有轉錄調節(jié)功能的特異 DNA 序列17. 一個操縱子通常含有（B）A. 一個啟動序列和一個編碼基因B. 一個啟動序列和數(shù)個編碼基因C. 數(shù)個啟動序列和一個編碼基因D. 數(shù)個啟動序列和數(shù)個編碼基因E. 兩個啟動序列和數(shù)個編碼基因18. 反式作用因子是指（D）A. 具有激活功能的調節(jié)蛋白B. 具有抑制功能的調節(jié)蛋白C. 對自身基因具有表達調控的蛋白D. 對另一基因具有表達調控的蛋白E. 對另一基因具有功能的調節(jié)蛋白19. 阻遏蛋白結合乳糖操縱子的（

20、B）A、P 序列 B、O 序列 C、CAP 結合位點 D、I 基因 E、Z 基因20. 對大多數(shù)基因來說，CpG 序列甲基化（A）A、抑制基因轉錄B、促進基因轉錄C、與基因轉錄無關D、對基因轉錄影響不大E、以上都不是21. 別乳糖對乳糖操縱子的作用是 （C）A. 作為阻遏物結合于操縱基因B. 作為輔阻遏物結合于阻遏蛋白C. 使阻遏蛋白變構而不能結合 DNAD. 抑制阻遏基因的轉錄E. 使 RNA 聚合酶變構而活化22. 有關操縱子學說的正確論述是（B）A. 操縱子調控系統(tǒng)是真核生物基因調控的主要方式B. 操縱子調控系統(tǒng)是原核生物基因調控的主要方式C. 操縱子調控系統(tǒng)由結構基因、啟動子和操縱基因

21、組成D. 誘導物與操縱基因結合啟動轉錄E. 誘導物與啟動子結合而啟動轉錄23. 屬于反式作用因子的是（E）A. 啟動子 B. 增強子 C. 終止子 D. RNA 聚合酶 E. 轉錄因子24. RNA 聚合酶結合于操縱子的（E）A. 結構基因起始區(qū)B. 阻遏物基因C. 誘導物D. 阻遏物E. 啟動子25. 增強子是（D）A. 特異性高的轉錄調控因子B. 真核生物細胞內的組蛋白C. 原核生物的啟動子在真核生物中的別稱D. 增強啟動子轉錄活性的 DNA 序列E. 在結構基因的 5'-端的 DNA 序列26. 下列哪些不是操縱子的組成部分（A）A. 阻遏蛋白B. 啟動子C. 操縱基因D. 結構

22、基因E. Pribnow 盒27. 轉錄前起始復合物是指（C）A. RNA 聚合酶與 TATAAT 序列結合B. RNA 聚合酶與 TATA 序列結合C. 各種轉錄因子與 DNA 模板、RNA 聚合酶結合D. 因子與 RNA 聚合酶結合E. 阻遏物變構后脫離操縱基因復合物28. 下述關于管家基因表達的描述最確切的是（B）A. 在生物個體的所有細胞中表達B. 在生物個體生命全過程幾乎所有細胞中持續(xù)表達C. 在生物個體生命全過程部分細胞中持續(xù)表達D. 特定環(huán)境下， 在生物個體生命全過程幾乎所有細胞中持續(xù)表達E. 特定環(huán)境下，在生物個體生命全過程部分細胞中持續(xù)表達。29. 紫外線照射引起 DNA 損

23、傷時，細菌 DNA 修復酶基因表達增強，這種現(xiàn)象被稱為（A）A. 誘導B. 阻遏C. 基本的基因表達D. 正反饋E. 負反饋30. 順式作用元件的最確切定義是（B）A. TATA 盒和 CCAAT 盒B. 具有調節(jié)功能的各種 DNA 序列C. 具有調節(jié)功能的 5 側翼序列D. 具有調節(jié)功能的 3 側翼序列E. 所有非編碼序列31. 反式作用因子是（A）A. 轉錄調節(jié)蛋白B. RNA 聚合酶C. DNA 聚合酶D. DNA 酶 IE. RNA 酶32. 構成最簡單的啟動子的常見功能組件是（A）A. TATA 盒B. CAAT 盒C. GC 盒D. 上游調控序列（UAS）E. 以上都不是33. 關

