實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部分

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)課程實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.的基本實(shí)驗(yàn)操作2.皮膚移植試驗(yàn)、（或）摘除術(shù)3.大鼠實(shí)驗(yàn)的基本操作4.大鼠性周期觀察1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)實(shí)際操作，掌握的一般操作，的抓取和固定、鑒定、編號(hào)、去毛、給藥、采血、麻醉、處死，尤其是染色法編號(hào)、灌胃、眼球摘除法采血、腹腔注射、脊椎脫臼法處死。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：4 只（2 雌 2 雄）三、實(shí)驗(yàn)步驟1、 抓取和固定2、鑒定3、 編號(hào)（染色法）4、 去毛（脫毛劑法）5、 給藥：消化道、腹腔注射、尾靜脈注射6、 采血：眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 處死：脊椎脫臼法、過(guò)量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系統(tǒng)：9.1.1 雄性：、鼠蹊腺（在

2、下方，膠質(zhì)狀，透明）9.1.2 雌性：雙角、9.2 腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、抓取和固定：抓?。鹤サ奈哺抗潭ǎ鹤プ〉奈哺?，讓在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部，右手的拇指和食指抓住兩耳及其間的頸部皮膚，小指和無(wú)名指將尾巴固定在手掌面。2、鑒定：觀察與間的距離和二者之間的毛發(fā)。雄性：距離長(zhǎng)，毛發(fā)密（和其2實(shí)驗(yàn)一的基本實(shí)驗(yàn)操作他部位一樣）；雌性：距離短，毛發(fā)稀疏。3、 編號(hào)：3.1 染色法：3.1.1 用（黃色）在背面染色3.1.2 逆毛發(fā)生長(zhǎng)方向染色，自毛根開(kāi)始3.1.3 可編 1-10 號(hào)（10 號(hào)為不編號(hào)）3.2 去毛：脫毛劑：8% Na2S，自毛發(fā)根部涂抹3.3 給藥：3.3

3、.1 灌胃法：左手抓取固定后，右手持特制灌胃針，沿一側(cè)口角進(jìn)針，緊貼咽后壁，頭后仰以便伸直消化道，進(jìn)針 2/3 后灌生理鹽水 0.5ml3.3.2 注射給藥：3.3.2.1 腹腔注射：3.3.2.1.1 從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針3.3.2.1.2 進(jìn)針時(shí)針與腹部成 45°。進(jìn)針后稍微晃動(dòng)針，如無(wú)粘滯感則可注射3.3.2.2 尾靜脈注射：一人固定，另一人用左手中指和拇指將尾拉直，食指托住尾部，后右手持帶 4 號(hào)針頭的注射器在圖示 A（背面，實(shí)為動(dòng)脈）位置進(jìn)針注射 0.5ml 生理鹽水。注射完畢拔出針頭，用無(wú)菌棉球止血。尾動(dòng)脈細(xì)小，且貼近皮膚，未注射。尾靜脈切面圖33.4 采血3.4.1 ：從

4、眼角內(nèi)側(cè) 0.5cm 處進(jìn)針。（右圖）3.4.2 眼球摘除法：左手抓取用固定，右手持彎頭鑷在眼球根部將眼球摘除，頭朝下，眼眶內(nèi)血迅速流出。3.5 麻醉：0.5%腹腔麻醉：本重 25g，按 100mg/kg 的藥量給藥，8 分鐘麻醉成功3.6 處死：3.6.1 脊椎脫臼法：按住頭部，將尾根部向后上方以短促的拉即可致死3.6.2 過(guò)量麻醉：追加 0.5%過(guò)量（5ml）腹腔麻醉3.7 解剖：3.7.1 生殖系統(tǒng)：3.7.1.1 雄性：尋找到、鼠蹊腺3.7.1.2 雌性：雙角、3.7.2 腎上腺：米粒大小3.7.3 胰腺：位于胃下方，類(lèi)似于脂肪組織，渾濁狀3.7.4 膽囊：芝麻大小，淺綠色，半透明3.