24、于轉錄調節(jié)因子敘述錯誤的是（A）A所有轉錄因子結構均含有 DNA 結合域和轉錄激活域B有些轉錄因子結構可能含有 DNA 結合域或轉錄激活域C通過 DNA-蛋白質或蛋白質-蛋白質相互作用發(fā)揮作用D轉錄因子調節(jié)作用是 DNA 依賴的或 DNA 非依賴的E大多數(shù)轉錄因子的調節(jié)作用屬反式調節(jié)34. DNA 聚合酶大片段不具有下面哪些功能：（C）A. 53聚合酶活性B. 35核酸外切酶活性C. 53核酸外切酶活性D. 補齊雙鏈 DNA 的 3末端E. 3末端標記35. 質粒：（B）A 不能在細菌體內進行自我復制B 是存在于細菌和某些真核生物染色體外的雙鏈環(huán)狀的 DNA 分子C 能容納大于 10kb 的外

25、源 DNA 片段D 有限制性內切酶的多個切點E 能夠溶解細菌36. 大腸桿菌表達載體中不含有：（E）A 復制起始位點B 抗性基因C 克隆位點D 啟動子E 增強子37. 在進行藍-白篩選時，pUC 載體的 lac Z 基因位點插入外源 DNA，轉化細菌后插入了外源 DNA 的重組質粒的：（B）A 細菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)板上生長B 細菌在含有 X-gel 和誘導劑 IPTG 的瓊脂培養(yǎng)板上形成白色菌斑C 細菌在含有 X-gel 和誘導劑 IPTG 的瓊脂培養(yǎng)板上形成藍色菌斑D 細菌在含有 X-gel 和誘導劑 IPTG 的瓊脂培養(yǎng)板上形成透明的無色菌斑E 無菌落形成38. 校正和置換致病基因

26、是用正常的基因整合入細胞中的 （A）A基因組 B線粒體 C蛋白質 D細胞質 ERNA39. 基因轉移的生物學方法是以什么作為基因轉移系統(tǒng) （B）A質粒載體 B病毒載體 C脂質體 D粘粒 E磷酸鈣40. 有關核酶的哪種表述是不正確的（E）A具有引導序列B具有錘頭狀結構C切斷目的 mRNA 而自身沒有消耗D核酶兩端的引導序列與靶分子序列互補E使 mRNA 不能轉錄41. 將外源治療性基因導入哺乳動物細胞的方法不包括（D）A顯微注射法B電穿孔法CDEAE-葡聚糖法DMgCI2 沉淀法E病毒介導的基因轉移42. 紫外線照射使 DNA 分子堿基之間形成二聚體, 其中最常見的形式是 （D）A. C-C B

27、. C-T C. T-U D. T-T E. U-C43. E.coli 核苷酸切除修復過程中，UvrA 的作用是 （B）A. 識別損傷部位 B. 解旋雙鏈 C. 3末端內切 D. 5末端內切 E. DNA 合成44. 有關 Sanger 測序描述正確的是（A）A. ddNTP 底物帶來了延伸終止 B. 利用高溫終止延伸反應C. 以 RNA 鏈合成反應為基礎 D. 反應底物為 dNTP 或 NTPE. 四個延伸終止反應可合并進行45. 有關 DNA 序列自動分析技術描述正確的是（C）A. 電泳分離步驟可省略 B. 四個延伸終止反應必須獨立進行C. ddNTP 分別采用了四種不同熒光標記 D.

28、熒光染料標記在引物E. 不需要 DNA 聚合酶46. 有關核酸分子雜交描述正確的是（A）A. 探針是核酸 B. 不能用于基因表達定量研究 C. 探針不須與待測核酸互補D. 不能用于基因的結構分析 E. 探針多是雙鏈核酸47. Southern 印跡雜交是（A）A. 分析 RNA 的技術 B. 用于 DNA 的定性或定量研究C. 只能用于基因突變分析 D. 利用了 DNA 聚合酶E. 不需要電泳分離48. Northern 印跡雜交是（B）A. 用限制性核酸內切酶消化待測核酸 B. 可鑒定特定 mRNA 的含量和大小C. 將探針轉移到固相支持物上 D. 分析 DNA 的技術E. 不需要電泳分離4

29、9. 有關核酸分子雜交描述錯誤的是（C）A. 可以在組織切片上直接進行 B. 主要用于核酸的檢測C. 也可用于蛋白質的檢測 D. 斑點雜交無需電泳分離E. 可用于核酸拷貝數(shù)的檢測50. 有關 PCR 描述正確的是（E）A. 需要 DNA 限制性核酸內切酶 B. 退火是為了模板復性C. 退火的溫度越低越好 D. 延伸的溫度越高越好E. 引物濃度要適中51. PCR 的引物是（B）A. 一段 RNA 序列 B. 限定了 PCR 產(chǎn)物的長度C. 可以無限長 D. 3?端可以任意修飾E. 3?端可以互補重疊52. PCR 的產(chǎn)物是（D）A. 一段單鏈 DNA B. 與循環(huán)數(shù)呈 3 的指數(shù)倍增長C. 只