5、7.5 甲狀腺：緊貼環(huán)狀軟骨4五、實(shí)驗(yàn)討論1、抓取的感受：性情較溫順，一般咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在向前掙扎爬行時(shí)，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將置于左手掌心、無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將完全固定。在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中，如進(jìn)行尾靜脈注射時(shí)，可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定，如尾靜脈注射架或粗的試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作，如進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)則必須先行無(wú)痛處死后再進(jìn)行。2、尾靜脈注射感受：首先，注射前尾巴用稍熱的水浸泡幾分鐘，有利于注射；其次，先遠(yuǎn)后盡，不要一開(kāi)始就從尾根部，那樣失敗了不好辦； 再次，進(jìn)后注意保持，針尖很

6、容易刺穿的。尾靜脈就在尾巴的正左右兩邊，先用用力擦，可以去掉部分角質(zhì)，然后按住近心端讓充血，就很容易看到了。進(jìn)針大概 12 厘米是最合適的。尾靜脈注射時(shí)，可用 4550 度的溫水浸潤(rùn)半分鐘或用擦拭，可使擴(kuò)張，同時(shí)也可軟化表質(zhì)。以左手拇指和食指鼠尾，使靜脈充盈，中指幫助無(wú)名指和小指捏住鼠尾末梢，右手持注射器（連 5 號(hào)細(xì)針頭），針頭與靜脈夾角一般小于 30 度，從距尾尖 2 - 3厘米處進(jìn)針，此處皮薄易進(jìn)入，先抽回血，見(jiàn)到血后再緩慢注入少量藥液，如無(wú)阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。一般推注速度為 0.05 - 0.10ml/秒，一次注入量為 0.05 -0.25ml/10g 體重。如反復(fù)注

7、入，應(yīng)盡可能從尾末端開(kāi)始，以后根部方向移動(dòng)注射。5一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握近交系常用的皮膚移植試驗(yàn)（尾背植皮法，尾尾植皮法）。2. 掌握摘除術(shù)和大鼠摘除術(shù)二、實(shí)驗(yàn)步驟1、近交系常用的皮膚移植試驗(yàn)1.1 尾背植皮法1.2 尾尾植皮法2、摘除術(shù)2.1 固定、麻醉2.2摘除三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、近交系常用的皮膚移植試驗(yàn)1.1 尾背植皮法：1.1.1 將近交系（受體）固定后（已麻醉）背部剪毛，（約 1.5cm×1.5cm 大?。?5%常規(guī)。用眼科剪在此部位剪開(kāi)一個(gè) 0.3cm×0.3cm 大小的方形洞備用。1.1.2 將近交系（供體）固定后（已麻醉），75%常規(guī)鼠尾。用眼科剪沿尾靜脈剪開(kāi)

8、一條縫，用止血鉗將皮膚剝下，剪成 0.5cm×0.5cm 大小，刮掉皮片上的結(jié)締組織。1.1.3 將供體皮片（0.5cm×0.5cm 大?。└采w在受體背部的方形洞（0.3cm×0.3cm大小）內(nèi)，鋪平，用棉球吸去滲出的血液，使植皮緊貼受體的創(chuàng)面，并與宿主的邊緣密切吻合。1.1.4 無(wú)菌紗布覆蓋植皮區(qū)，膠布包扎（此步驟本實(shí)驗(yàn)中省略）。1.1.5 13觀察結(jié)果6實(shí)驗(yàn)二皮膚移植試驗(yàn)、（或）摘除術(shù)1.2 尾尾植皮法（本實(shí)驗(yàn)中為自體尾尾移植）：1.2.1 將近交系固定后（已麻醉），75%常規(guī)尾部皮膚。1.2.2 固定鼠尾的根部，用 4 號(hào)手術(shù)刀在鼠尾背部切開(kāi)一 0.5cm&

9、#215;0.5cm 大小的皮片，盡量不損傷局部，用止血鉗將皮膚剝下。1.2.3 將皮片旋轉(zhuǎn) 180°，鑲嵌在創(chuàng)面上，棉球吸去局部滲出的血液和組織液，使其盡可能緊貼，可以不包扎。1.2.4 13觀察結(jié)果（100 天）2、摘除術(shù)2.1 固定、麻醉：選雌性，取左側(cè)臥位，以左腹外側(cè)區(qū)（左肋弓下緣）為手術(shù)區(qū)，局部剪毛，75%兩遍后，用 0.5%以 100mg/kg 的劑量（本實(shí)驗(yàn)：0.5ml）進(jìn)行腹腔麻醉，5 分鐘后靜臥于手術(shù)臺(tái)上，呼吸深大而有節(jié)律，頻率略快，四肢肌肉松弛，麻醉成功。2.2摘除：用手術(shù)刀在左肋緣下，取腹正中線平行方向切開(kāi)皮膚 1cm，腹腔內(nèi)容物。撥開(kāi)腸管，找到右腎。在右腎下方