30、取決于模板 D. 產(chǎn)量與初始模板數(shù)有關E. 模板的完全拷貝53. Taq DNA 聚合酶是（E）A. 具有 3?5?聚合酶活性 B. 具有 3?5?外切酶活性C. 依賴 RNA 模板 D. 活性非依賴于 Mg2+E. 具有較高的熱穩(wěn)定性54. 以下哪項可以做 PCR 擴增中的模板: （B）A. dNTP B. DNA 片段 C. RNA 片段 D. 蛋白質 E. 肽核酸55. 有關 PCR 引物描述錯誤的是 （C）A. 為一段核酸序列 B. 限定了產(chǎn)物的長度C.與反應的特異性無關 D.不能太長E. 引物之間不應有互補56. 可用于分析基因轉錄水平變化的是 （B）A. Southern blot

31、 雜交 B. RT-PCR C.PCR-SSCP D. DNA 測序 E. Western 免疫印跡57. 以下不屬于蛋白質組功能模式研究技術的是 （C）A.雙向凝膠電泳B.質譜技術C.酵母雙雜交D.生物信息學E.定量蛋白質組學58. 有關基因診斷描述錯誤的是（E）A. 是對基因結構或表達異常的檢測B. 檢測對象包括 DNA 或 RNAC. 可以利用連鎖的遺傳標記進行間接診斷D. 靶基因包括病原微生物的特定基因E. 僅適合遺傳病的診斷59. 利用幾根毛發(fā)進行基因診斷主要體現(xiàn)了基因診斷的哪項特點（C）A高特異性 B. 應用廣泛性 C. 高靈敏性 D. 早期診斷性 E. 唯一性60. 下列方法不屬

32、于基因診斷范疇的是 （A）A 光學顯微鏡下觀察到鐮刀型紅細胞推測患者可能罹患鐮狀細胞貧血病B 以古生物化石標本中殘液為模板進行多態(tài)性位點相關的 PCR 以判別生物種類C 用 RT-PCR 對乙肝病毒攜帶者進行病毒復制水平檢測D 用反向點雜交方法對高風險家庭進行-珠蛋白生成障礙性貧血的產(chǎn)前診斷E 用基因表達芯片分析腫瘤相關基因表達變化61. 常用核酸分子雜交技術不包括（C）A. Southern 印跡雜交B. Northern 印跡雜交C. Western 印跡雜交D. 菌落原位雜交E反向斑點雜交62. 有關間接基因診斷描述正確的是（E）A. 突變基因的異常結構檢測B.針對是基因的表達產(chǎn)物C.

33、比直接診斷效果好D. 完全可以替代直接診斷E. 利用連鎖遺傳標記進行連鎖分析63. 當點突變沒有帶來限制性酶切位點的改變時，不可以采用的診斷技術是（B）A. 測序 B. RFLP C. PCR-ASO D. AS-PCR E. 核酸分子雜交64. 導致特異性限制性內切酶位點改變的基因點突變最常采用的基因診斷方法是（D）APCR B. 序列分析 C. PCR-SSCP 分析 D. 限制性酶譜分析 E. 核酸雜交65. 使用了限制性核酸內切酶的技術是（B）A. 寡核苷酸探針雜交 B. RFLP C. RT-PCR D. DNA 測序 E. Western blot66. 有關基因診斷的描述正確的是

34、（D）A. 僅限于對基因突變的檢測B. 不可以利用連鎖的遺傳標記進行C. 致病基因未知時無法進行D. 可以檢測基因的表達產(chǎn)物E. 不適應于病毒性疾病的診斷三、簡答題1列舉幾種真核基因的順式作用元件。答：（1）啟動子：Hogness盒，CAAT 盒；（2）增強子：SV40 病毒中，位于早期啟動子 5上游約 200 bp，內含 2 個 72 bp 的重復序 列，其核心序列為 GGTGTGGAAAG；（3）沉默子：SV40 中的 AGGTTTTTT 序列為終止轉錄調控元件。2簡述基因克隆的主要過程。答：制備目的基因和相關載體；將目的基因和有關載體進行連接；將重組的 DNA 導入受體細胞；DNA 重組