10、找到右側(cè)和右側(cè)角。游離右側(cè)并摘除。局部，縫合腹膜、腹壁肌肉和皮膚。按上述摘除左側(cè)（另一位同學(xué)操作）。四、實(shí)驗(yàn)討論1、近交系常用的皮膚移植試驗(yàn)1.1 皮膚移植實(shí)驗(yàn)是用于鑒定近交系動(dòng)物組織相容性是否一致的簡(jiǎn)單而可靠的方法。1.2 尾背植皮法：將尾部皮膚移植到同品系的異體的背部，通過(guò)觀察移植皮片和背部其他區(qū)域的毛發(fā)稀疏和皮膚光澤異同來(lái)鑒定二者的組織相容性。如果組織相容性好，植皮色澤與周?chē)恢?，沒(méi)有充血或炎癥，移植皮片光澤。若組織相容性基因不純合，尾后 13被排斥，植皮脫落，背部留下一塊。另外，供體皮片應(yīng)略大于受體創(chuàng)面以充分吻合，以免因皮片邊緣缺血壞死而導(dǎo)致愈合后創(chuàng)面周邊皮膚不連續(xù)。1.3 自體尾尾植

11、皮法：可以鑒定植皮的脫落是否是手術(shù)失敗而造成。移植將皮片旋轉(zhuǎn) 180°，以利于術(shù)后通過(guò)毛發(fā)生長(zhǎng)的方向觀察植皮是否存活。72、摘除術(shù)、大鼠摘除術(shù)2.1摘除術(shù)：進(jìn)入腹腔后，可以先找到腎臟。然后在腎臟下方查找并摘除。2.2 行或摘除術(shù)將兩側(cè)的或均摘除。8實(shí)驗(yàn)三 大鼠實(shí)驗(yàn)的基本操作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)實(shí)際操作，掌握大鼠的一般操作去毛、給藥、采血、麻醉、處死。二、實(shí)驗(yàn)步驟1、 抓取和固定，大鼠的抓取和固定、鑒定、編號(hào)、2、鑒定3、 編號(hào)（染色法）4、 去毛（剪毛）5、 給藥：消化道、腹腔注射、尾靜脈注射6、 采血：眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 處死：脊椎脫臼法、

12、過(guò)量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系統(tǒng)：9.1.1 雄性：9.1.2 雌性：雙角、鼠蹊腺（在下方，膠質(zhì)狀，透明）9.2 腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、抓取和固定：左手抓住大鼠的尾根部，右手的食指和無(wú)名指卡住大鼠頭部?jī)蓚?cè)，右手的拇指和食指同時(shí)捏住大鼠的左上肢?；蛞话炎プ☆^部?jī)蓚?cè)及雙上肢根部間的距離和二者之間的毛發(fā)：2、鑒定（同）：觀察與2.1 雄性：距離長(zhǎng)，毛發(fā)密（和其他部位一樣）2.2 雌性：距離短，毛發(fā)稀疏3、編號(hào)：3.1 染色法（最常用）：3.1.1 用3.1.2 逆毛發(fā)生長(zhǎng)方向染色，自毛根開(kāi)始3.1.3 因?yàn)榇笫篌w形大，一般一籠內(nèi)養(yǎng) 15 只，15 號(hào)編號(hào)同3.2 同時(shí)結(jié)合籠子

13、的編號(hào)加以區(qū)別4、 去毛：4.1 剃毛：可用電動(dòng)剃須刀剔除大鼠毛發(fā)4.2 剪毛：剪毛之前先用濕潤(rùn)5、給藥：（實(shí)驗(yàn)一所示），采用灌胃法：左手抓取固定后，雙下肢及尾部另請(qǐng)一人協(xié)助。右手持特制灌胃針，沿一側(cè)口角進(jìn)針，緊貼咽后壁，頭后仰以便伸直消化道，順利進(jìn)針后灌生理鹽水 0.5ml 6、注射：6.1 腹腔注射：6.1.1 妥善固定大鼠后，從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針6.1.2 進(jìn)針時(shí)針與腹部成 45°，進(jìn)針后稍微晃動(dòng)針并回抽，如無(wú)粘滯感且沒(méi)有回血?jiǎng)t可注射6.2 肌肉注射：大鼠下肢肌肉發(fā)達(dá)，可在大腿外側(cè)進(jìn)行肌肉注射6.3 尾靜脈注射：一人固定大鼠，另一人用左手中指和拇指將尾拉直，食指托住尾部，11后右