35、體的篩選和鑒定；DNA 重組體的擴增、表達和其他研究。3簡述乳糖操縱子的結構。答：編碼 -半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和硫代半乳糖苷轉乙酰基酶的基因 Z、Y、A 稱為 結構基因，結構基因加上調控元件：啟動子和操縱基因，即構成乳糖操縱子。4. 簡述 RNA 干擾的作用機制。答：RNA干擾包括起始階段和效應階段。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為 21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段。證據(jù)表明；一個稱為Dicer的酶，是RNase III家族中特 異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基因， 病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，切割將RNA降解為 19-

36、21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個片段的 3端都有 2 個堿基突出。在RNAi效應階段，siRNA雙鏈結合一個核酶復合物從而形成所謂RNA誘導沉默復合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活 RISC需要一個ATP依賴的將小分子RNA解雙鏈的過程。激活的RISC通過堿基配對定位到同 源mRNA轉錄本上，并在距離siRNA3端 12 個堿基的位置切割mRNA。5. 上游啟動子元件是什么答：TATA 合上游的一些特定的 DNA 序列， 反式作用因子可與這些元件結合，調控基因轉錄的效率。6. GT-AG 法則是什么答：真核生物基因的內含子 5端大多

37、數(shù)是以 GT 開始， 3 端大多數(shù)是以 AG 結束，構成 RNA 剪接的識別信號。7. 藍-白篩選的原理。答：有些載體含有-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和氨基端 145 個氨基酸的編碼序列，這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點，這種載體適用于可編碼-半乳糖苷酶羧基端部 分序列的宿主細胞。宿主和載體編碼的-半乳糖苷酶片段各自均無酶活性，但它們可以互 補形成具有酶學活性的蛋白質，使 X-gal 轉化成藍色的代謝產(chǎn)物，出現(xiàn)藍色的菌落（菌斑）。 如果在多克隆位點上插入外源 DNA 片段，將使載體的 lac Z 基因滅活，不能互補形成有活 性的 -半乳糖苷酶，結果菌落（菌斑）呈現(xiàn)白色。由于這種顏色標

38、志，重組克隆和非重組 克隆的區(qū)分一目了然，這種篩選方法稱為“藍-白篩選”。8. 真核生物基因組有哪些特點答：每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；遠大于原核基因組，結構復雜,基因數(shù)龐大；真核生物基因轉錄為單順反子；有大量重復序列;真核基因為斷裂基因;非編碼序列多于編碼序列; 功能相關基因構成各種基因家族。9.PCR 反應條件的優(yōu)化應注意哪些環(huán)節(jié)？答：變性溫度和時間： 92-95，富含G和C的序列，可適當提高，但過高或時間過長都會導致酶活性損失；退火溫度與時間： 引物中G、 C含量高、 長度長并與模板完全配對時，應提高溫度。溫度越高，產(chǎn)物特異性越高，通常37-55、 1-2分鐘；延伸溫度和時間：

39、72，接近Taq酶的最適75；延伸時間過長會導致產(chǎn)物非特異性增加。但對低濃度的目的序列，則可適當增加時間；循環(huán)次數(shù)： 循環(huán)過多，非特異性產(chǎn)物大量增加10.用于基因表達定量研究的方法有哪些？答：蛋白表達水平的研究：定量檢測分析：western biltting、ELISA、HPLC蛋白質功能分析：蛋白質亞細胞定位分析：熒光免疫技術；蛋白質相互作用研究：酵母雙雜交、免疫共沉淀、熒光共振能量轉移；酶活性檢測：ELISA、HPLC。mRNA表達水平檢測：半定量RT-PCR，Northern blot，實時熒光定量PCR。11.同一生物不同的組織細胞的基因組成和表達是否相同？為什么？答：基因表達調控具有

40、時間和空間特異性，在多細胞生物，個體發(fā)育的各個階段，基因表達嚴格按細胞分化、個體發(fā)育的順序開啟或關閉；在同一生長發(fā)育階段，基因表達在不同組織細胞空間順序出現(xiàn)，基因表達不相同。12.與原核基因結構相比，真核基因結構有何特點？答：真核生物與原核生物基因組特點的異同：真核生物基因分布在多個染色體上，而原核生物只一個染色體；真核生物基因組遠大于原核生物基因組；真核生物細胞中DNA與組蛋白和大量非組蛋白結合，并有核膜將其與細胞質隔離，結果真核細胞的轉錄和翻譯在時間上和空間上都是分離的，而原核細胞的基因轉錄和翻譯是同步的；真核生物的基因是不連續(xù)的，中間存在不被翻譯的內含子序列，而原核生物幾乎每一個基因都是