14、手持帶 4 號(hào)針頭的注射器在圖示 A（背面，實(shí)為動(dòng)脈）位置進(jìn)針注射 0.5ml 生理鹽水。注射完畢拔出針頭，用無(wú)菌棉球度較大。止血。尾動(dòng)脈細(xì)小，且貼近皮膚，注射難大鼠尾靜脈切面圖7、 采血：7.1 眼眶后靜脈叢：從眼角外下方或前下方進(jìn)針，然后立即拔針，用7.2 眼球摘除法：未嘗試毛細(xì)管取血。7.3 尾靜脈采血：大鼠尾部使靜脈充盈，用注射針頭刺破后，擠壓尾部取血，血量較少，僅8、麻醉：到一滴。0.5%9、處死：腹腔麻醉：本雌性大鼠重 350g，按 100mg/kg 的藥量給藥，10 分鐘麻醉9.1 脊椎脫臼法：按住頭部，將尾根部向后上方以短促的較大的拉即可致死9.2 過(guò)量麻醉：追加 0.5% 1

15、0、解剖：10.1 顱部：過(guò)量（2ml）腹腔麻醉10.1.1 視交叉：將大鼠過(guò)量麻醉致死后，剪開(kāi)顱頂部皮膚，顱骨，用鑷子咬除顱頂部骨，充分大腦半球。用鑷子從額部將腦組織翻至枕后，可見(jiàn)位于顱底的視交叉、視神經(jīng)和視束（白色10.1.2 垂體：夾斷視神經(jīng)，充分粒大小。10.2 頸部：）顱底，可見(jiàn)位于垂體窩中的垂體，色白，米甲狀腺：緊貼環(huán)狀軟骨，較10.3 腹部：10.3.1 腎上腺：米粒大小明顯。10.3.2 胰腺：位于胃下方，類(lèi)似于脂肪組織，渾濁狀10.3.3 膽囊：缺如10.3.410.3.5：大鼠：體積較大為雙角型，雙側(cè)被大量脂肪組織所包裹1211、稱(chēng)重：胃肝臟脾臟腎臟心臟肺雙角臟器雙腎重量(

16、g)左：1.8 右：1.6 左：1.7 右：1.7 1.816.4臟器肺臟重量(g)左：0.9 右：0.7 1.74.21.3心臟胃(含內(nèi)容物)脾臟肝臟四、實(shí)驗(yàn)討論1、 抓取和固定：（1） 大鼠牙齒和爪子銳利，個(gè)頭大，抓取時(shí)要（2） 初學(xué)者為確保安全，可佩戴棉紗手套。，不要被其抓傷或咬傷。（3） 提尾部靠近尾根部提取，以防大鼠身體搖晃，或扭頭過(guò)來(lái)咬人。（4）2、不容易固定時(shí)，可另請(qǐng)另一人協(xié)助操作。鑒定：同。另外健康雄性大鼠的體重明顯超過(guò)同齡雌性大鼠4、編號(hào)：（1）常用染色法，也可用專(zhuān)門(mén)打孔器進(jìn)行耳部打孔編號(hào)。（2）大鼠體形大，籠養(yǎng)數(shù)量有限，可結(jié)合染色和籠子編號(hào)以區(qū)別，方便實(shí)驗(yàn)。5、給藥：采用灌

17、胃法：（1）為最常用的給藥。（2）待固定穩(wěn)當(dāng)后再進(jìn)針。（2）如進(jìn)針不順，須暫停操作，以免激若大鼠，妨礙實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。6、注射：6.1 腹腔注射：注意妥善固定，最好一人固定頭部和上肢，另請(qǐng)一人固定雙下肢和尾部， 以免進(jìn)針時(shí)大鼠掙扎妨礙操作6.2 肌肉注射：要選擇肌肉豐滿耳無(wú)大通過(guò)的大腿外側(cè)進(jìn)針6.3 尾靜脈注射：尾靜脈鱗片厚，雖然肉眼可見(jiàn)，但率低，一般少用。137、采血尾靜脈采血：對(duì)動(dòng)物損傷小，采血后率低，適用于大鼠的血糖監(jiān)測(cè)。8、 麻醉：對(duì)于不同，由于對(duì)的耐受性不同，在麻醉過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)檢查動(dòng)物的呼吸和外周血液循環(huán)、心跳等反應(yīng)，劑量不夠時(shí)可適當(dāng)加量9、 處死選擇原則：（1）盡量避免因處死不當(dāng)而造