41、完整的連續(xù)的DNA片段；真核生物基因組中非編碼序列遠多于編碼序列；真核生物基因組存在重復序列，重復次數(shù)從幾次到幾百萬次不等；真核生物基因組的復制起點多，缺少明顯的操縱子結構，而原核生物基因組一般是一個復制子；真核生物與原核基因組中存在轉座因子。13.什么叫反式作用因子？與順式作用元件結合部位的結構形式有哪些？答：是指能直接或間接的識別或結合在各類順式作用元件核心序列上參與調控靶基因轉錄效率的蛋白質。大多數(shù)真核轉錄調節(jié)因子由某一基因表達后，可通過另一基因的特異的順式作用元件相互作用，從而激活另一基因的轉錄，這種調節(jié)蛋白稱反式作用因子。其DNA結構域的常見形式有：鋅指結構、堿性亮氨酸拉鏈、堿性螺旋

42、-環(huán)-螺旋。14.什么叫順式作用元件？常見的順式作用元件有哪些？答：基因中能影響基因表達，但不編碼 RNA 和蛋白質的 DNA 序列。順式作用元件主要包括啟動子、增強子、負調控元件等。15.列出5中常用的分子生物學技術并簡述各自原理？答：PCR，Sanger雙脫氧鏈終止法，等電聚焦，Southern 雜交，Northern 雜交。16.DNA芯片的原理？答：是以斑點雜交為基礎建立的高通量檢測基因表達的一種方法，它是通過某些特殊的微加工技術將大量已知序列的寡核苷酸或cDNA探針有序的固定于固相支持物表面作為探針，然后與標記的待測核酸進行雜交，通過對雜交信號的檢測分析，獲得待測核酸的各種序列及表達

43、信息。17.PCR的基本原理及反應條件？答：基本原理是以待擴增的DNA分子為模板，以一對人工合成的、分別與模板的5端及3端互補的單鏈寡核苷酸作為引物，在耐熱DNA聚合酶的催化下，按照半保留復制的原則合成兩個子代DNA；接著以子代DNA為模板，再次進行合成，如此反復循環(huán)數(shù)十次，最終將原是模板放大數(shù)百萬倍。18.Sanger雙脫氧鏈終止法的原理?答：DNA合成是在DNA聚合酶的催化下，以單鏈或雙鏈DNA模板，以四種2-脫氧核苷三磷酸(dNTP)為底物，在引物或新和成子鏈的3-OH末端依次連接上新的脫氧核苷一磷酸，使新生鏈不斷延長。DNA分子中核苷酸是通過3,5磷酸二酯鍵相互連接。如果在底物中加入2

44、,3-雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。那么當ddNTP摻入到新生鏈中時，由于ddNTP沒有3-OH，不能與其他dNTP上的磷酸集團形成磷酸二酯鍵，DNA新鏈的合成就會終止，此即為雙脫氧末端終止法測序的基本原理。四、論述題1 雙脫氧末端終止法測序的基本步驟包括哪些？答：1)分離待測核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是雙鏈，也可以是單鏈。2)在4只試管中加入適當?shù)囊?、模板?種dNTP(包括放射性標記dATP，例如?32 PdATP和DNA聚合酶（如以RNA為模板，則用反轉錄酶），再在上述4只管中分別加入一種一定濃度的ddNTP(雙脫氧核苷酸)。3)與單鏈模板（如以雙鏈作模板，要作

45、變性處理)結合的引物，在DNA聚合酶作用下從5端向3端進行延伸反應，32P隨著引物延長摻入到新合成鏈中。當ddNTP摻入時，由于它在3位置沒有羥基，故不與下一個dNTP結合，從而使鏈延伸終止。ddNTP在不同位置摻入，因而產(chǎn)生一系列不同長度的新的DNA鏈。4)用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳同時分離4只反應管中的反應產(chǎn)物，由于每一反應管中只加一種ddNTP(如ddATP)，則該管中各種長度的DNA都終止于該種堿基(如A)處。所以凝膠電泳中該泳道不同帶的DNA 3 末端都為同一種雙脫氧堿基。5)放射自顯影。根據(jù)四泳道的編號和 每個泳道中DNA帶的位置直接從自顯影圖譜上讀出與模板鏈互補的新鏈序列。2 真核 mRNA 選擇性剪接的方式有那些？舉例說明其基本生物學意義是什么？答：（1）選擇性