18、成病理?yè)p害，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（2）盡量使動(dòng)物快速、安靜、無(wú)痛苦10、解剖：（1）顱部：大鼠視神經(jīng)發(fā)達(dá)，很容易找到視交叉。（2）膽囊：缺如，這是與的不同之處。14實(shí)驗(yàn)四 大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD 大鼠 1 只（雌）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 通過(guò)實(shí)際操作掌握大鼠涂片的制作和性周期觀察。2 通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握大鼠急性肺水腫模型的建立，了解誘發(fā)型動(dòng)物模型的制作?！緦?shí)驗(yàn)步驟】一、大鼠性周期觀察1、 固定大鼠：左手抓取大鼠，食指和中指卡緊大鼠頸部，拇指和無(wú)名指握住胸部，小指固定腹部，右手拉住尾部和雙下肢，稍用力后拉，充分雌鼠的。2、液、涂片：另一人用滴管吸生理鹽水 2 滴，大鼠深部，沖洗 3 次，

19、吸出沖洗液，分別滴 1 滴在兩個(gè)載玻片上，用第 3 塊玻片推片，自然晾干（10 分鐘）。3、 染色和鏡檢：用染液染色 30 分鐘，細(xì)流水沖洗，然后在顯微鏡下觀察。二、 大鼠急性肺水腫模型的建立1、 氯化銨腹腔注射：按上述固定大鼠后，抽取 6%氯化銨 3.5ml（本大鼠重量 360g，按1ml/100g 藥量），從左側(cè)下腹部進(jìn)針，無(wú)粘滯感后注射氯化銨。8 分鐘后僅見(jiàn)大鼠活動(dòng)減少無(wú)其他異常改變，又追加 6%氯化銨 0.5ml2、 尸體解剖：大鼠出現(xiàn)興奮、肌肉震顫，繼而后立即尸體解剖，直接打開(kāi)胸腔，結(jié)扎交叉稍上方，自結(jié)扎處上方剪斷，游離周?chē)M織和心臟，取出肺臟，觀察形態(tài)學(xué)改變，并在臺(tái)式稱(chēng)上稱(chēng)重。3、

20、 計(jì)算肺重量系數(shù)=肺臟重量（g）/ 大鼠體重（g）×100%。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】一、 大鼠性周期觀察脫落細(xì)胞涂片、染色、鏡檢：顯微鏡下看到大鼠間期的部分改變：有核細(xì)胞和少量上皮細(xì)胞，也看到少量胞。右圖所示為 20×顯微鏡下觀察到的情況。15二、 大鼠急性肺水腫模型的建立1. 腹腔注射 6%氯化銨 3.5ml 后大鼠的活動(dòng)明顯減少，呼吸急促，出現(xiàn)肌無(wú)力，靜俯于桌上。20 分鐘后首先出現(xiàn)張口呼吸，點(diǎn)頭樣呼吸，口唇，鼻翼，約 15 秒鐘后出現(xiàn)肌肉震顫，持續(xù)約 30s，然后發(fā)生、，最后死于呼吸衰竭。如下圖所示。2. 尸體解剖：肺腫脹，包膜緊張，大部分肺表面出現(xiàn)暗紅色斑塊，切開(kāi)有少量紅色樣

21、液體流出;胸腔內(nèi)有液體積聚，如下圖。3. 將結(jié)扎后，稱(chēng)取全肺質(zhì)量，為 4.3g，實(shí)驗(yàn)前稱(chēng)取大鼠質(zhì)量為 385g則本實(shí)驗(yàn)中，16肺重量系數(shù)=肺臟重量（g）/ 大鼠體重（g）×100%=4.3g/385g×100%=1.11%1%【實(shí)驗(yàn)討論】1 大鼠性周期觀察a) 大鼠性周期為 45 天，由于大鼠有晝伏夜行的習(xí)性，一般在下午不能看到大鼠的期。本大鼠處于間期b) 大鼠的一般在 24 小時(shí)后脫落。所以觀察期間籠具必須保持整潔，不能放置刨木花?？吹秸f(shuō)明交配，受孕率為 7080%。c) 大鼠春秋兩季的受孕率較兩季高。d) 大鼠性周期脫落細(xì)胞變化情況如下表所示表 1 大鼠性周期脫落細(xì)胞變化情況后期階段前期期間期第一階段第二階段胞，有大量圓形有大量角化上少量角化無(wú)角化上皮細(xì)核、無(wú)核上皮脫落細(xì)核上皮細(xì)胞，皮細(xì)胞（無(wú)